1、上課啦臨 床 檢 驗 基 礎clinical laboratory technology12021/7/20 星期二 臨床檢驗的概念 臨床檢驗的發(fā)展簡史 臨床檢驗在醫(yī)學中的作用 學習臨床檢驗基礎的目的和要求 緒 論 INTRODUCTION 22021/7/20 星期二一、概念（Concept or Definition)醫(yī)學檢驗學中的重要分支，醫(yī)學檢驗專業(yè)的主干課程之一“臨床檢驗學”“臨床檢驗基礎” Rick于1986曾撰寫 “醫(yī)學顯微鏡技術(medical microscopy)” 1995年衛(wèi)生部會議（青島） 專家們推薦使用“臨床基礎檢驗學”32021/7/20 星期二臨床檢驗基礎借助先

2、進的檢測技術，對來自離體的血液、尿液、糞便以及分泌物和排泄物等標本進行理學、化學、病原學和顯微鏡形態(tài)學的檢查，以簡便、快速的檢測結果，滿足臨床醫(yī)學檢驗篩檢疾病的要求42021/7/20 星期二二、簡史 (History)公元前400年，希臘名醫(yī)Hippocrates 感官直覺17世紀末荷蘭人Leeuwenhook 顯微鏡 19世紀末Ehrlich和Romanowsky 染色技術 1928年 Papanieolaou 脫落細胞學現(xiàn)代技術的發(fā)展 52021/7/20 星期二現(xiàn)代醫(yī)學檢驗的特點從手工檢測步入儀器自動化、電腦化檢測床邊檢測試劑批量化、配套化、專業(yè)化和多樣化檢驗方法的標準化全面的質(zhì)量管理

3、和質(zhì)量保證62021/7/20 星期二三、應用 (Utilization) 1為準確診斷、及時治療提供證據(jù) 2 為分析病情、觀察療效、判斷預后提供依據(jù)3為預防疾病提供資料4為配合臨床科研提供可靠數(shù)據(jù)72021/7/20 星期二四、臨床檢驗的一般方法 目視檢查： 直接觀察被檢標本 理學檢查： 借助物理學方法 化學檢查： 用定性和定量分析的方法 顯微鏡檢查：臨檢的主要檢查手段 自動化儀器檢查82021/7/20 星期二要 求 (Request)1掌握檢驗的基礎理論2掌握檢驗的實驗技能3熟悉檢驗的方法學評價 4 .了解檢驗項目的參考值5. 熟悉檢驗項目的臨床意義 92021/7/20 星期二第一章

4、血液一般檢驗第一節(jié) 血液標本采集與處理 采血方法 靜脈采血 皮膚采血 真空采血 102021/7/20 星期二 血量0.1ml的檢驗項目：RBC計數(shù)、WBC計數(shù)、 BPL計數(shù)、Hb測定等 皮 膚 采 血 法Skin puncture for blood collection112021/7/20 星期二采血部位WHO推薦采取外周血以左手無名指或中指指尖內(nèi)側1、手指采血： 優(yōu)點：方便獲較多血量檢查結果比較恒定 缺點：與靜脈血仍在某些差異。2、耳垂采血： 優(yōu)點：痛感輕 方便 適用于反復采集 缺點：血循環(huán)差受氣溫影響大檢查結果不恒定 RBC、WBC、Hb、Hct結果均比靜脈血高，特別是冬季。1220

5、21/7/20 星期二3、其他部位： 拇指、拇趾或足跟采血 半歲以下嬰幼兒 皮膚完整處 嚴重燒傷者采血針 三棱針或專用的“采血針”為好，使用前者應高壓滅菌， 一人一針。132021/7/20 星期二一、皮膚采血器材（vacuum blood collector ）2008-10-21采血器材142021/7/20 星期二注意事項1、采血部位皮膚完整。2、無菌技術操作：防采血部位感染， 一人一針防肝炎、艾滋病。3、采血針刺入皮膚應深淺適中。4、多項檢查時，采血次序為：BPL計數(shù)（不擦第一滴血） RBC計數(shù)、HbWBC計數(shù)與分類。5、取血用于自動化血細胞分析儀，要防止棉球纖維混入 堵塞儀器。152

6、021/7/20 星期二 靜 脈 采 血 法 (venipuncture for blood collection)凡需血量較多的檢查0.5ml如：ESR、Hct、凝血因子的測定等。部位 淺表靜脈均可 常用肘部靜脈，不明顯時可用手背、踝 部， 幼兒可用頸外靜脈。P4162021/7/20 星期二172021/7/20 星期二注意事項1、采血前應向病人作適當解釋：2、檢查注射器：3、止血帶壓迫時間不能過長：4、抽血時，只能向外抽，不能向內(nèi)推：182021/7/20 星期二兩種采血方法的優(yōu)缺點比較皮膚采血靜脈采血缺點限制了重復實驗和追加實驗，標本量少，局部炎癥可得假結果，組織液可混入不同抗凝劑的使

