1、培養基灌裝試驗方案培養基灌裝試驗方案Luisa Stoppa無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會 Nanjing, the Peoples Republic of China 16-20 November 20092 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009培訓目的培訓目的l 評估無菌生產模擬試驗（培養基灌裝或肉湯灌裝）l 了解在培養基灌裝試驗方案設計過程中的關鍵點，以符合法規要求 l 學會如何對失敗進行評估，以及可能帶來的后果 l 在團隊中進行討論3 |無菌

2、藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009無菌生產工藝無菌生產工藝:培訓目的培訓目的4 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009培養基灌裝的原則培養基灌裝的原則l 為什么無菌工藝的驗證必須符合制藥行業的規范？“無菌藥品”的含義是“沒有活體微生物” 在無菌檢測過程中，實際上并沒有對每個產品進行檢測，所以應采取所有努力減少污染的風險(潔凈廠房、 HVAC 、

3、壓差、清洗程序、監測計劃)盡管采取這些措施，但污染永遠是一個潛在的風險，因為無菌工藝操作是在一個受控但是非滅菌的環境中進行的，并且樣品取樣數量太小，所以只有嚴重污染才可能被發現。5 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009培養基灌裝的原則培養基灌裝的原則l 制藥相關法規 :- 法規：FDA “,無菌生產工藝 生產無菌藥品的行業指南 cGMP” - - EU GMP Part I 附錄 1 - PIC/S PI 007-2 “無菌生產工藝驗證指南”l 雖然培養基灌裝試驗必

4、須復制無菌生產條件，但是模擬試驗與藥品實際生產過程采取完全相同的方式是不可能的。 什么培養基？灌裝多少數量？多長時間？ 6 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009培養基灌裝的原則培養基灌裝的原則l 在無菌生產工藝中，最大的風險來源于潔凈室中人員的操作，所以操作人員必須參加培養基灌裝試驗。操作人員需要什么樣的資質？以及什么時候可以確認操作人員的合格性？ l 在無菌灌裝操作中，應進行環境監測。 是否需要額外的監測措施？ 7 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會

5、Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009培養基灌裝的原則培養基灌裝的原則l 通常情況下，應該包括產品實際操作過程中可能發生的“最差條件” 必須考慮可能采取那些干預措施 ?8 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009清洗設備清洗設備隧道烘箱隧道烘箱灌裝設備灌裝設備壓塞機壓塞機壓蓋機壓蓋機模擬試驗模擬試驗: 液體無菌灌裝生產線液體無菌灌裝生產線9 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會N

6、anjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009模擬試驗模擬試驗: 培養基灌裝方案培養基灌裝方案l 需要考慮的關鍵因素 :試驗的數量和頻率 培養基 (產品的替代品)灌裝的數量容器 (玻璃瓶) 體積灌裝體積生產速度(或 灌裝速度)灌裝過程的持續時間工作班次監測措施 干預措施 常規的和非常規的培養方法可接受標準10 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009模擬試驗模擬試驗: 培養基灌裝方案培養基灌裝方案11

7、 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關鍵因素: 試驗的次數和頻率 培養基模擬試驗的初始驗證，至少需要成功的連續進行 3 次獨立的模擬試驗（建議在不同的工作日進行試驗）。 首次驗證后，培養基模擬試驗通常每年進行2次。當生產線發生變更，并且經過評估可能對無菌生產工藝有潛在危險時，應當進行額外的培養基灌裝試驗。 培養基灌裝方案培養基灌裝方案12 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of Chin

8、a, 16-20 November 2009l 關鍵因素: 培養基 (1/3)培養基必須適應廣譜微生物的生長，包括需氧菌、酵母菌和霉菌（非選擇性培養基）。推薦使用大豆消化酪素瓊脂培養基(SCD) ，以及大豆胰蛋白胨肉湯(TSB).如果產品在缺氧條件、通常在氮氣保護下灌裝時，需要使用厭氧培養基:液體硫乙醇酸鹽培養基(FTM).培養基灌裝方案培養基灌裝方案13 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關鍵因素: 培養基(2/3)培養基必須適應微生物的生長（促生長試驗）。

9、被試驗的微生物可以從藥典 (美國、歐盟、日本)中選擇。另外推薦使用12種最常見的環境分離菌。 通常情況，在培養結束后，一些玻璃瓶（從生產開始、中間、結束時取樣）進行微生物接種，接種量100CFU，分別培養3天（細菌）和5天（酵母菌和霉菌）。培養基灌裝方案培養基灌裝方案14 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關鍵因素: 培養基(3/3)如果培養基中含有動物源性成分，可能導致朊蛋白污染。那么很重要的是，培養基供應商能夠提供證明，確認相關物質來源于沒有牛海綿狀腦病（

