1、關(guān)于細(xì)胞骨架翟中和細(xì)胞生物學(xué)第一張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 細(xì)胞骨架的概述細(xì)胞骨架概念 細(xì)胞骨架是指存在于真核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的蛋白纖維網(wǎng)架結(jié)構(gòu)體系。有狹義和廣義兩種涵義第二張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞骨架狹義:廣義細(xì)胞質(zhì)骨架微 絲微 管中間纖維細(xì)胞核骨架細(xì)胞質(zhì)骨架細(xì)胞膜骨架細(xì)胞外基質(zhì)第三張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞骨架主要功能的概述作為動態(tài)的支架，提供結(jié)構(gòu)支撐以決定細(xì)胞形狀和抵抗細(xì)胞變形。作為在細(xì)胞內(nèi)定位各種細(xì)胞器的內(nèi)部框架。作為高速公路網(wǎng)指導(dǎo)物質(zhì)與細(xì)胞器在細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)動。作為產(chǎn)生力的裝置，將細(xì)胞從一個(gè)地方移至到另一個(gè)地方。作為錨定mRN

2、A并促進(jìn)其翻譯成多肽的位點(diǎn)。作為細(xì)胞分裂的必要組分。第四張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 細(xì)胞骨架的組成 微 絲 (microfilament, MF) 微 管 （microtubules,MT） 中間纖維 ( intermediate filament,IF)第五張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 一、微絲(microfilament, MF) 微絲的概念 成分與形態(tài)結(jié)構(gòu) 微絲的組裝及動力學(xué)特性 影響微絲組裝的特異性藥物 微絲結(jié)合蛋白 微絲的功能第六張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 （一）微絲的概念 又稱肌動蛋白絲(actin filament)或纖維狀肌動

3、蛋白（F-actin）, 是指真核細(xì)胞中由肌動蛋白單體組成的直徑為7nm的骨架纖維。在細(xì)胞內(nèi)與幾乎所有形式的運(yùn)動相關(guān)。第七張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）成分與形態(tài)結(jié)構(gòu)成 分 肌動蛋白(actin)是微絲的主要結(jié)構(gòu)成分。 細(xì)胞內(nèi)存在形式：肌動蛋白單體（球狀肌動蛋白，G-actin）和由單體組裝而成的纖維狀肌動蛋白。形態(tài)結(jié)構(gòu) 肌動蛋白單體外觀呈碟狀結(jié)構(gòu)，中央有一個(gè)裂口，裂口內(nèi)部有ATP結(jié)合位點(diǎn)和Mg2+結(jié)合位點(diǎn)。(書P266頁圖9-3) 近年來認(rèn)為微絲是由一條肌動蛋白單體鏈形成的螺旋，每個(gè)肌動蛋白單體周圍都有四個(gè)單體，呈上、下各一個(gè)，另外兩個(gè)位于一側(cè)排列。第八張，PPT共七十九頁

4、，創(chuàng)作于2022年6月 (三）微絲的組裝及動力學(xué)特性微絲是由肌動蛋白單體形成的多聚體，肌動蛋白單體具有極性，組裝時(shí)呈頭尾相接，故微絲具有極性，既正極與負(fù)極之別。微絲的極性 有裂口的一端負(fù)極 無裂口的一端正極第九張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 影響組裝/去組裝的因素：溶液中所含肌動蛋白單體的狀態(tài)（結(jié)合ATP或ADP）離子的種類及濃度等。溶液中Ca2+濃度適當(dāng)，Na+、K+濃度很低：微絲趨向解聚成G-actin。 溶液中含有ATP、Mg2+及Na+、K+濃度較高：G-actin趨向組裝成F-actin。 溶液中攜帶ATP的G-actin處于臨界濃度時(shí)：組裝與去組裝達(dá)到平衡狀態(tài)。第一階段

5、：成核反應(yīng) 形成至少2-3個(gè)肌動蛋白單體組成的寡聚體。第二階段：纖維的延長 肌動蛋白具有ATP酶活性，在微絲組裝之前肌動蛋白單體必須與ATP結(jié)合。微絲的組裝過程第十張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 微絲的組裝的動力學(xué)特性體外實(shí)驗(yàn)表明，組裝時(shí)，（肌動蛋白-ATP亞基）正極比負(fù)極快；去組裝時(shí)，（肌動蛋白-ADP亞基）負(fù)極比正極快。由于肌動蛋白-ATP亞基在微絲正極不斷添加而延長，而肌動蛋白-ADP亞基在微絲負(fù)極去組裝而縮短，從而表現(xiàn)為踏車行為。第十一張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 （四）影響微絲組裝的特異性藥物細(xì)胞松弛素(cytochalasins)：可以切斷微絲,并結(jié)合在微

