1、中藥制劑分析設計性實驗項目名稱杞菊地黃丸濃縮丸的質量分析組長副組長成員所屬院 部填表日期*中醫藥大學藥學院制杞菊地黃丸濃縮丸的質量分析一、實驗目的：1、掌握中藥濃縮丸的提取分離方法2、掌握中藥濃縮丸的理化鑒別和含量測定方法二、實驗原理：處方枸杞子40g菊花40g熟地黃160g山茱萸制80g牡丹皮60g山 藥80g扶苓60g澤瀉60g制法以上八味，取酒萸肉、牡丹皮、山藥粉碎成細粉；澤瀉、扶苓加水煎 煮二次，第一次3小時，第二次2小時，濾過，濾液合并濃縮至相對密度為1.30-1.35 60-80 的稠膏；熟地黃切片, 加水煎煮三次, 第一次 3 小時 , 第二次 2 小時 , 第三次 1 小時 ,

2、 濾過 , 濾液合并濃縮至相對密度為 1.30-1.35 60-80 的稠膏； 枸杞子以45%乙醇作溶劑, 剩余的酒萸肉與牡丹皮及菊花以70%乙醇作溶劑 , 浸漬 24h 后分別進行滲漉, 收集滲漉液, 合并上述滲漉液, 回收乙醇濃縮至相對密度為 1.30-1.35 60-80的稠膏；與上述細粉與稠膏混勻 ,制成濃縮丸,干燥 , 打光 , 即得。 性狀 本品為棕色至棕黑色的濃縮丸, 味甜而酸HPLC具有高效、高速和高分辨率的優勢。兼有分離和分析的作用，被廣泛用于制劑和原料藥的有關物質檢查以及含量測定, 常用外標一點法進行測定。不同藥物中含有不同物質, 其藥理和特性理化性質不同 , 可用于對某一

3、種或某一類藥物的定性鑒別。三、 實驗材料：器材： 高效液相儀分析天平塞錐形瓶冷凝管研缽量瓶剪刀超聲處理設備回流裝置 100ml 圓底燒瓶 , 冷凝管 , 橡皮管 , 鐵架臺 , 夾子等 100ml 具塞錐形瓶蒸發皿 60ml 分液漏斗等藥品： 處方中各類藥材丹皮酚對照品試劑 甲醇乙酸乙酯二氯甲烷石油醚無水乙醇乙醚丙酮三氯甲烷甲酸甲苯鹽酸冰醋酸硫酸環己烷三氯化鐵香草醛等實驗操作 ：（一）含量測定：按照高效液相色譜法2015年版藥典一部附錄VI D測 定。牡丹皮色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以 甲醇水 70： 30為流動相；檢測波長為274nmi理論板數按丹皮酚峰計算應

4、不低于3500。供試品溶液的制備 ：取濃縮丸粉末0.5g, 精密稱定。置具塞錐形瓶中 , 精密加入70%甲醇 70ml 甲醇 +30ml 水 50ml, 密塞 , 稱定重量 , 超聲處理 功率 250W,頻率33kHz 45 分鐘 , 放冷 , 再稱定重量, 用 70%甲醇補足減失的重量, 搖勻 , 濾過0.45小 微孔濾膜,取續濾液,即得。對照品溶液的制備： 取 丹皮酚對照品 適量 , 精密稱定 , 加甲醇制成每1ml 含20 的溶液，即得。測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各101,注入液相色譜儀，測定 , 即得。標準：本品含牡丹皮以丹皮酚CHoQ計，每1g不得少于1.1mg。陰性

5、對照試驗將供試品溶液, 陰性對照溶液按處方比例稱取除牡丹皮外的其他藥材同供試品溶液制備條件制備 , 丹皮酚對照品溶液各20ul, 分別注入液相色譜儀, 按上述色譜條件進行測定。應該得到三個色譜圖結果陰性應無干擾。線性試驗分別精密吸取對照品溶液4、8、12、16、20屋，按上述色譜條件，測定峰面 積。以色譜峰峰面積y為縱坐標，對照品進樣量x為橫坐標，繪制標準曲線并 進行線性回歸 , 得回歸方程, 相關系數 r 應不低于 0.999 。精密度試驗重復性 : 分別取同一批供試品 , 按供試品測定項下方法, 重復制備樣品 6 次 ,進行測定，計算含量平均值，結果用RSDfi表示，一般要求RS陰3%0穩