10、BSE-free）的國家 。另一種方法是可以使用從植物中提取的TSB培養基。 SDC 粉末通常遭受支原體的污染，并且無法在無菌過濾中去除。在這種情況下，可以在粉末灌裝前，對粉末進行滅菌（使用射線）。培養基灌裝方案培養基灌裝方案15 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關鍵因素: 灌裝數量 灌裝的數量應該能夠真實的反應批量；但允許根據需要，采取最低灌裝數量，前提是應足以反應操作員工疲勞時對產品質量潛在的影響 ，并且足以體現了盡可能發生的干預措施。一些法規中建議應該

11、根據批量確定灌裝的數量。培養基灌裝方案培養基灌裝方案16 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關鍵因素: 容器體積(1/2)應該考慮到灌裝容器的極端尺寸。最大的容器（通常由于充填體積較大而導致最小的充填速度）通常開口較大，所以從環境中微生物侵入的潛在風險是最大的。最小的容器（通常由于充填體積較小而導致最大的充填速度）體現了最大的操作難度；小的容器更容易破碎，穩定性差，在設備中更容易破裂或堵塞。培養基灌裝方案培養基灌裝方案17 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查

12、員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關鍵因素: 容器體積(2/2) 在最初的驗證中，可以二次選用最大的容器，第三次選用最小的容器。在日常的評估中，其它規格尺寸的容器也應該包括在驗證計劃中。不能使用琥珀色的容器，而應該使用透明的容器，保證可以目視檢測到微生物的生長。培養基灌裝方案培養基灌裝方案18 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關鍵因素: 灌裝體積培養基灌裝體積

13、不需要與現實中常規的灌裝體積一致。 應確定足夠的灌裝體積，保證可以充分接觸到容器密封部位的表面(當它倒置和旋轉時)，并且足以目視檢測到微生物在培養后的生長情況。 較小的容器不能灌裝的太滿，因為容器上部的空間中應保持足夠的空氣，以支持需氧微生物的生長（通常應該保留25%的空間）。培養基灌裝方案培養基灌裝方案19 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關鍵因素: 生產線 (或 灌裝) 速度培養基灌裝的速度，應符合實際生產的灌裝速度范圍。如果超過了限度，應該進行評估。

14、每次模擬試驗中確定的速度應該是符合要求的。較高的生產速度，可以適用于生產過程中經常受到干擾或手工操作較多的生產工藝。 較低的生產速度，可以應用于在無菌區域中無菌部件長時間暴露的生產工藝。 在灌裝生產線的起始驗證中，一次可以選用最低速度，另外二次可以選用最高速度。在生產線的日常評估中，模擬試驗的速度應該進行變換。 培養基灌裝方案培養基灌裝方案20 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關鍵因素: 灌裝的持續時間 即使使用最精確的模型模擬實際生產運行，其他的因素也需要

15、考慮，以確保其合理性。 通常情況，培養基灌裝的時間應該足夠長，能夠包括所有的必需的干擾、生產中斷，以及反應出潛在的人員疲勞，一個典型的培養基灌裝可以至少是3-4小時。 一次理想的培養基灌裝應該灌裝比實際產品生產時更多的數量（所有的批次均應大于5000個單位）。對于非常大的批量或較長的生產過程，通常使用一些空白樣品（空的或者灌水）以維持模擬試驗的動態環境。這些技術可以應用于持續多個工作日的工藝驗證，用于驗證可以批準的最長的生產周期。培養基灌裝方案培養基灌裝方案 21 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 1

16、6-20 November 2009l 關鍵因素: 工作班次需要進行無菌工藝操作的每個操作員工都必須參與培養基灌裝試驗。 設備和生產線的操作員工應該每年參加不少于一次的模擬試驗；其它操作員工比如設備工程師和環境取樣人員也應該采取相同的方式。 應該確定無菌操作間可以最多容納的操作人員數量。當一個公司有多個班次工作時，第二個班次、第三個班次也應該包括在培養基灌裝試驗的計劃中。 如果手工操作（灌裝），每條生產線的員工都應該參加開始的三次驗證；在再驗證（每6個月1次）過程中，至少有一條生產線的員工參加。培養基灌裝方案培養基灌裝方案 22 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing,

17、 the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關鍵因素: 環境監測措施在許多法規和制藥規范中，都提出了對微生物的要求。 在試驗過程中，可以使用主動采樣或被動采樣的方法進行空氣采樣；表面采樣最好在無菌操作結束后進行。另外還應該對操作人員進行監測。 在培養灌裝過程中，微生物監測（空氣、表面、人員）和懸浮粒子監測應該按照各自的操作規程有效的進行。有時候，取樣點的數量可以較日常監測適當增加。培養基灌裝方案培養基灌裝方案 23 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of Ch