6、絲末端阻抑肌動蛋白聚合,但對微絲解聚沒有明顯影響。（破壞微絲網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)并阻止細(xì)胞運(yùn)動）鬼筆環(huán)肽(philloidin)：與微絲表面結(jié)合,不與肌動蛋白單體結(jié)合，抑制微絲解聚。（可使微絲保持穩(wěn)定狀態(tài)）影響微絲組裝動態(tài)性的藥物對細(xì)胞都有毒害，說明微絲功能的發(fā)揮依賴于微絲與肌動蛋白單體之間的動態(tài)平衡。這種動態(tài)平衡受肌動蛋白單體濃度和微絲結(jié)合蛋白的影響。第十二張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 （五）微絲結(jié)合蛋白 微絲網(wǎng)絡(luò) 肌動蛋白纖維：組裝成不同的微絲網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，參與細(xì)胞內(nèi)各種生命活動。 微絲結(jié)合蛋白：參與形成微絲纖維高級結(jié)構(gòu)，對肌動蛋白纖維的動態(tài)組裝有調(diào)節(jié)作用。 微絲結(jié)合蛋白對肌動蛋白組裝的調(diào)節(jié)

7、 可溶性肌動蛋白的存在狀態(tài) 微絲結(jié)合蛋白的種類及其存在狀態(tài)第十三張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 （五）微絲結(jié)合蛋白 微絲結(jié)合蛋白類型1、肌肉收縮系統(tǒng)中的有關(guān)蛋白 肌球蛋白：約占肌肉總蛋白的一半，含4條多肽鏈（2條輕鏈、2條重鏈），兩股重鏈盤繞成雙股螺旋，長約140nm,直徑2nm。 功能：細(xì)胞骨架和膜細(xì)胞的相互作用，如膜泡運(yùn)輸?shù)取?原肌球蛋白：在肌肉中占總蛋白的5%10%，分子長度為40nm，由兩條平行的多肽鏈形成 螺旋構(gòu)型。 功能：原肌球蛋白結(jié)合于細(xì)肌絲，調(diào)節(jié)肌動蛋白與肌球蛋白頭部的結(jié)合。 第十四張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 （五）微絲結(jié)合蛋白微絲結(jié)合蛋白類型1、肌

8、肉收縮系統(tǒng)中的有關(guān)蛋白 肌鈣蛋白（Tn） ：含有3個(gè)亞基：Tn-C 特異與Ca2+結(jié)合；Tn-T與原肌球蛋白有高度親和力；Tn-I抑制肌球蛋白ATPase的活性。 其他相關(guān)蛋白 ： CapZ 將肌動蛋白纖維錨定于質(zhì)膜的蛋白： 輔肌動蛋白（ actinin) 紐蛋白(vinculin) 肌聯(lián)蛋白(connectin) 肌小節(jié)中起結(jié)構(gòu)作用的蛋白： 伴肌動蛋白(nebulin 肌營養(yǎng)不良蛋白(dystrophin)第十五張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 （五）微絲結(jié)合蛋白微絲結(jié)合蛋白類型2、非肌肉細(xì)胞中的微絲結(jié)合蛋白 非肌肉細(xì)胞中亦存在肌球蛋白、原肌球蛋白、輔肌動蛋白等，不存在肌鈣蛋白。

9、近年來在非肌肉細(xì)胞中分離鑒定了幾十種微絲結(jié)合蛋白，與微絲組裝及功能有密切關(guān)系。第十六張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 （六）微絲的功能維持細(xì)胞形態(tài)，賦予質(zhì)膜機(jī)械強(qiáng)度肌肉收縮(muscle contraction)微絨毛(microvillus)應(yīng)力纖維(stress fiber)細(xì)胞皮層胞質(zhì)分裂環(huán)第十七張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 微絲遍及胞質(zhì)各處，集中分布于質(zhì)膜下，和其結(jié)合蛋白形成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，維持細(xì)胞形狀和賦予質(zhì)膜機(jī)械強(qiáng)度。1、維持細(xì)胞形態(tài)，賦予質(zhì)膜機(jī)械強(qiáng)度第十八張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月2、肌肉收縮(muscle contraction) 肌肉可看作一