7、用，改變血液性質(zhì)，影響有形成分的形態(tài)優(yōu)點價廉、快速、操作簡便，標本可直接測定標本代表性大，無組織液影響，適于臨床研究，可重復實驗和追加其他實驗192021/7/20 星期二三、真空采血法（40年代，美國BD公司）（vacuum tube for blood collection）套筒式和頭皮靜脈式兩種優(yōu)點：血樣無需容器之間的轉移，減少 溶血現(xiàn)象，保持血液標本的完整 性，使檢驗結果更加準確，也有 利于防止醫(yī)院內(nèi)血源性傳染病的 交叉感染和環(huán)境保護。 缺點：真空采血管價格較高202021/7/20 星期二2.真空采血器材 I.采血針2008-10-21212021/7/20 星期二 II.持針器20

8、08-10-212008-10-21醫(yī)學全在線網(wǎng)站 222021/7/20 星期二 III.真空采血管2008-10-21232021/7/20 星期二血液標本采集的質(zhì)量保證一、采血服務 1.環(huán)境要求 a） 空間 b）窗口 2.生物安全 a）防止交叉感染 b）履行環(huán)境消毒 二、患者狀態(tài)要求（自學）242021/7/20 星期二三、采血操作對檢驗結果的影響1.采血時間2.采血部位3. 采血體位4.壓脈帶使用5.輸液6.溶血252021/7/20 星期二血標本溶血： 注射器和容器：干燥、清潔。抽血速度不能太快。抽血時避免產(chǎn)生大量泡沬。抽血后應先拔針頭，再注入。抗凝不能用力振蕩。離心速度不能過高。2

9、62021/7/20 星期二 一、血液標本運輸 1.唯一標識原則 2.生物安全原則 3.盡快運輸原則二、標本拒收 血液標本運輸、保存與處理272021/7/20 星期二三、血液檢驗前的預處理1.分離血清或血漿2.分離細胞282021/7/20 星期二分離后的標本 ： 一般應置于4，保存一個月的標本 ， 應-20 冰箱。保存3個月以上的標本，分離 后應該-70 保存。立即送檢標本檢測后的標本標本信息的保存四、血液標本保存292021/7/20 星期二 二、抗凝劑選擇 1、檸檬酸鈉（枸櫞酸鈉） a. 抗凝原理：螯合鈣離使用方法 配成 109 mmol/L的濃度和血液1：9 106 mmol/L的濃

10、度和血液1：4化學名：3-羥基-3-羧基戊二酸（三鈉鹽）c. 適用范圍：止血學檢驗、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性小）d. 不適用于：血細胞計數(shù) 302021/7/20 星期二2. 草酸鈉（乙二酸的鈉鹽）a. 抗凝原理：草酸鈣沉淀b. 使用方法： 草酸鈉 0.1mol/L 和血液1：9c. 適用范圍： 止血學檢驗 (制備正吸漿)。d. 不適用于：對凝血因子V保護功能差， 影響PT測定；沉淀物影響 自動凝血儀的使用。312021/7/20 星期二3. 雙草酸鹽抗凝劑 a. 抗凝原理： 草酸鈣沉淀使用方法： 草酸鉀0.8g , 草酸銨1.2g（100ml） 與血液 1：10 （80C以下烘干）適用范圍：

11、紅細胞檢驗（紅細胞比積、計數(shù)） d. 不適于: 血小板計數(shù)和白細胞分類計數(shù), 電解質(zhì)測定322021/7/20 星期二4. 肝素 （含硫酸基團的粘多糖）抗凝原理：低濃度時抑制因子a、和PF3之 間的作用，加強抗凝血酶滅活絲 氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成， 還能抑制凝血酶的自我催化及抑制 因子的作用；高濃度時阻斷凝血 酶和纖維蛋白的反應。 b. 適用方法： 1g/L濃度的肝素鈉與血液 1：10332021/7/20 星期二優(yōu)點：抗凝能力強、不影響血細胞體積、不易 溶血、能耐高溫。適用范圍：紅細胞檢驗（紅細胞計數(shù)、血紅蛋白 測定、紅細胞比積）和多種生化分析 e. 不適用于： WBC和BPL計數(shù)、

12、血涂片檢查、 凝血象檢驗。342021/7/20 星期二5. 乙二胺四乙酸（EDTA）鹽a. 抗凝原理： 螯合鈣離子b. 使用方法： 15g/L濃度EDTA 和血液 1：10適用范圍： 對血細胞形態(tài)影響小,適合血常規(guī)檢查、 Hct不適用于：影響血小板聚集和白細胞吞噬功能, 不宜凝血象檢查和血小板功能試驗。 352021/7/20 星期二 物理方法抗凝 脫纖維蛋白： 將血液注入有玻璃珠的器皿中，轉動， 纖維蛋白纏繞凝固于玻璃球，從而防止血 成凝塊。適用于免疫學檢驗和紅斑性狼瘡 細胞檢查。362021/7/20 星期二第二節(jié) 血涂片制備和細胞染色血涂片的制備方法血涂片制備的注意事項血液細胞染色細胞

