1、DBt海市地方標準DB31/20102012食品安全地方標準火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測定液相色譜-串聯質譜法2012-10-26實施2012-10-26發布上海市食品藥品監督管理局發布DB31/20102012 I本標準的附錄A、附錄B為資料性附錄。DB31/20102012 食品安全地方標準火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測定液相色譜-串聯質譜法1范圍本標準規定了火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的液相色譜-串聯質譜測定方法。本標準適用于火鍋醬料、湯料、調味油和固體類調味粉等火鍋食胡中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因、蒂巴因的測定。2原理樣品用

2、水或鹽酸溶液分散均勻、乙睛提取后，經鹽析分層，乙睛提取液用鍵合硅固相萃取吸附劑凈化，離心，液相色譜一串聯質譜儀檢測，罌粟堿、那可丁和蒂巴因采用外標法定量，嗎啡和可待因采用內標法定量。3試劑與材料除非另有規定，本方法所用試劑均為分析純或以上規格，水為GB/T6682規定的一級水。1甲醇(CH3OH)：色譜純。3.2乙睛(CH3CN)：色譜純。3甲酸(HCOOH)：色譜純。3.4鹽酸(HCl)o3.5甲酸鍍(HCOONHt)o3.6氫氧化鈉(NaOH)。3.7無水硫酸鎂(MgSOj：研磨后在500C馬弗爐內烘5h,200C時取出裝瓶，貯于干燥器中，冷卻后備用。3.8無水醋酸鈉(CHsCOONa)。

3、3.9乙二胺-N-內基硅烷(PSA)填料：粒度4070pm。3.10C18填料:粒度4050pmo3.11鹽酸溶液(O.lmol/L)：量取鹽酸(3.4)9mL,加水至1L,搖勻備用。3.12甲酸鞍溶液(lOmmoVL)：準確稱取1.26gI酸技(3.5)溶解于適量水中,定容至2L,混勻后備用。3.13甲酸甲醇溶液(0.5%):量取甲酸(3.3)lmL,置T200mL容量瓶中,用甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻備用。3.14氫氧化鈉溶液(1mol/L)：準確稱取40g氫氧化鈉(3.6)溶解丁適量水中，定容至1L,混勻后備用。3.15鹽酸罌粟堿、嗎啡、那可丁、磷酸可待因和蒂巴因標準品：純度不少T-98

4、%o3.16內標物質：嗎啡-D3,可待因-D3。3.17標準儲備液(1.0mg/mL)：精密稱取鹽酸罌粟堿、那可丁、蒂巴因、嗎啡和磷酸可待因標準品適量，用甲酸一甲醇溶液(3.13)配制成罌粟堿、那可丁、蒂巴因、嗎啡和可待因的濃度均為1.0mg/niL的溶液，作為標準儲備液。4C避光保存，有效期三個月。3.18混合標準品溶液：精密吸取濃度為l.OinginL的罌粟堿、那可丁、蒂巴因儲備液各1.0mL和濃度為1.0mg/mL的嗎啡、可待因儲備溶液各5mL于20mL容量瓶中，用乙睛(3.2)定容至刻度，搖勻，即得含罌粟堿、那可丁、蒂巴因濃度為50pg/mL和嗎啡、可待因濃度為250g&niL的混合標

5、準胡溶液:4C避光保存，有效期三個月。3.19同位素內標工作溶液(5.0卩gmL)：分別精密吸取內標物質(3.16)適量，用甲醇(3.1)配制成嗎啡-D3,可待因-D3的濃度均為5-0卩ginL的溶液。4C避光保存，有效期三個月。3.20標準工作溶液的配制：分別精密吸取上述混合標準品溶液(3.18)和同位索內標工作溶液(3.19J適吊:，用乙膳(3.2)稀釋成罌粟堿、那可丁、蒂巴因濃度為l.Ong/mL、2.0ng/mL5.0ng/mL10.0ngiiiL.20.0ngmL、50.0ng/mL,嗎啡、可待因濃度為5.0ng/mL.10.0ngniL、25.0ng/mL50.0ng/mL、100

6、ng/mL.250ngiiiL的系列標準工作溶液，內標溶液濃度均為50.0ng/mL。臨用新配。3.21甲酸乙睛溶液(0.1%)：量取甲酸(3.3)ImL,加乙睛(3.2)稀釋至1L,搖勻，過濾。3.22甲酸甲酸鞍溶液(0.1%):量取甲酸(3.3)ImL,加甲酸鞍溶液(3.12)稀釋至1L,搖勻，過濾。3.23濾膜:0.22pirn(尼龍)。24pH試紙：pH114。4儀器和設備1液相色譜-串聯質譜儀：帶電噴霧離子源(ESI)。2分析天平：感量為0.00001g和O.Olg。4.3離心機：10000轉/分鐘。4.4超聲波清洗器。4.5渦旋混合器。5分析步驟1提取5.1.1火鍋醬料、湯料、調味

7、油稱取2g試樣(精確至0.01g)J-50mL聚四氟乙烯具塞離心管中，加入150pL同位素內標工作液,再加入5mL水，振搖使分散均勻(醬類樣品必要時可加10mL水),加入15mL乙睛(3.2),渦旋振蕩lmin,加入6g無水硫酸鎂(3.7)和1.5g無水醋酸鈉(3.8)的混合粉末(或以相當的市售商站代替)，迅速振搖，渦旋振蕩1min,以4000轉/分鐘離心5min,取上清液待凈化。5.1.2固體類調味粉稱取2g試樣(精確至0.01g)J-50mL聚四氟乙烯具塞離心管中，加入150pL同位素內標工作液,再加入5mL鹽酸溶液(3.11)溶液，超聲處理30分鐘，用氫氧化鈉溶液調節pH值呈中性，加入1