10、種特別富含細(xì)胞骨架的效力非常高的能量轉(zhuǎn)換器，它直接將化學(xué)能轉(zhuǎn)變?yōu)闄C(jī)械能。 肌肉的細(xì)微結(jié)構(gòu)(以骨骼肌為例) 肌肉收縮系由肌動蛋白絲與肌球蛋白絲的相對滑動所致： 肌球蛋白與肌動蛋白結(jié)合肌球蛋白頭部朝肌球蛋白細(xì)絲彎曲肌球蛋白頭部與ATP結(jié)合與肌動蛋白分開肌球蛋白釋放恢復(fù)原來構(gòu)型造成細(xì)絲與粗絲間的滑動（表現(xiàn)ATP水解和肌肉收縮）。第十九張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月肌肉的細(xì)微結(jié)構(gòu)(以骨骼肌為例)肌原纖維（收縮單位） 粗肌絲：肌球蛋白（主）細(xì)肌絲肌動蛋白（主）原肌球蛋白肌鈣蛋白（輔）第二十張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 小腸上皮細(xì)胞微絨毛的軸心微絲是非肌肉細(xì)胞中高度有序微絲束的代

11、表，微絲呈同向平行排布。成分 軸心微絲束不含肌球蛋白、原肌球蛋白和輔肌動蛋白因而無收縮功能。功能 微絨毛中心的微絲束起維持微絨毛形狀的作用。 3、微絨毛 (microvillus)第二十一張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 體外培養(yǎng)細(xì)胞在基質(zhì)表面鋪展時(shí)，常在細(xì)胞質(zhì)膜的特定區(qū)域與基質(zhì)之間形成緊密黏附的黏著斑。在緊貼黏著斑的細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)側(cè)有大量的微絲緊密排列成束，這種微絲束稱為應(yīng)力纖維。是真核細(xì)胞內(nèi)廣泛存在的微絲束結(jié)構(gòu)。成分 微絲、肌球蛋白、原肌球蛋白、細(xì)絲蛋白和-輔肌動蛋白。作用 、介導(dǎo)細(xì)胞間或細(xì)胞與基質(zhì)表面的粘著。 、微絲緊密平行排列成束，形成應(yīng)力纖維,具有收縮功能。 、可能在細(xì)胞形態(tài)發(fā)

12、生、細(xì)胞分化和組織的形成等方面具有重要作用。 4、應(yīng)力纖維（stress fiber）第二十二張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 細(xì)胞內(nèi)大部分微絲都集中在緊貼細(xì)胞質(zhì)膜的細(xì)胞質(zhì)區(qū)域，并由微絲結(jié)合蛋白交聯(lián)成凝膠狀三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，該區(qū)域通常稱為細(xì)胞皮層。 細(xì)胞質(zhì)運(yùn)動 胞質(zhì)環(huán)流 穿梭運(yùn)動 細(xì)胞移動 變形運(yùn)動 變皺膜運(yùn)動 形態(tài)發(fā)生運(yùn)動 以上運(yùn)動都與皮層內(nèi)肌動蛋白的溶膠態(tài)或凝膠態(tài)轉(zhuǎn)化相關(guān)。 5、細(xì)胞皮層第二十三張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 胞質(zhì)分裂環(huán):是有絲分裂末期在兩個(gè)即將分裂的子細(xì)胞之間產(chǎn)生一個(gè)對細(xì)胞質(zhì)起收縮作用的環(huán)。 時(shí)期 在動物細(xì)胞和低等植物細(xì)胞有絲分裂的末期，發(fā)生的縊縮型胞質(zhì)

13、分裂。 組成 收縮環(huán)由大量反向平行排列，但由極性方向不同的微絲組成。 機(jī)制 其收縮機(jī)制是肌動蛋白絲和肌球蛋白之間的相對滑動。 6、胞質(zhì)分裂環(huán)第二十四張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月二 、微 管（Microtubules，MT）微管結(jié)構(gòu)與組成微管的類型組裝微管特異性藥物微管結(jié)合蛋白(MAP)微管功能微管：在真核細(xì)胞質(zhì)中，由微管蛋白構(gòu)成的，可形成紡錘體、中心體及細(xì)胞特化結(jié)構(gòu)鞭毛和纖毛的結(jié)構(gòu)。 第二十五張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）微管結(jié)構(gòu)與組成微管的組成成分：由微管蛋白亞基組裝而成。 微管蛋白：450aa -微管蛋白：455aa微管組裝的基本單位 微管蛋白異二聚體2個(gè)鳥