6、定性試驗考察供試品溶液保存的時間精密吸取同一供試品溶液10仙1,注入液相色譜儀，按上色譜條件，間隔不同 時間 0,0.5h、1h、2h、4h 進行測定，計算 RSDfi03%。精密度試驗考察儀器的精密度精密吸取同一對照品溶液10膜，注入液相色譜儀，按上條件進行測定，計 算 RSDfi03%。中間精密度試驗在同一個實驗室 , 不同時間由不同分析人員 , 用不同設備測定結果之間的精密度，結果用RSDfi表示，一般要求RS陰3%0重復性試驗對同一批號樣品，按照供試品溶液制備方法制備6次,進行測定，計算RSDfi 3% 。耐用性試驗液相色譜法典型的變動因素：不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱, 流動相的

7、組成比例的變化，流動相pH值的變化，柱溫，流速，檢測波長等。按上述條件對同一批樣品進行測定，計算含量和RSDfi&3%。加樣回收率試驗取已知含量的樣品 5 份 , 每份約 1.5g, 置燒杯中 , 加適量丹皮酚對照品 , 按照 供試品溶液制備方法進行處理樣品及測定，計算回收率和RSDfi&3%。樣品含量測定取三批樣品,各制備5份,按供試品溶液條件進行測定,計算RSDfi W 3%。（二） 理化鑒別枸杞子 ：含枸杞多糖, 又含甜菜堿 betaine 、阿托品、天仙子胺；另含玉蜀黍黃素 zeaxanthin 、 酸漿紅素 physalein 、隱黃質 cryptoxanthin 、東莨菪素 sco

8、poletin 、 胡蘿卜素、 核黃素、 煙酸、 維生素 B1、 B2 及 C 種 子含氨基酸：天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、亮氨酸等。供試品溶液制備： 取本品以下 本品 均指杞菊地黃丸 5g, 加水 35ml, 加熱煮沸 15分鐘 , 放冷 , 濾過 , 濾液用 乙酸乙酯 15ml 萃取 3次,分取乙酸乙酯液,濃縮至 1ml, 作為供試品溶液。對照藥材溶液制備： 另取枸杞子對照藥材0.5g, 同法制成對照藥材溶液。陰性對照溶液的制備： 按處方比例稱取除枸杞子外的其他藥材同法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法實驗：吸取上述三種溶液各5仙1,分別點于同一硅膠G薄層板上 , 以 乙酸乙酯 - 三氯甲烷

9、- 甲酸3： 2： 1為展開劑。展開, 取出 , 晾干 , 置紫外光燈365nm*檢視?；蛞约妆?乙酸乙酯-甲酸15:2:1的上層溶液為展開劑，展 開，取出，晾干，置紫外光燈365nmF檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相 應的位置上, 顯相同顏色的熒光斑點。菊花：含有揮發油約0.13%,菊花，腺喋吟，膽堿，水蘇堿，微量維生素A樣物質，維生 素B,氨基酸和刺槐素等供試品溶液制備：取本品5g,加石油醴15ml具塞錐形瓶，超聲處理10 分鐘 , 棄去石油醚, 藥渣揮干 , 加稀鹽酸 1ml 與乙酸乙酯50ml, 超聲處理 30分鐘 ,濾過 , 濾液蒸干 , 殘渣加甲醇2ml 使溶解 , 作為供試

