1、過(guò)硫酸銨 分子式: (NH4)2S2O8 分子量: 228.20 性狀：過(guò)硫酸銨是一種白色、無(wú)味晶體，常作強(qiáng)氧化劑使用，也可用作單體聚合引發(fā)劑。它幾乎不吸潮，由于能達(dá)到很高的純度而具有特別好的穩(wěn)定性，便于儲(chǔ)存。另外，它還具有使用方便、安全等優(yōu)點(diǎn)。 儲(chǔ)存及使用注意事項(xiàng)： 過(guò)硫酸銨屬于非易燃品，但由于能釋放氧而有助燃作用，因此必須在一定條件下儲(chǔ)存。首先必須存放在干燥、密閉的容器中，其次應(yīng)避免陽(yáng)光直射、熱源、潮濕等不利因素。另外，一些雜質(zhì)如臟物、鐵銹、少量金屬以及還原劑可能引起過(guò)硫酸銨的分解，在存放和使用過(guò)程中也必須注意。由于潮濕的過(guò)硫酸銨粉末及其水溶液有漂白和輕微的腐蝕作用，因此使用過(guò)程中應(yīng)避免眼

2、睛、皮膚和衣物直接與其接觸。 過(guò)硫酸銨的應(yīng)用：過(guò)硫酸銨提供驅(qū)動(dòng)丙烯酰胺和雙丙烯酰胺聚合所必需的自由基。須新鮮配制。 過(guò)硫酸銨是乳膠或丙烯酸單體聚合液、醋酸乙烯、氯乙烯等產(chǎn)品的引發(fā)劑，同時(shí)也是苯乙烯、丙烯腈、丁二烯等膠體發(fā)生共聚作用的引發(fā)劑。1過(guò)硫酸銨-TEMED（四甲基乙二胺）系統(tǒng) ：在Acr 和Bis的溶液中放入這個(gè)催化系統(tǒng)后，過(guò)硫酸銨（NH4）2S2O8產(chǎn)生出游離氧原子使單體成為具有游離基的狀態(tài)，從而發(fā)生聚合作用。聚合的初速度和過(guò)硫酸銨濃度的平方根成正比。這種催化系統(tǒng)需要在堿性條件下進(jìn)行。例如，在pH 8.8條件下7的丙烯酰胺溶液30分鐘就能聚合完畢；在 pH 4.3時(shí)聚合很慢，要90分鐘

3、才能完成。溫度與聚合的快慢成正比。通常在室溫下就很快聚合，溫度升高聚合更快。如將混合后的凝膠溶液放在近0的地方，就能延緩聚合。一般來(lái)講，溫度過(guò)低，有氧分子或不純物質(zhì)存在時(shí)都能延緩凝膠的聚合。為了防止溶液中氣泡含有氧分子而妨礙聚合，在聚合前須將溶液分別抽氣，然后再混合。 2不連續(xù)系統(tǒng)由上層濃縮膠和下層的分離膠組成。濃縮膠（pH6.7，孔徑大）主要作用是使樣品濃縮，使樣品在未進(jìn)入分離膠前，被濃縮成很窄的條帶，從而提高分離效果。分離膠（pH8.9，孔徑小）通過(guò)分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng)，把樣品中的各組分按分子量和電荷的大小而分開(kāi)。 如果要利用凝膠電泳測(cè)定某一蛋白質(zhì)的分子量就必須將電荷效應(yīng)去掉或減少到可以忽

4、略不計(jì)的程度，使蛋白質(zhì)泳動(dòng)率的大小完全取決于分子量。如何去除電荷效應(yīng)呢？現(xiàn)常用的是十二烷基硫酸鈉（SDS）。SDS是一種陰離子去污劑。在電泳體系中加入一定濃度的SDS，SDS以一定的比例和蛋白質(zhì)分子結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電荷，這種負(fù)電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)了蛋白質(zhì)分子原有的電荷，從而減低或消除了各種蛋白質(zhì)分子天然電荷的差異。 十二烷基硫酸鈉 SDS 是陰離子型表面活性劑，它能按一定比例與蛋白質(zhì)分子結(jié)合成帶負(fù)電荷的復(fù)合物，再與PAGE技術(shù)結(jié)合，則譜帶差異更加明顯、清晰，并可測(cè)定蛋白質(zhì)分子量。在有去污劑十二烷基硫酸鈉存在下的聚丙烯酰胺凝膠電泳。SDS只是按照分子大小分離的，而不是根據(jù)分子所帶的電荷和大

5、小分離的。 SDS帶有大量負(fù)電荷，當(dāng)其與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)，所帶的負(fù)電荷大大超過(guò)了蛋白質(zhì)原有的負(fù)電荷，因而消除或掩蓋了不同種類(lèi)蛋白質(zhì)間原有電荷的差異，使蛋白質(zhì)均帶有相同密度的負(fù)電荷，因而可利用Mr差異將各種蛋白質(zhì)分開(kāi)。3 最廣泛使用的不連續(xù)緩沖系統(tǒng)最早是由Ornstein(1964) 和Davis(1964) 設(shè)計(jì)的, 樣品和濃縮膠中含 Tris-HCl(pH 6.8), 上下槽緩沖液含Tris-甘氨酸(pH 8.3), 分離膠中含Tris-HCl(pH 8.8)。系統(tǒng)中所有組分都含有0.1% 的 SDS(Laemmli, 1970)。樣品和濃縮膠中的氯離子形成移動(dòng)界面的先導(dǎo)邊界而甘氨酸分子則組成尾