14、嘌呤核苷酸結(jié)合位點(diǎn) 微管蛋白有一個(gè)GTP結(jié)合位點(diǎn)（不可交換位點(diǎn)，N位點(diǎn)） 結(jié)合在該位點(diǎn)的GTP不被水解，且不可交換。 -微管蛋白有一個(gè)GTP結(jié)合位點(diǎn)（可交換位點(diǎn)， E位點(diǎn)） 該GTP在組裝成多聚體之后，被水解成GDP 。 去組裝后， -微管蛋白上的GDP可以被細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的GTP替換，再參與微管組裝。球狀蛋白第二十六張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月微管的形態(tài)結(jié)構(gòu) 微管是中空的管狀結(jié)構(gòu)。電子顯微鏡 微管橫截面上有13個(gè)球形蛋白亞基。負(fù)染或原子力顯微鏡 微管壁是由-微管蛋白二聚體縱向排列而成的原纖絲構(gòu)成， 13根原纖絲合攏后構(gòu)成微管管壁。第二十七張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月

15、微管的極性 微管組裝的基本結(jié)構(gòu)單位是由-微管蛋白組成的二聚體，每一根原纖絲都是由二聚體有規(guī)律排列而成。 原纖絲：某一端都是-微管蛋白，另一端都是-微管蛋白微管在結(jié)構(gòu)上成極性狀態(tài)。 結(jié)構(gòu)上的不對稱導(dǎo)致微管組裝時(shí)微管蛋白二聚體在兩端聚合速度上的差異，組裝較快的一端稱為正極，另一端稱為負(fù)極。第二十八張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 （二）微管的類型 單管（singlet) 細(xì)胞質(zhì)微管，由13根原纖絲集合而成。 二聯(lián)管（doublet) 纖毛或鞭毛軸絲微管，運(yùn)動性微管。 A管：13根原纖絲 B管：14根原纖絲，有三條與A管共用 三聯(lián)管 (triplet) 中心體或基體的微管 A 管：13根原

16、纖維 B 管：14根原纖維，有三條與A管共用 C 管：14根原纖維，有三條與B管共用第二十九張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 (三）微管的組裝微管組織中心組裝方式微管組裝的動力學(xué)不穩(wěn)定性第三十張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月1、微管組織中心(MTOC)微管組織中心概念常見微管組織中心第三十一張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月在活細(xì)胞內(nèi)，能夠起始微管的成核作用，并使之延伸的細(xì)胞結(jié)構(gòu)稱為微管組織中心。(microtubule organizing center, MTOC)微管組織中心概念第三十二張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月常見微管組織中心間期細(xì)胞MTOC

17、： 中心體(動態(tài)微管) 分裂細(xì)胞MTOC：有絲分裂紡錘體 (動態(tài)微管) 鞭毛纖毛細(xì)胞MTOC：基體(永久性結(jié)構(gòu)) 高等植物細(xì)胞MTOC：間期細(xì)胞核的周圍 第三十三張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月一些微管蛋白二聚體首先縱向聚合形成短的絲狀結(jié)構(gòu)，即成核反應(yīng)。通過兩端以及側(cè)面增加二聚體而擴(kuò)展成片狀。當(dāng)片狀聚合物加寬至13根原纖絲時(shí),即合攏形成一段微管。新的微管二聚體不斷組裝到這段微管兩端，使之延長，微管蛋白與微管達(dá)到動態(tài)平衡。組裝方式(成核和延伸)第三十四張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月微管組裝的動力學(xué)不穩(wěn)定性(dynamic instability) 是指在細(xì)胞內(nèi)的同一區(qū)域中生

18、長的微管與縮短的微管同時(shí)存在,而且一條特定的微管在生長項(xiàng)與縮短項(xiàng)之間交替切換的現(xiàn)象。動力學(xué)不穩(wěn)定性產(chǎn)生的原因： 微管末端具GTP帽(取決于攜帶GTP的-微管蛋白濃度), 微管將穩(wěn)定延伸;反之,無GTP帽則微管解聚。 踏車現(xiàn)象：在同一根微管上常可發(fā)現(xiàn)其正極端因組裝而延長，負(fù)極端因去組裝而縮短，當(dāng)一端組裝的速度和另一端解聚的速度相同時(shí)，微管的長度保持穩(wěn)定，即踏車行為。第三十五張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 （四）微管特異性藥物 秋水仙素(colchicine) 阻斷微管蛋白組裝成微管，可破壞紡錘體結(jié)構(gòu)。 紫杉醇(taxol)能促進(jìn)微管的組裝,并使已形成的微管穩(wěn)定。 為行使正常的微管功能

19、,微管動力學(xué)不穩(wěn)定性(動態(tài)的組裝和解聚）是其功能正常發(fā)揮的基礎(chǔ)。第三十六張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月微管結(jié)合蛋白(Microtubule Associated Protein, MAP)根據(jù)MAPs在電泳時(shí)所顯現(xiàn)的條帶的不同，一次命名為MAP1、MAP2、MAP3、MAP4、tau蛋白等。tau蛋白 ：見于神經(jīng)軸突中，具有熱穩(wěn)定性。其功能是加速微管蛋白的聚合，形成18nm臂，橫向連接相鄰微管以穩(wěn)定微管。MAP2：具熱穩(wěn)定性，見于神經(jīng)元胞體和樹突內(nèi)，在微管間及微管與中間纖維間形成橫橋，能使微管成束。第三十七張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 6、微管功能維持細(xì)胞形狀參與細(xì)胞