10、品溶液。對照藥材溶液制備： 另取菊花對照藥材粉末1g, 同供試品溶液制法制成對照藥材溶液。陰性對照溶液的制備： 按處方比例稱取除菊花外的其他藥材同法制成陰性對 照品溶液。照薄層色譜法實驗：吸取上述三種溶液各5仙1,分別點于同一聚酰胺薄膜上 以甲苯 - 醋酸乙酯 - 甲酸 - 冰醋酸 - 水 2： 30： 2： 2： 4的上層溶液分液漏斗 為展開劑 , 展開 , 取出 , 晾干 , 置紫外光燈 365nm 下檢視。 供試品色譜中 , 在與對照品色譜相應的位置上, 顯相同顏色的斑點?；蛭∩鲜鋈N溶液各51,分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙 酯-冰醋酸24： 8： 1 為展開劑 , 展開

11、 , 取出 , 晾干 , 噴以10%的硫酸乙醇溶液10ml硫酸 +90ml 乙醇 ,在 105烘至斑點顯色清晰,并對結果進行分析。供試品色譜中,于對照品色譜相應的位置上 , 顯相同的紫紅色斑點。熟地黃：各種熟地黃的水及醇提取物較生、 干地黃多 , 但各種方法炮制的熟地黃, 水或醇提取物相差不大。干地黃中的特有的環烯醚萜及環烯醚萜甙, 而熟地中幾乎沒有。熟地黃中含葡萄糖8.57%,較鮮地黃中含量1.56%為高。在干地黃和熟地黃的炮制過程中 , 甙類成分亦有不同程度的分解, 其中以單糖甙分解最多 , 其次是雙糖甙 , 而三糖甙的地黃寧甙DRehmannioside D 幾乎不分解, 熟地黃除梓醇C

12、atalpol 分解不及干地黃外, 兩者的差異不明顯。供試品溶液的制備： 取本品 6g, 研碎。 加乙醇 30ml, 超聲處理 20 分鐘 , 濾過 , 濾液蒸干 , 殘渣加乙醇l ml 使溶解 , 作為供試品溶液。對照藥材溶液的制備： 另取熟地黃對照藥材1g, 加乙醇 15ml, 同法制成對照藥材溶液。陰性對照溶液的制備： 按處方比例稱取除熟地黃外的其他藥材, 同法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法試驗：吸取上述三種溶液各5屋，分別點于同一硅膠GF54薄層 板上，以石油醴6090c :乙酸乙酯1: 1或氯仿：甲醇7： 3為展開劑，展開， 取出 , 晾干 , 噴以 10%硫酸乙醇液,105加熱至

13、斑點顯色清晰。展開, 取出 , 晾干 ,置紫外光燈254nm*檢視。供11t品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯 相同顏色的斑點。酒萸肉：含有單萜類、脂肪醛、脂肪烴 , 酸、酯等芳香族化合物 , 另含有苷類成分, 如山茱萸苷、莫羅忍冬苷、 7-0- 甲基莫羅忍冬苷、獐牙菜苷、番木鱉苷以及鞣質類成分和蘋果酸、酒石酸、沒食子酸、維生素A。供試品溶液的制備： 取本品 5g, 剪碎 ,加乙酸乙酯l0ml, 超聲處理 15 分鐘 ,濾過 , 濾液蒸于 , 殘渣加無水乙醇2ml 使溶解 , 作為供試品溶液。對照藥材溶液的制備： 另取酒萸肉對照藥材1g, 加乙酸乙酯l0ml, 同法制成對照藥材溶液。陰

14、性對照溶液的制備： 按處方比例稱取除酒萸肉外的其他藥材同法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法實驗：吸取上述三種溶液各5仙1,分別點于同一硅膠G薄層板上, 以 甲苯一乙酸乙酯一甲酸為展開劑 或正丁醇-冰乙酸 -水4:1:5上層；或三氯甲烷- 甲醇 -水 13:7:2 下層展開, 取出 , 晾干 , 噴以10%硫酸乙醇 溶液 , 在 105加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中 , 在與對照藥材溶液色譜相應的位置上,顯相同的紫紅色斑點；置紫外光燈 為展開劑 , 展開 , 取出 , 晾干 , 噴以 鹽酸酸性 5%三氯化鐵乙醇溶液 5g 三氯化鐵溶于 100ml 乙醇 , 加少量鹽酸調至酸性 , 加熱至斑點顯

