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1、細(xì)胞中過(guò)氧化物酶的顯示與觀察( peroxisome)電鏡下的過(guò)氧化物酶體電子致密的核心是尿酸氧化酶的結(jié)晶,即類核體過(guò)氧化物酶體包括2種酶類:氧化酶(oxidases) 約占過(guò)氧化物酶體酶總量的一半;各種氧化酶作用于不同的底物;將氧還原成過(guò)氧化氫。 RH2 + O2 R + H2O2過(guò)氧化氫酶(catalase)是過(guò)氧化物酶體的標(biāo)志酶;約占過(guò)氧化物酶體酶總量的40%;作用是將過(guò)氧化氫還原成水。 RH2 +H2O2 R + 2H2O 使毒性物質(zhì)失活這種作用可氧化各種底物,如酚、甲酸、甲醛和乙醇等,氧化的結(jié)果使這些有毒性的物質(zhì)變成無(wú)毒性的物質(zhì),同時(shí)也使H2O2進(jìn)一步轉(zhuǎn)變成無(wú)毒的H2O。這種解毒作用
2、對(duì)于肝、腎特別重要, 例如人們飲入的乙醇幾乎有一半是以這種方式被氧化成乙醛的,從而解除了乙醇對(duì)細(xì)胞的毒性作用。實(shí)驗(yàn)原理氧化還原酶類的原位顯示:根據(jù)氧化還原的原理,使無(wú)色的化合物氧化成有色的物質(zhì)得以定位。過(guò)氧化物酶體系能把許多胺類氧化成有色化合物。本實(shí)驗(yàn)用聯(lián)苯胺混合液處理標(biāo)本,過(guò)氧化物酶可將其氧化為藍(lán)色或棕色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng),可判定過(guò)氧化物酶的有無(wú)或多少。RH2+ O2 R + H2O2H2O2 + RH2 R + H2O聯(lián)苯胺 聯(lián)苯胺藍(lán) 聯(lián)苯胺腙 (藍(lán)色) (棕色) 過(guò)氧化物酶系能把許多胺類物質(zhì)氧化為有色化合物: 因而可以根據(jù)顏色反應(yīng)來(lái)判定細(xì)胞中過(guò)氧化物酶的有無(wú)或多少!過(guò)氧化物酶的顯示 2H
3、2O2 2H2O+O2過(guò)氧化氫酶 細(xì)胞代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生H2O2,細(xì)胞中的過(guò)氧化氫酶,能使H2O2分解,生成H2O放出O2。過(guò)氧化氫酶的顯示 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)一:取洋蔥鱗片表皮一薄片; 置于0.85NaCl溶液中35分鐘;浸在溶有0.1%鉬酸胺的0.85NaCl溶液中5分鐘;在使用聯(lián)苯胺溶液前,聯(lián)苯胺中每2ml加10%的過(guò)氧化氫2滴;浸在聯(lián)苯胺溶液中2分鐘,至切片出現(xiàn)藍(lán)色為止;在0.85%NaCl溶液中洗1min;將薄片置于載玻片上展開(kāi),蓋上蓋玻片(可省),顯微鏡檢查。 實(shí)驗(yàn)二: 取馬鈴薯塊莖一個(gè),用徒手切片法切取一小薄片置于載玻片上,滴加3的過(guò)氧化氫溶液。 用煮熟的馬鈴薯重復(fù)上述過(guò)程,結(jié)果如何?1涂片,固定于0.5%硫酸銅水溶液2分鐘。2不水洗,直接入聯(lián)苯胺液(含過(guò)氧化氫)2分鐘。3水洗數(shù)次。4甘油明膠封片(可省),鏡檢。實(shí)驗(yàn)三(動(dòng)物):實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1、在顯微鏡下可見(jiàn)到細(xì)胞中有一些染成藍(lán)色或棕色的顆粒。即為過(guò)氧化物酶存在的部位。 2、 滴加了過(guò)氧化氫溶液的馬鈴薯組織四周出現(xiàn)氣泡,提示植物中過(guò)氧化氫酶的存在。過(guò)氧
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