20、內(nèi)物質(zhì)的運(yùn)輸鞭毛(flagella)運(yùn)動和纖毛(cilia)運(yùn)動參與紡錘體形成和染色體運(yùn)動第三十八張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月維持細(xì)胞形狀用秋水仙素處理細(xì)胞破壞微管,導(dǎo)致細(xì)胞變圓,說明微管對維持細(xì)胞的不對稱形狀是重要的。對于動物細(xì)胞突起部分,如纖毛、鞭毛、神經(jīng)細(xì)胞的軸突、太陽蟲目原生生物的偽足的形成和維持,微管起關(guān)鍵作用。第三十九張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的運(yùn)輸 真核細(xì)胞內(nèi)部是高度區(qū)域化的體系, 細(xì)胞中合成的物質(zhì)、一些細(xì)胞器等必須經(jīng)過細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸過程。這種運(yùn)輸過程與細(xì)胞骨架體系中的微管（MT）及其分子馬達(dá)（Molecular Motor）有關(guān)。 微管提供了

21、運(yùn)輸?shù)能壍?分子馬達(dá)提供了動力 神經(jīng)元軸突運(yùn)輸 色素顆粒的運(yùn)輸?shù)谒氖畯垼琍PT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月分子馬達(dá)的類型及功能 分子馬達(dá)既能與微管結(jié)合，又能與膜泡特異性結(jié)合。這些能利用水解ATP將化學(xué)能轉(zhuǎn)變?yōu)闄C(jī)械能，有規(guī)則地沿微管運(yùn)輸貨物的分子馬達(dá)主要有驅(qū)動蛋白和胞質(zhì)動力蛋白。 驅(qū)動蛋白(kinesin):在魷魚神經(jīng)元巨大軸突內(nèi)發(fā)現(xiàn)。 運(yùn)動方式：運(yùn)載膜性細(xì)胞器沿微管向軸突末梢移動。 組成：兩條重鏈和兩條輕鏈組成。 結(jié)構(gòu)：長80nm的桿狀結(jié)構(gòu)，頭部一端有兩個(gè)呈球狀的馬達(dá)區(qū)域，直徑約10nm，另一端是重鏈和輕鏈組成的扇形尾端，中間是重鏈組成的桿狀區(qū)。球狀的頭部具有ATP結(jié)合部位和微管結(jié)合部位。

22、（書P292頁圖9-25） 運(yùn)輸方向：馬達(dá)結(jié)構(gòu)域在重鏈的N端或中部負(fù)極向正極 馬達(dá)結(jié)構(gòu)域在重鏈的C端正極向負(fù)極第四十一張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月驅(qū)動蛋白馬達(dá)結(jié)構(gòu)域具有兩個(gè)重要的功能位點(diǎn)，其一是ATP結(jié)合位點(diǎn)，其二是微管結(jié)合位點(diǎn)。 關(guān)于驅(qū)動蛋白沿微管運(yùn)動的分子模型有兩種：步行模型：驅(qū)動蛋白的兩個(gè)球狀頭部交替向前，每水解一個(gè)ATP分子，落在后面的那個(gè)馬達(dá)結(jié)構(gòu)域?qū)⒁苿觾杀兜木嚯x，及16nm。而原來的那個(gè)頭部則在下一個(gè)循環(huán)時(shí)再向前移動。“尺蠖”爬行模型：驅(qū)動蛋白兩個(gè)頭部中的一個(gè)始終向前，另一個(gè)永遠(yuǎn)在后，每步移動8nm。驅(qū)動蛋白沿微管運(yùn)動的分子機(jī)制第四十二張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于20

