1、 附件3 食品中二苯乙烯類陰離子型熒光增白劑的測定BJS 201903 1范圍本方法規(guī)定了食用菌、大米、小麥粉和小麥粉制品、淀粉和淀粉制品中 11種二苯乙烯類陰離子型熒光增白劑的高效液相色譜測定方法。11種熒光增白劑包括熒光增白劑 24、熒光增白劑 71、熒光增白劑 85、熒光增白劑 90、熒光增白劑 113、熒光增白劑 210、熒光增白劑 220、熒光增白劑 264、熒光增白劑 353、熒光增白劑 357、熒光增白劑 5bm。本方法適用于食用菌、大米、小麥粉和小麥粉制品、淀粉和淀粉制品中 11種二苯乙烯類陰離子型熒光增白劑的定量分析。2原理試樣經(jīng)提取、凈化后，采用配有熒光檢測器的高效液相色譜

2、儀檢測，外標(biāo)法定量。試劑和材料3注：除另有說明，所有試劑均為分析純，試驗用水采用 GB/T 6682規(guī)定的一級水。3.1試劑3.1.1甲醇（CH4O）：色譜純。3.1.2四丁基溴化銨 TBA（C16H36BrN）：色譜純。3.1.3氨水（NH3H2O）：濃度 25%28%。3.1.4 0.1%氨水溶液：吸取 0.100 mL氨水（3.1.3），加入 100 mL去離子水中，混勻。3.1.5提取液：將甲醇（3.1.1）、水和氨水（3.1.3）按照 60:39:1體積混勻。3.1.6 TBA溶液：稱取 8.05 g四丁基溴化銨（3.1.2），用水定容到 1 L，經(jīng) 0.45 m微孔濾膜過濾后，超聲

3、脫氣。3.2標(biāo)準(zhǔn)品11種熒光增白劑標(biāo)準(zhǔn)品的基本信息見表 1。表 1 11種熒光增白劑的標(biāo)準(zhǔn)品信息名稱染料索引號C.I 24分子式CAS號熒光增白劑 24熒光增白劑 71熒光增白劑 85熒光增白劑 90C40H40N12Na4O16S4C40H38N12Na2O2S2C36H34N12Na2O8S2C34H28N10Na2O8S212224-02-116090-02-112224-06-53426-43-5C.I 71C.I 85C.I 901 名稱染料索引號C.I 113分子式CAS號熒光增白劑 113熒光增白劑 210熒光增白劑 220熒光增白劑 264熒光增白劑 353熒光增白劑 357熒

4、光增白劑 5bmC40H42N12Na2O10S2C40H36N12Na4O14S4C40H40N12Na4O16S4C40H38N12Na6O22S6C40H4036N12Na6O20S6C40H4038N12Na6O18S6C38H38N12Na2O8S212768-92-228950-61-012768-91-176482-78-555585-28-941098-56-013863-31-5C.I 210C.I 220C.I 264C.I 353C.I 357FWA 5bm3.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲備液：稱取適量各標(biāo)準(zhǔn)樣品（3.2），用 0.1%氨水溶液（3.1.4）配制成濃度為

5、 100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，04避光保存。有效期 3個月。3.3.2混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：吸取適量每種標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（3.3.1），用提取液（3.1.5）稀釋成 1.00 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，避光 04保存。有效期 1個月。3.3.3混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：吸取適量混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（ 3.3.2），用提取液（3.1.5）配成濃度為0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，臨用時配制。4儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜儀：配有熒光檢測器。4.2超聲波發(fā)生器。4.3渦旋混合器。4.4天平：感量分別為 0.01 g和 0

6、.000 1 g。4.5旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。4.6離心機(jī)。5分析步驟5.1試樣制備5.1.1試樣處理從原始樣品取出有代表性樣品約 500 g，用搗碎機(jī)充分搗碎混勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封，并標(biāo)明標(biāo)記。將試樣置于避光保存。5.1.2試樣制備準(zhǔn)確稱取 1 g試樣（精確至 0.01 g）置于塑料離心管中，加入提取液（3.1.5）10mL，渦旋震蕩 1 min，超聲 10 min后，用 4 000 r/min離心 5 min，取上層清液，0.45m微孔濾膜過濾后進(jìn)液相色譜儀分析。5.2儀器參考條件5.2.1色譜柱：C18柱，250 mm4.6 mm（i.d.），5 m，或性能相當(dāng)者。5.2

7、.2流動相：流動相 A相為甲醇，B相為 TBA溶液（3.1.6），流動相梯度洗脫條件如表 2。2 表 2梯度洗脫條件時間（min）A相/ %60B相/ %40015703025901025.130.0604060405.2.3流速：1.0 mL/min。5.2.4柱溫：30。5.2.5檢測器：激發(fā)波長 350 nm，發(fā)射波長 430 nm。5.2.6進(jìn)樣量：20 L。5.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（3.3.3）分別按液相色譜參考條件（5.2）進(jìn)行測定，得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.4試樣溶液的測定將試樣溶液（5.1

8、.2）按液相色譜參考條件（5.2）進(jìn)行測定，得到相應(yīng)的樣品溶液的色譜峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中目標(biāo)物的濃度，平行測定次數(shù)不少于兩次。6結(jié)果計算試樣中目標(biāo)物含量按式（1）計算：X C V （1）m式中：X試樣中檢測目標(biāo)物的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；C由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中檢測目標(biāo)物的濃度，單位為微克每毫升（g/mL）；V試樣提取過程中定容體積，單位為毫升（mL）；m試樣稱取的質(zhì)量，單位為克（g）。計算結(jié)果以重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。78精密度在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的 10%。其他當(dāng)稱樣量為 1.00 g，定容體積 10 mL時，本方法檢出限為 0.015 mg/kg，定量限為 0.050 mg/kg。3 附錄 A 熒光增白劑的高效液相色譜圖圖 A.1熒光增白劑標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度為 0.01