8、5mL乙睛(3.2),渦旋振蕩1mm,加入6g無水硫酸鏤(3.7)和1.5g無水醋酸鈉(3.8)的混合粉末(或以相當的市售商品代替)，迅速振搖，渦旋振蕩1mm,以4000轉/分鐘離心5mill,取上清液待凈化。5.2凈化稱取50mg(5mg)PSA(3.9),100mg(5mg)無水硫酸鎂(3.7),100mg(5mg)C18粉末（3.10）T-2mL聚四氟乙烯具塞離心管中（或以相當的市售商品代替），移取1.5mL上清液（5.1）至此離心管中，渦旋混合1mm，以10000轉/分鐘離心2min,移取上清液，0.22pm濾膜（3.23）過濾，取濾液待測。6測定1參考液相色譜條件a）色譜柱：BEHH

9、ILIC（粒徑1.7pm,2.1x100mm）,或相當者：b）進樣量：5pL；c）柱溫：40C：d）流速：0.3mLinm；e）流動相:A相（3.21）:含01%甲酸的乙睛,B相（3.22）:含01%甲酸的lOmmoVL甲酸鞍溶液，按表1進行梯度洗脫。表1梯度洗脫程序時間/minA相/%B+11/%0.0090100.3090101.0080202.5080203.0090106.0090106.2參考質譜條件a）離子化方式：電噴霧電離：b）掃描方式：正離子掃描；c）檢測方式：多反應監測（MRM）；霧化氣、氣簾氣、輔助氣、碰撞氣均為高純氮氣：使用前應調節各參數使質譜靈敏度達到檢測耍求,參考條件

10、見附錄A。6.3定性測定在相同實驗條件下測定標準溶液和樣品溶液，如果樣品溶液中檢出的色譜峰的保留時間與標準溶液中的某種組分色譜峰的保留時間一致，樣甜溶液的定性離子相對豐度比與濃度相當標準溶液的定性離子相對豐度比進彳J：比較時，相對偏差不超過表2規定的范圍，則可判定樣站中存在該組分。表2定性確定時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度/%502050102010允許的相對偏差/%202530506.4定量測定 DB31/20102012在儀器最佳狀態下，對標準工作液進樣，以罌粟堿、那可丁和蒂巴因的色譜峰面積為縱坐標，罌粟堿、那可丁和蒂巴因的濃度為橫坐標繪制標準工作曲線，外標法定最：以嗎啡和可待因

11、的峰面積與相應內標物峰面積的比值為縱坐標，嗎啡和可待因的濃度為橫坐標繪制標準匚作曲線，內標法定量。在上述色譜和質譜條件下，7種化合物的標準物質提取離子（定量）質譜圖參見附錄B。6.5空白試驗除不稱取樣品外，按5.1、5.2步驟進行后測定。7分析結果的表述樣品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴的含量按下式計算：錯誤！未找到引用源。（1）式中：X一試樣中各待測物的含量，單位為微克每克c-從標準曲線中讀出的供試站溶液中各待測物的濃度，單位為微克每升（pg/L）；V一樣液的提取體積，此處為15,單位為亳升（mL）；m試樣的質量，單位為克（g）。計算結果保留三位有效數字。8方法精密度在垂復性條件下獲得

12、的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的20%。9方法檢出限和定量限本標準罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的檢出限分別為8卩gleg、40卩g/kg、8pg,4cg、40pg/kg.8pg/kg。定量限分別為25卩g/kg、125卩g/kg、25pg/kg、125pg/kg、25卩g/kg。10方法準確度罌粟堿、那可丁和蒂巴因添加濃度范圍為25pgkg250pg/kg，嗎啡、可待因添加濃度范圍為125pg/kg1250pg/kg時，回收率為70%110%。DB31/20102012 附錄A質譜/質譜測定參考條件5種生物堿及2個內標化合物的定性離子對.定量離子對、去簇電壓(DP)及碰

13、撞氣能量(CE)見表A.lo表A.17種化合物的定性離子對、定量離子對、去簇電壓和碰撞氣能量組分名稱定性離子對(m/z)定雖離子對(m/z)去簇電壓(DP)/V碰撞氣能雖(CE)/eV鞋粟堿340.4/202.2Amr038340.4/171.1yz49嗎啡286.0/181.3286.0/181.39750286.0/165.350那可丁414.4/220.5414.4/220.59530414.4/353.334可待因300.4/215.2300.4/215.29034300.4/165.455蒂巴因312.3/58.3312.3/5&35238312.3/249.122嗎啡-D3289.

14、4/185.2289.4/185.29540289.4/165.253可待因-D3303.5/215.3303.5/215.3QA35303.5/165.2OV60DB31/20102012 附錄B7種化合物標準物質的提取離子（定量）質譜圖樓舉堿mz340.4/202.22.040.00.51.0152.02.52.65A3.03.54.0嗎啡m/z286.0/181.34.55.0f/min0.0OJId2.02.5303J404.35.0t/min1.81那可丁m/z414.4/220.50.00.51.01.52.02.53.03.54.04.53.0t/min2.62A可待因m/z300.4/215.20.00J1.01.52.02.5303.54.04.55.0/mm2.401蒂巴Swz312.3/58.30.00J1.01.52.02.5303.54.04.55.0/mm2.661嗎