23、22年6月驅(qū)動蛋白沿微管運(yùn)動的分子機(jī)制涉及兩個(gè)馬達(dá)結(jié)構(gòu)域與ATP結(jié)合、水解ATP、釋放ADP以及與自身構(gòu)象變化相偶聯(lián)等一系列過程。驅(qū)動蛋白沿微管運(yùn)動的分子機(jī)制第四十三張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月引發(fā)驅(qū)動蛋白分子沿微管持續(xù)向前移動的原因有兩個(gè)：在每個(gè)驅(qū)動蛋白分子中兩個(gè)馬達(dá)結(jié)構(gòu)域的化學(xué)-機(jī)械循環(huán)時(shí)互相協(xié)調(diào)的，因此在一個(gè)馬達(dá)結(jié)構(gòu)域還沒有與微管結(jié)合之前，另一個(gè)馬達(dá)結(jié)構(gòu)域不會從微管上游離下來，從而保證了步行的連續(xù)性，即馬達(dá)分子和所運(yùn)送的“貨物”或細(xì)胞器不會脫離微管。驅(qū)動蛋白分子能沿微管持續(xù)移動的原因是它的馬達(dá)結(jié)構(gòu)域在ATPase循環(huán)的大部分時(shí)間都與微管緊密結(jié)合。驅(qū)動蛋白沿微管運(yùn)動的分子機(jī)制

24、第四十四張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月分子馬達(dá)的類型及功能胞質(zhì)動力蛋白(cytoplasmic dynein)：纖毛和鞭毛內(nèi)發(fā)現(xiàn)（軸絲動力蛋白）。是已知馬達(dá)蛋白中最大、移動速度最快的成員。 組成：2條或3條重鏈、多條輕鏈和一些多肽鏈組成。 結(jié)構(gòu)：重鏈約含4600個(gè)氨基酸殘基，含有ATP結(jié)合部位和微管結(jié)合部位。馬達(dá)結(jié)構(gòu)域位于重鏈C端，軸絲動力蛋白有3個(gè)馬達(dá)結(jié)構(gòu)域，胞質(zhì)動力蛋白有2個(gè)馬達(dá)結(jié)構(gòu)域（負(fù)責(zé)將ATP儲存的化學(xué)能轉(zhuǎn)化成機(jī)械能，并介導(dǎo)沿微管的運(yùn)動）。 功能：與細(xì)胞內(nèi)介導(dǎo)沿微管從正極端向負(fù)極端的膜泡運(yùn)輸以及有絲分裂紡錘體動態(tài)結(jié)構(gòu)相關(guān)。 第四十五張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6

25、月神經(jīng)元軸突運(yùn)輸?shù)念愋偷谒氖鶑垼琍PT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月色素顆粒的運(yùn)輸許多兩棲類的皮膚和魚類的鱗片中含有特化的色素細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)色素顆粒實(shí)際上是沿微管而轉(zhuǎn)運(yùn)的。第四十七張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月鞭毛(flagella)運(yùn)動和纖毛(cilia)運(yùn)動纖毛與鞭毛的結(jié)構(gòu) 是細(xì)胞質(zhì)膜所包被的細(xì)長突起，內(nèi)部是由微管構(gòu)成的軸絲結(jié)構(gòu)。“9+2”排列結(jié)構(gòu)：9個(gè)二聯(lián)體微管、2根中央鞘所包圍的單體微管。外圍二聯(lián)體微管：A管(完全微管，由13個(gè)球形亞基環(huán)繞而成) B管（不完全微管，由10個(gè)亞基構(gòu)成，另3個(gè)亞基與 A管共用）中央微管：均為完全單體微管。纖毛或鞭毛的運(yùn)動機(jī)制 滑動學(xué)說：由軸

26、絲動力蛋白所介導(dǎo)的相鄰二聯(lián)體微管間相互滑動所致。 滑動學(xué)說過程圖示第四十八張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月纖毛或鞭毛運(yùn)動過程中相鄰二聯(lián)體微管的滑動模型A管動力蛋白頭部與B管的接觸促使動力蛋白結(jié)合的ATP水解，產(chǎn)物釋放，造成頭部角度的改變。新的ATP結(jié)合使動力蛋白頭部與B管脫離。ATP水解，其釋放的能量使頭部的角度復(fù)原。帶有水解產(chǎn)物的動力蛋白頭部與B管上另一位點(diǎn)結(jié)合，開始又一次循環(huán)。第四十九張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月紡錘體和染色體運(yùn)動 間期進(jìn)入有絲分裂期： 間期細(xì)胞微管網(wǎng)絡(luò)解聚為游離的-微管蛋白二聚體，再重組裝形成紡錘體，介導(dǎo)染色體的運(yùn)動。 分裂末期： 紡錘體微管解聚，

27、又重組裝形成胞質(zhì)微管網(wǎng)絡(luò)。第五十張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月三 中間纖維( intermediate filament,IF)中間纖維的概念中間纖維的類型與分布中間纖維蛋白的結(jié)構(gòu)特征中間纖維的組裝中間纖維的功能第五十一張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月中間纖維的概念20世紀(jì)60年代中期，在哺乳動物細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)10nm繩索狀纖維,因其直徑介于肌粗絲和細(xì)絲之間, 故被命名為中間纖維（又稱中間絲）。中間纖維幾乎分布于所有動物細(xì)胞，往往形成一個(gè)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，特別是在需要承受機(jī)械壓力的細(xì)胞中含量相當(dāng)豐富。第五十二張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月中間纖維的類型與分布 中間纖維成分