15、色清晰。 供試品色譜中 , 在與對照藥材色譜相應的位置上, 顯相同顏色的 條斑。或吸取上述兩種溶液各5仙1,分別點于同一硅膠 G薄層板上，以環己烷一乙 酸乙酯一冰醋酸或環己烷 -三氯甲烷 - 無水乙醇 7:3:1 為展開荊 ,展開 , 取出 , 晾干。噴以2%香草醛硫酸乙醇溶液10ml 硫酸用乙醇稀釋至100ml,將 2g 香草醛加入, 使溶解 , 在 105加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中, 在與對照品色譜相應的位置上, 顯相同顏色的斑點。山藥：含多巴胺、山藥堿、械素H、豆固醇、膽番醇、鹽酸山藥堿、麥角番醇、奎 寧酸、菜油甾醇、膽固醇、薯蕷皂苷元、尿囊素、菜油固醇、二十六酸、 &beta ；

16、 - 谷甾醇；另含游離氨基酸, 淀粉、鞣質、粘液質、糖蛋白、多酚氧化酶等成分。供試品溶液的制備： 取本品 5g, 剪碎 , 加 二氯甲烷 30ml, 加熱回流 1 小時 , 濾 過, 濾液蒸干 ,殘渣加二氯甲烷1ml 使溶解 , 作為供試品溶液。對照藥材溶液的制備： 另取山藥對照藥材5g, 同法制成對照藥材溶液。陰性對照溶液的制備： 按處方比例稱取除山藥外的其他藥材, 同法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法實驗：吸取上述三種溶液各4仙1,分別點于同一硅膠G薄層板 上 , 以 乙酸乙酯一甲醇一濃氨試液 或氯仿 : 甲醇 : 水 6.4:5:1 為展開劑 , 展開 , 取出 , 晾干 , 噴以2%香

17、草醛硫酸乙醇溶液 , 在105加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中 , 在與對照藥材色譜相應的位置上 , 顯相同顏色的斑點。茯苓：含三萜羧酸, 有茯苓酸、土莫酸、齒孑 L 菌、松苓酸、松苓新酸等, 還含有多聚糖 , 主要為茯苓聚糖, 含量最高可達75%,經結構改造后可得到具有較強抗腫瘤活性的茯苓次聚糖。此外, 尚含有組氨酸、腺嘌呤、膽堿、 &beta ； -茯苓聚糖酶、蛋白酶、脂肪酸、脂肪、卵磷脂、麥角甾醇、茯苓素等。供試品溶液制備：取本品6g,研碎，加乙醴50ml具塞錐形瓶，超聲處理 10 分鐘 , 濾過 , 濾液蒸干 , 殘渣加甲醇1ml 使溶解 , 作為供試品溶液。對照品藥材制備： 取茯苓對

18、照藥材1g, 同法制成對照藥材溶液。陰性對照溶液的制備： 按處方比例稱取除茯苓外的其他藥材, 同法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法實驗：吸取上述三種溶液各2仙1,分別點于同一硅膠G薄層板 上, 以甲苯一乙酸乙酯一甲酸為展開劑 , 展開 , 取出 , 晾干 , 噴以2%香草醛硫酸乙醇溶液 , 在 105加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中 , 在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。或吸取上述溶液各5(i 1,分別點于同一硅膠G薄層板上,以甲苯一乙酸乙酯一冰醋酸為展開劑，展開，取出, 晾干 , 噴以10%硫酸乙醇溶液, 在 105加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上, 顯相同顏色的斑點。澤瀉：含多種四環三菇酮醇衍生物，包括澤瀉醇A、澤3f醇B、澤3f醇C及澤瀉醇A 酸酯、澤瀉醇B酸酯、澤瀉醇C酸酯等。并含膽堿、卵磷脂和一種磷脂物質。供試品溶液的制備: 取本品 3g, 研細 , 加 60