1、第三章 細(xì)胞生物學(xué)研究方法第一節(jié) 顯微技術(shù) 最大分辨率人眼： 0.2mm普通光學(xué)顯微鏡： 0.2m電子顯微鏡： 0.2nm光學(xué)顯微鏡：以可見光（或紫外線）為光源。電子顯微鏡：以電子束為光源。構(gòu)成： 照明系統(tǒng) 光學(xué)放大系統(tǒng) 機(jī)械裝置原理：經(jīng)物鏡形成倒立實(shí)像 經(jīng)目鏡進(jìn)一步放大成像。（一）普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡的最大分辨率 0.2m人眼的最大分辨率 為0.2mm（二）熒光顯微鏡特點(diǎn)：光源為紫外線，波長較短；分辨力高于普通顯微鏡；有兩個(gè)特殊的濾光片；用于觀察能激發(fā)出熒光的結(jié)構(gòu)。用途：免疫熒光觀察、基因定位、疾病診斷。（三）激光共聚焦掃描顯微境 用激光作光源，逐點(diǎn)、逐行、逐面快速掃描。能顯示細(xì)胞樣

2、品的立體結(jié)構(gòu)。分辨力是普通光學(xué)顯微鏡的3倍。用途類似熒光顯微鏡，但能掃描不同層次，形成立體圖像。把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。環(huán)形光闌：位于光源與聚光器之間。相位板：物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4。（四）相差顯微鏡（五）倒置顯微鏡物鏡與照明系統(tǒng)顛倒，前者在載物臺之下，后者在載物臺之上，用于觀察培養(yǎng)的活細(xì)胞，通常具有相差物鏡，有的還具有熒光裝置。 （六）電子顯微鏡原理: 以電子束作光源，電磁場作透鏡。分辨力0.2nm，放大倍數(shù)可達(dá)百萬倍。用于觀察超微結(jié)構(gòu)（ultrastructure），即小于0.2m

3、、光學(xué)顯微鏡下無法看清的結(jié)構(gòu)，又稱亞顯微結(jié)構(gòu)（submicroscopic structures）。1 透射電子顯微鏡2、掃描電子顯微鏡其它常用細(xì)胞生物學(xué)方法細(xì)胞分離技術(shù)流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成分顯示免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)單克隆抗體的制備胚胎干細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因動物1 流式細(xì)胞術(shù)2 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)3 免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)4 單克隆抗體技術(shù)英國人Kohler和Milstein 1975將兩種細(xì)胞雜交而創(chuàng)立了單克隆抗體技術(shù)，獲1984年諾貝爾獎。正常淋巴細(xì)胞（如小鼠脾細(xì)胞）具有分泌抗體的能力，但不能長期培養(yǎng)，瘤細(xì)胞（如骨髓瘤）可以在體外長期培養(yǎng)，但不分泌抗體。5 胚胎干細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因動物顯微技術(shù)流