28、比微絲和微管復(fù)雜，中間纖維在形態(tài)上相似，而化學(xué)組成有明顯的差別。不同組織來源的細(xì)胞表達(dá)不同類型的中間絲蛋白。 根據(jù)中間纖維蛋白氨基酸序列、基因結(jié)構(gòu)、組裝特性以及在發(fā)育過程的組織特異性表達(dá)模式等，可以將中間纖維分為6種主要類型。第五十三張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月中間纖維分類與分布在上皮細(xì)胞內(nèi)以異源二聚體的形式參與中間絲組裝型中間絲：通常在各自的細(xì)胞內(nèi)形成同源多聚體型中間絲：在波形蛋白和巢蛋白表達(dá)一定時(shí)間后開始表達(dá)，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)存在的中間絲網(wǎng)絡(luò)型中間絲：蛋白B在所有細(xì)胞中均表達(dá)，蛋白A只在原腸胚形成后分化的細(xì)胞中表達(dá)型中間絲“孤兒”型中間絲第五十四張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022

29、年6月 在人類基因組中至少包含67種不同的中間絲蛋白基因，組成了人類基因組中最大的基因家族之一。 中間纖維蛋白的表達(dá)與分布具有嚴(yán)格的組織特異性。因此，中間纖維蛋白是區(qū)分細(xì)胞類型的身份證。 第五十五張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月中間纖維蛋白的結(jié)構(gòu)特征中間纖維蛋白分子非螺旋化區(qū)-螺旋區(qū)（310AA）頭部（N端）尾部（C端）H亞區(qū)；同源區(qū)V亞區(qū)：可變區(qū)E亞區(qū)：末端區(qū)螺旋1(22nm)螺旋2(22nm)1A亞區(qū)1B亞區(qū)2A亞區(qū)2B亞區(qū)L1：連接1A和1BL12：連接1A和2BL2：連接2A和2B第五十六張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月中間纖維的組裝中間纖維組裝與微管和微絲組裝相比

30、，有以下幾個(gè)特點(diǎn)： 中間纖維組裝的單體是纖維狀蛋白； 反向平行的四聚體導(dǎo)致中間纖維不具有極性； 中間纖維在組裝過程中不需要ATP或GTP的輔助。 細(xì)胞內(nèi)新的中間纖維蛋白可以通過交換的方式摻入到原來的纖維中去。中間纖維組裝過程第五十七張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月中間纖維的組裝過程兩個(gè)單體的桿狀區(qū)以平行排列的方式形成雙股螺旋的二聚體。兩個(gè)二聚體以反向平行和半分子交錯形式組裝成四聚體。四聚體首尾相連形成原纖維。8根原纖維構(gòu)成圓柱狀的10nm纖維，形成中間絲。第五十八張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月中間纖維的功能中間纖維發(fā)揮功能具有時(shí)空特異性中間纖維提供細(xì)胞的機(jī)械強(qiáng)度作用中間纖

31、維維持細(xì)胞和組織完整性的作用 物質(zhì)運(yùn)輸和信息傳遞作用 在細(xì)胞質(zhì)中與微管、微絲共同完成物質(zhì)的運(yùn)輸，在細(xì)胞核內(nèi)，與DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄有關(guān)。中間纖維與細(xì)胞分化及細(xì)胞生存有關(guān) 第五十九張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié) 細(xì)胞核骨架細(xì)胞核骨架的概念核基質(zhì)(Nuclear Matrix)染色體骨架核纖層(Nuclear Lamina)第六十張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞核骨架概念細(xì)胞核骨架：存在于真核細(xì)胞核內(nèi)的以蛋白成分為主的纖維網(wǎng)架體系。狹義：指核內(nèi)基質(zhì)，即細(xì)胞核內(nèi)除核膜、核纖層、染色質(zhì)、核仁和核孔復(fù)合體以外的以纖維蛋白成分為主的纖維網(wǎng)架體系；廣義：包括核基質(zhì)、核纖層和核孔