6、隨邊界，在移動(dòng)界面的兩邊界之間是一電導(dǎo)較低而電位滴度較陡的區(qū)域, 它推動(dòng)樣品中的蛋白質(zhì)前移并在分離膠前沿積聚。此處pH值較高， 有利于甘氨酸的離子化，所形成的甘氨酸離子穿過(guò)堆集的蛋白質(zhì)并緊隨氯離子之后，沿分離膠泳動(dòng)。從移動(dòng)界面中解脫后，SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物成一電位和pH值均勻的區(qū)帶泳動(dòng)穿過(guò)分離膠，并被篩分而依各自的大小得到分離。 甘氨酸4濃縮效應(yīng)：凝膠由兩種不同的凝膠層組成。上層為濃縮膠，下層為分離膠。濃縮膠為大孔膠，緩沖液pH6.7，分離膠為小孔膠，緩沖液pH8.9。在上下電泳槽內(nèi)充以Tris甘氨酸緩沖液(pH8.3)，這樣便形成了凝膠孔徑和緩沖液pH值的不連續(xù)性。在濃縮膠中 HCl幾乎全部

7、解離為Cl-，但只有極少部分甘氨酸解離為H2NCH2COO-。蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)一般在pH5左右，在此條件下其解離度在HCl和甘氨酸之間。當(dāng)電泳系統(tǒng)通電后，這3種離子同向陽(yáng)極移動(dòng)。其有效泳動(dòng)率依次為Cl-蛋白質(zhì)H2NCH2COO-，故C1-稱為快離子，而H2NCH2COO- 稱為慢離子。電泳開(kāi)始后，快離子在前，在它后面形成離子濃度低的區(qū)域即低電導(dǎo)區(qū)。電導(dǎo)與電壓梯度成反比，所以低電導(dǎo)區(qū)有較高的電壓梯度。這種高電壓梯度使蛋白質(zhì)和慢離子在快離子后面加速移動(dòng)。在快離子和慢離子之間形成個(gè)穩(wěn)定而不斷向陽(yáng)極移動(dòng)的界面。由于蛋白質(zhì)的有效移動(dòng)率恰好介于快慢離子之間，因此蛋白質(zhì)離子就集聚在快慢離子之間被濃縮成條狹窄帶

8、。這種濃縮效應(yīng)可使蛋白質(zhì)濃縮數(shù)百倍。5電荷效應(yīng)：樣品進(jìn)入分離膠后，慢離子甘氨酸全部解離為負(fù)離子，泳動(dòng)速率加快，很快超過(guò)蛋白質(zhì)，高電壓梯度隨即消失。此時(shí)蛋白質(zhì)在均一的外加電場(chǎng)下泳動(dòng)，但由于蛋白質(zhì)分子所帶的有效電荷不同，使得各種蛋白質(zhì)的泳動(dòng)速率不同而形成一條條區(qū)帶。但在 SDS電泳中，由于SDS這種陰離子表面活性劑以一定比例和蛋白質(zhì)結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電荷，這種負(fù)電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)了蛋白質(zhì)分子原有的電荷差別，從而降低或消除了蛋白質(zhì)天然電荷的差別；此外，由多亞基組成的蛋白質(zhì)和SDS結(jié)合后都解離成亞單位，這是因?yàn)镾DS破壞了蛋白質(zhì)氫鍵、疏水鍵等非共價(jià)鍵。與SDS結(jié)合的蛋白質(zhì)的構(gòu)型也發(fā)生變化，在水溶

9、液中SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物都具有相似的形狀，使得SDS電泳的泳動(dòng)率不再受蛋白質(zhì)原有電荷與形狀的影響。因此，各種SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物在電泳中不同的泳動(dòng)率只反映了蛋白質(zhì)分子量的不同。6Acr-Bis產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 40% Acr-Bis(39:1)即為含40 acrylamide-bisacrylamide的水溶液，其中acrylamide和bisacrylamide的比例為39:1。 40% Acr-Bis(39:1)常用于配制各種PAGE凝膠，例如EMSA凝膠、RPA凝膠等，可以用于蛋白或核酸等的分離，是實(shí)驗(yàn)室的常用儲(chǔ)備液。保存條件：4避光保存。注意事項(xiàng)： 40% Acr-Bis(39:1)有一定毒性，使用時(shí)請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠作為載體的一種區(qū)帶電泳。這種凝膠是以丙烯酰胺單體（Acrylamide，簡(jiǎn)寫(xiě)為Acr）和交聯(lián)劑N，