1、實驗室技術比武 實踐操作考核要求11實踐考試的總體原則A理解原理：必須掌握基礎知識B操作規范：掌握關鍵環節C結果符合要求D熟悉意外事故的應急處理22實踐考試的項目和范圍A艾滋病HIV抗體的ELISA檢測(手工操作）B痰涂片結核分支桿菌抗酸染色（現場操作演示）33實踐考試的參考資料A醫學實驗室作業指導書B實驗室檢驗標準 1全國艾滋病檢測規范 2全國臨床檢驗操作規程44實踐考試的考核方式A現場盲樣測試B檢測結果判斷和質控分析C現場提問D突發事件的處理E其它55實踐考試的操作要點A按照標準規范操作B符合生物安全要求C了解檢驗關鍵環節D知曉意外事故處理流程E掌握結果判斷方法F質控檢測符合要求66實踐操

2、作細節艾滋病HIV抗體的ELISA檢測(手工操作）7HIV 抗體檢測的要點篩查試驗陽性不能出陽性報告。嚴格遵守實驗室標準操作程序。嚴格按照試劑盒說明書操作。注意防止樣品間交叉污染。8常規HIV 抗體檢測的方法和程序酶聯免疫試驗（ELISA）9基本要求艾滋病檢測實驗室技術人員需要經過相關的業務培訓，經考核合格者由相關機構發給培訓證書，持證上崗。非衛生專業技術人員不得從事艾滋病檢測工作。 艾滋病篩查實驗室至少由3名醫技人員組成，其中具有中級衛生技術職稱人員至少1名。負責篩查試驗的技術人員需具有2年以上從事病毒性疾病血清學檢測工作經驗，接受過艾滋病確證實驗室組織的檢測技術培訓，并獲得培訓證書。10操

3、作個人防護要求進實驗室前要摘除首飾，修剪長的帶刺的指甲，以免刺破手套。在工作區內不應配帶戒指、耳環、腕表、手鐲、項鏈和其他珠寶。長發應束在腦后。離開實驗室前必須脫去隔離衣。工作完畢，用肥皂和流動水洗手。11HIV 抗體篩查檢測流程篩查和復檢： 對初篩呈陽性反應的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復檢測。如兩種試劑復測均呈陰性反應，則報告HIV 抗體陰性；如均呈陽性反應，或一陰一陽，需送艾滋病確認實驗室進行確認1213HIV 抗體檢測操作HIV抗體實驗的結果受操作影響很大，每個步驟包括加樣，溫育，洗滌，顯色，酶標儀讀數均應認真負責才能充分發揮ELISA的高靈敏，強特異的優點。

4、因此,必須按照實驗項目的標準操作程序規范操作。14HIV抗體檢測技術要求必須建立標準操作程序禁止肉眼判讀！保證酶標儀，洗板機正常運轉保證加樣器準確選擇高質量的與加樣器配套的TIP頭使用有效期內的試劑保證樣品離心質量15操作重點：加樣 微量移液器按規定的量加入微孔板的1/3處，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡。每次加樣應更換吸嘴，做到一人一吸頭;干吸頭預先在血清中抽吸三次。16操作重點：溫育 抗原抗體反應需要在一定溫度下（37C），經過一定的時間才能達到反應的平衡點溫育一般采用能使反應液溫度迅速達到平衡的水浴法。 A 放在水浴箱的隔板上 B 放在溫箱的濕盒里。水要浸至板條的1/3處

5、，不可將板條疊加放置。17操作重點：注意事項保證實驗室溫度，室溫過低有可能造成吸光度值偏低。本試驗的敏感性很高，如果操作不當很容易出現非特異性反應。在操作過程中，尤其應注意洗滌過程。洗滌徹底可減少假陽性的機會。必須用酶標儀進行測定，不得目測結果。使用酶標儀時，要避免酶標孔內產生氣泡，影響判讀結果。18操作重點：試驗假陽性 樣品加錯位置，標本搞錯洗板機設置不當，洗板時洗滌液溢出，污染其它孔洗板機內部管道有真菌生長實驗中，實際孵育時間過長，溫度過高待測標本溶血或含有血細胞。 待測標本長菌或其它原因混濁。其它原因：與試驗操作無關19操作重點：花板 空白和陰性，陽性對照以及室內質控孔結果正常，而標本的

6、陽性率很高，每板除對照孔外，有時陽性高達數孔之多，而大多數出現弱陽性結果。這就是試驗中所說的“花板”問題。這種現象對檢驗結果的正常判斷造成了很大的影響。 20“花板”產生的原因：檢測過程存在問題： 首先考慮檢測過程中的操作是否存在問題；通過完善的質量控制措施，可以查找可能存在的操作問題，或排除操作造成“花板”的可能。21預防“花板” 11 抽取樣本時應抽出足夠量的血液標本，按比例加抗凝劑，便于離心，得到足夠的血清（血漿）。2 血液標本應置于室溫下12h，使血液凝固收縮，然后離心檢測或讓血液過夜后再檢測。這樣才能使血液充分收縮，讓標本中非特異性物質所致假陽性率降至最低。3 檢測之前，加大離心轉速

7、，盡量延長時間，使血細胞和纖維蛋白充分沉淀，讓血細胞與血清徹底分離。22預防“花板” 24 加樣時不能加入紅細胞或纖維蛋白，要按照操作說明書去做，否則會影響實驗結果。5 封板溫育時，各孔一定要封嚴，防止陽性標本的液體蒸發，產生周邊現象從而導致“花板”的出現。6 用洗板機洗板時應防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板過程中易產生拖帶現象而導致“花板”出現。23醫務人員艾滋病病毒職業暴露防護工作指導原則(試行)(2004) 第八條 醫務人員發生艾滋病病毒職業暴露后，應當立即實施以下局部處理措施：1 用肥皂液和流動水清洗污染的皮膚，用生理鹽水沖洗粘膜。 2 如有傷口，應當在傷口旁輕輕擠壓，盡可能擠出損傷處的血液，再用肥皂液和流動水進行沖洗；禁止進行傷口的局部擠壓。3 受傷部位的傷口沖洗后，應當用消毒液，如75酒精或0.5碘伏進行消毒，并包扎傷口，被暴露的粘膜，應當反復用生理鹽水沖洗干凈24醫務人員艾滋病病毒職業暴露防護工作指導原則(試行)(2004) 第十四條