32、復(fù)合體。 第六十一張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月核基質(zhì)(Nuclear Matrix) 形態(tài)結(jié)構(gòu)成分核骨架結(jié)合序列功能第六十二張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月形態(tài)結(jié)構(gòu)研究核骨架的分級抽提方法 非離子去垢劑溶解膜結(jié)構(gòu)系統(tǒng),胞質(zhì)中可溶性成分隨之流失; 再用Tween-40（聚氧乙烯山梨糖醇酐單棕櫚酸酯 ）和脫氧膽酸鈉處理,胞質(zhì)中的微管、微絲與一些蛋白結(jié)構(gòu)被溶去,胞質(zhì)中只有中間纖維網(wǎng)能完好存留;然后用核酸酶與0.25mol/L硫酸銨處理,染色質(zhì)中DNA、RNA和組蛋白被抽提, 最終核內(nèi)呈現(xiàn)一個(gè)精細(xì)發(fā)達(dá)的核骨架網(wǎng)絡(luò), 結(jié)合非樹脂包埋-去包埋劑電鏡制樣方法,可清晰地顯示核骨架-核纖

33、層-中間纖維結(jié)構(gòu)體系。第六十三張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月成分核骨架不象胞質(zhì)骨架那樣由非常專一的蛋白成分組成,核骨架的成分比較復(fù)雜,主要成分是核骨架蛋白及核骨架結(jié)合蛋白,并含有少量RNA。核骨架蛋白骨架結(jié)合蛋白其它第六十四張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月核骨架結(jié)合序列 DNA序列中的核骨架結(jié)合序列(MAR) 這部分DNA與核骨架蛋白的結(jié)合不為高鹽溶液抽提所破壞,在基因表達(dá)調(diào)控中起作用。核骨架結(jié)合序列的基本特征第六十五張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月核骨架結(jié)合序列的基本特征富含AT富含DNA解旋元件(DNA unwinding elements)富含反向重復(fù)序列

34、(Inverted Repeats) 含有轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)第六十六張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月功能核骨架與DNA復(fù)制 核骨架是DNA復(fù)制的空間支架。核骨架與基因表達(dá) 大量研究工作表明真核細(xì)胞中RNA的轉(zhuǎn)錄和加工均與核骨架有關(guān)。具有轉(zhuǎn)錄活性的基因是結(jié)合在核骨架上的，RNA聚合酶在核骨架上具有結(jié)合位點(diǎn)。 核骨架與病毒復(fù)制核骨架與染色體構(gòu)建第六十七張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月二、染色體骨架染色體支架：指染色體中由非組蛋白構(gòu)成的結(jié)構(gòu)支架。 染色體骨架的真實(shí)性銀染法能選擇性地顯示染色體軸結(jié)構(gòu)DNA酶和RNA酶處理或用0.4mol/L H2SO4處理去除組蛋白,對染色體軸沒有影

35、響,用胰蛋白酶消化則染色體軸破壞,說明染色體軸是非組蛋白性的。染色體骨架/放射環(huán)模型在分子水平上得到兩個(gè)直接證據(jù)第六十八張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月三、核纖層(Nuclear Lamina)核纖層：是位于細(xì)胞核內(nèi)層核膜下的纖維蛋白片層或纖維網(wǎng)絡(luò)。核纖層與中間纖維、核骨架相互連接，形成貫穿于細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)的骨架結(jié)構(gòu)體系。 核纖層分布與形態(tài)結(jié)構(gòu)：纖維縱橫排列整齊，呈正交狀編織成網(wǎng)絡(luò)，整體觀呈球狀或籠狀網(wǎng)絡(luò)，切面觀為片層結(jié)構(gòu)。 成分核纖層由核纖層蛋白(lamin)構(gòu)成 。核纖層蛋白的分子結(jié)構(gòu)及其與中間纖維蛋白的關(guān)系核纖層在細(xì)胞周期中的變化第六十九張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月成分核纖層蛋白(Lamin) 哺乳動物和鳥類細(xì)胞中有核纖層蛋白A、核纖層蛋白B、核纖層蛋白C核纖層蛋白在序列上有很高的同源性。 近年來證實(shí)核纖層蛋白A與C是同一基因的不同加工產(chǎn)物，因此又將核纖層蛋白分為兩類： A型核纖層蛋白：包括核纖層蛋白A和C B型核纖層蛋白第七十張，PPT共七十九頁，創(chuàng)作于2022年6月核纖層蛋白的分子結(jié)構(gòu)及其與中間纖維蛋白的關(guān)系 核纖層與中間纖維之間的共同點(diǎn)1. 兩者均形成10nm纖維;2. 兩者均能抵抗高鹽和非離子去垢劑的抽提; 3. 某些抗中間纖維蛋白的抗體能與核纖層發(fā)生交叉反應(yīng)；4. 核纖層A和核纖層C的cDNA克隆推導(dǎo)出核纖層蛋白的氨基 酸順序與中間