18、ina, 16-20 November 2009l 關鍵因素: 干預措施 常規的和非常規的-干預措施應該模擬實際運行時可能發生的情況；培養基灌裝記錄中應該記錄所有發生的干預措施，以及被移走產品的數量。 常規的干預措施：對于無菌生產線的安裝，如果已經滅菌的部件脫離保護措施而被安裝的話，是一個潛在危險。因此，開始灌裝的容器更容易反映出無菌設備裝配的潛在問題。 其它的常規干預措施：膠塞供給， 移走掉落的玻璃瓶, 移走堵塞的膠塞，人員的停頓，換手套，環境的監測。 非常規的干預措施（意外發生）：玻璃瓶破裂，灌裝針頭的更換或重新安裝，稱量調整的干預，傳感器故障，傳輸帶的調整。 培養基灌裝方案培養基灌裝方案

19、 24 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關鍵因素: 培養方法任何灌裝的產品都應該在培養前進行檢查，發現任何不合格品（如容器密封性存在問題或完整性不好）時，都應該被剔除并記錄。 行業規范中不同的要求: 全部樣品應在20-35(2.5)下培養14天。通常在 20-25下 培養 7 天，然后在30-35下培養 7 天；或者在30-35培養 7 天后，再轉移到 20-25培養 7 天。關于培養條件的選擇，補充一個沒有形成共識的建議，在培養過程的前半個周期，將所有產品

20、進行倒置后培養；然后在剩余時間內，將產品恢復直立位置后進行培養。 培養基灌裝方案培養基灌裝方案 25 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關鍵因素: 可接受標準試驗的目標是不出現長菌（陽性為0），但置信度為95時，污染率應小于0.1% (在5000個灌裝單位中，大約有1個被污染)。FDA 和PDA 要求，不管試驗的數量，被污染的產品數量都應該是0。很重要的一點，培養基灌裝試驗的失敗是十分罕見的。發生任何微生物污染時，均應進行調查。培養基灌裝方案培養基灌裝方案 2

21、6 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關鍵因素: 可接受標準培養基灌裝方案培養基灌裝方案 Filled units per runContaminated units permitted (action level)30000475016300277503915041051051184061315071443081571091696010表格顯示了培養基灌裝試驗中，不同灌裝數量時，按照置信度為95、污染率應小于0.1%計算，可以允許的最大污染數。 加拿大衛生部

22、Health Canada27 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009污染污染l 發生失敗 (污染)時，必須確定最根本的原因，或者至少是最可能的原因。l 能夠對微生物進行分離和鑒別（鑒定到種鑒定到種），這一點非常重要。l 實施適當的糾偏措施和預防措施 l 必須評估失敗對已經放行批次（如果有的話）的影響 l 當糾偏措施實施后，應該進行一次新的培養基灌裝試驗，以確認其有效性 28 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples R

23、epublic of China, 16-20 November 2009污染污染 率率灌裝過程灌裝過程(時間或灌裝量時間或灌裝量)污染污染l 在灌裝過程中污染率上升 這表明污染可能來源于液體培養基 (如與培養基貯罐非無菌連接，在循環管路中受到污染)。很重要的是，在灌裝結束后，保持培養基貯罐處于無菌狀態，當等到培養基灌裝結果時，可以核實這樣的假設。29 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009污染率污染率灌裝過程灌裝過程(時間或灌裝量時間或灌裝量)污染污染l 在灌裝過程

24、中污染率下降這表明污染發生于生產設備中（ 膠塞容器/ 軌道, 計量泵 / 針頭)，在灌裝過程中污染被部分或全部“清洗掉”。30 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009污染率污染率灌裝過程灌裝過程(時間或灌裝量時間或灌裝量)污染污染l 在灌裝過程中污染率出現尖峰一個尖峰（在短時段的一些產品被污染）可能與在灌裝過程中不正確操作導致的關鍵失誤有關。對于這個原因，很關鍵的是必須知道被污染產品灌裝的準確時間，以及當時實施的干預措施（灌裝操作過程的錄像是非常有用的）31 |無菌藥

25、品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009污染率污染率灌裝過程灌裝過程(時間或灌裝量時間或灌裝量)污染污染l 污染率出現尖峰后，呈上升趨勢 與前面的例子相同，但如果錯誤的干預措施能夠影響到液體的管路/回路時（如培養基貯罐的變化，泵或針的替換）32 |無菌藥品生產SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009污染率污染率灌裝過程灌裝過程(時間或灌裝量時間或灌裝量)污染污染l 孤立事件(試驗中少數污染)不幸的是，這些現象是最普通的，也是最難調查的。如果這種現象在多次試驗中反復出現，可能說明這個工藝存在“環境噪聲”，所以需要根本的措施（