13、染色時注意事項372021/7/20 星期二一、血涂片的制備技術血涂片的用途： 血細胞形態(tài)學檢驗、網(wǎng)織紅、 異常細胞、寄生蟲檢驗。 2. 血涂片制備步驟：（手工推片法）382021/7/20 星期二一玻片清潔： 1、新玻片處理：有游離堿質(zhì)。 2、用過玻片處理： 3、使用中玻片處理：只能持玻片邊緣， 保持清潔、干燥、 中性、無油膩。P 6392021/7/20 星期二二血涂片制作：揮動使之干燥，而后在血膜上寫編號或病人姓名。402021/7/20 星期二 將推玻片向1的方向稍抽回，當血液充滿推玻片的寬度后，以一定均勻的速度向2的方向滑動。412021/7/20 星期二三影響因素：422021/7

14、/20 星期二 二、血液細胞染色432021/7/20 星期二細胞染色技術（一）染料 （天然染料和人工染料） 發(fā)色基團和助色基團使生物學染色劑產(chǎn)生顏色和被染 組織親合。442021/7/20 星期二堿性染料：為陽離子染料，能接受質(zhì)子，染細胞核 的染料。如亞甲藍、天青。酸性染料：為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒 烷-氧雜蒽染料和偶氮染料兩類，能結合 細胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、 嗜酸性顆粒成分等。3. 復合染料： 同時具有陰、陽離子型的染料如瑞氏染料452021/7/20 星期二（二）細胞染色原理：1. 物理作用：毛細管現(xiàn)象、滲透、吸收、吸附作用等化學作用： a. 染料的化學成分： 助色

15、基團的存在，堿性染料在溶媒中為陽離子型，易與組織和細胞內(nèi)帶負電荷的酸性物質(zhì)結合；而酸性染料在溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質(zhì)結合。462021/7/20 星期二 b. 蛋白質(zhì)的化學性質(zhì)： 蛋白質(zhì)中的氨基酸含有不同 數(shù)量的氨基（-NH2）和 羧基（-COOH），同時還有其他活性基團。在游離狀態(tài)時， -NH2獲得一個H+變成帶正電的-NH3+，而-COOH失去一個H+變成帶負電的-COO-。分別與不同染料結合。472021/7/20 星期二 c. 周圍環(huán)境的酸堿度： 如環(huán)境pHpI（ pI 為等電點），則蛋白質(zhì)帶正電，結合酸性染料；反之， pH pI，則結合堿性染料。 PHH增多易與伊紅結合

16、染色偏紅 PHH減少易與美藍結合偏藍482021/7/20 星期二 （三）細胞染色法的類型 1. 普通染色法： 經(jīng)物理和/或化學作用的吸附、結合 2. 熒光染色法：熒光染料，熒光顯微鏡 3. 細胞活體染色法：活體染料如燦爛甲酚藍等 4. 細胞化學染色法：用化學反應顯示細胞內(nèi)某種成分。 細胞免疫化學染色法 （應用單克隆抗體技術、酶標記技術） 492021/7/20 星期二 瑞氏染色法（一）染色原理 分兩相進行，第一相是酸性伊紅與細胞中的堿性物質(zhì)如血紅蛋白、嗜酸性顆粒結合；堿性染料天青 B與細胞中的酸性物質(zhì)如核染色質(zhì)、特異中性顆粒、 血小板結合。第二相是天青B和伊紅結合在適宜條件下形成紫色的天青B

17、-伊紅復合物，結果使白細胞核染色質(zhì)成紫色（瘧原蟲的染色質(zhì)成紅色），中性粒細胞的顆粒及血小板顆粒區(qū)成紫色。502021/7/20 星期二 （二）試劑 1. Wright染液 瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml 磷酸鹽緩沖液（PBS）： （PH6.46.8） 磷酸二氫鉀（無水）0.3g，磷酸氫二鈉（無水）0.2g, 蒸餾水加到1000ml。 配好后用磷酸鹽溶液校正pH，塞緊瓶口備用。512021/7/20 星期二123 3. 染色方法： a. 用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。 b. 加瑞氏染液覆蓋血膜，固定1min。 c. 滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色5-10 分鐘。 d. 用清水沖洗，待干后鏡檢。522021/7/20 星期二注意事項： a. 血膜要干透后才能染色，否則染色時易脫落 b. 染色時間與染液濃度、室溫及細胞多少有關， 一般染液淡、染色時間長些效果好。 c. 染液不能過少，以防蒸發(fā)沉淀。 d. 沖洗時不能先倒掉染液，應以流水沖，防染料 沉著。沖洗