1、 醫學微生物學醫學微生物學實驗三實驗三南華大學病原學實驗中心南華大學病原學實驗中心微生物學與免疫學教研室微生物學與免疫學教研室1、細菌的人工培養講授）、細菌的人工培養講授）2、細菌的培養方法：、細菌的培養方法： 固體培養基接種法自做）；固體培養基接種法自做）； 半固體、液體培養基接種法示教）半固體、液體培養基接種法示教）3、葡萄球菌、鏈球菌培養及生化示教）、葡萄球菌、鏈球菌培養及生化示教）4、細菌的形態觀察、細菌的形態觀察 自閱片：甲型鏈球菌、結核桿菌自閱片：甲型鏈球菌、結核桿菌 示教片：淋球菌、肉毒桿菌、產氣莢膜桿菌、白喉桿菌、示教片：淋球菌、肉毒桿菌、產氣莢膜桿菌、白喉桿菌、炭疽桿菌炭疽桿

2、菌實驗內容實驗內容第四節第四節 細菌的人工培養細菌的人工培養 p31p31一、培養基一、培養基culture mediumculture medium）：）：是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養物制品。使用的混合營養物制品。常用培養基的種類常用培養基的種類 按營養組成和用按營養組成和用途分途分厭氧培養基厭氧培養基基礎培養基基礎培養基增菌培養基增菌培養基選擇培養基選擇培養基鑒別培養基鑒別培養基二、細菌在培養基中的生長情況二、細菌在培養基中的生長情況 據物理狀據物理狀態分態分1 1、液體培養基：、液體培養基：均勻混濁、沉淀生長、表面生長

3、菌膜）；均勻混濁、沉淀生長、表面生長菌膜）；多用于增菌多用于增菌均勻混濁均勻混濁對照對照沉淀生長沉淀生長2 2、固體培養基：、固體培養基： 含含1.5%1.5%瓊脂瓊脂 用于分離培養用于分離培養菌落：單個細菌分裂繁殖成一堆肉菌落：單個細菌分裂繁殖成一堆肉眼可見眼可見 的細菌集團。的細菌集團。純培養：挑取一個菌落，移種到另純培養：挑取一個菌落，移種到另一培養一培養 基中，生長出來的基中，生長出來的細菌均為純細菌均為純 種，稱為純培養。種，稱為純培養。菌落特征大小、外形、顏色、氣菌落特征大小、外形、顏色、氣味、透明度、光滑或粗糙、濕潤或味、透明度、光滑或粗糙、濕潤或干燥、隆起或扁平、邊緣整齊與否、

4、干燥、隆起或扁平、邊緣整齊與否、是否溶血等是否溶血等有助于細菌鑒定有助于細菌鑒定菌落菌落S型）型）菌苔菌苔菌落菌落R型）型）光滑型光滑型(S型型)粗造型粗造型(R型型)粘液型粘液型(M型型) 3 3、半固體培養基：含、半固體培養基：含0.3%0.5%0.3%0.5%瓊脂瓊脂 鞭毛菌鞭毛菌混濁生長沿穿刺線呈云霧狀混濁生長沿穿刺線呈云霧狀/ /羽毛狀）羽毛狀） 無鞭毛菌無鞭毛菌沿穿刺線呈線狀生長沿穿刺線呈線狀生長 用于檢測細菌的動力和保存菌種用于檢測細菌的動力和保存菌種斜面劃線示意圖斜面劃線示意圖4 4、斜面培養基接種法、斜面培養基接種法運用：短期保存菌種運用：短期保存菌種三、人工培養細菌的用途三

5、、人工培養細菌的用途u在醫學中的應用在醫學中的應用u 1. 1.感染性疾病的病原學診斷：明確病因，指導感染性疾病的病原學診斷：明確病因，指導用藥用藥u 2. 2.細菌學的研究：細菌遺傳、變異、耐藥性細菌學的研究：細菌遺傳、變異、耐藥性u 3. 3.生物制品的制備：疫苗、類毒素、抗毒素生物制品的制備：疫苗、類毒素、抗毒素u在工農業生產中的應用在工農業生產中的應用 （抗生素、維生素、酶制劑（抗生素、維生素、酶制劑等）等） u在基因工程中的應用（在基因工程中的應用（ 基因工程菌基因工程菌乙肝疫苗）乙肝疫苗）進入實驗內容講授進入實驗內容講授1 1、固體培養基、固體培養基( (平板平板) )接種法接種法

6、分區劃線法分區劃線法連續劃線法連續劃線法第一區劃線第一區劃線滅菌接種環滅菌接種環第二區劃線第二區劃線滅菌接種環滅菌接種環第三區劃線第三區劃線滅菌接種環滅菌接種環滅菌接種環，取菌準備滅菌接種環，取菌準備分區劃線法分區劃線法原劃線原劃線標本：混合菌液標本：混合菌液分組：分組：1人一個固體平板人一個固體平板連續劃線法連續劃線法菌落示意圖菌落示意圖細菌在固體培養基中的生長現象細菌在固體培養基中的生長現象細菌在固體培養基中的生長現象細菌在固體培養基中的生長現象 菌菌 落落 菌落特征：大小、外形、顏色、氣味、透明度、菌落特征：大小、外形、顏色、氣味、透明度、表面光滑或粗糙、濕潤或干燥、邊緣整齊與否、溶表面

7、光滑或粗糙、濕潤或干燥、邊緣整齊與否、溶血性等。血性等。 菌落類型：菌落類型： S S型、型、 R R型、型、 MM型菌落。型菌落。 菌菌 苔：指多個菌落融合在一起形成的細菌堆積物。苔：指多個菌落融合在一起形成的細菌堆積物。菌落菌落S型）型）菌苔菌苔菌落菌落R型）型）光滑型光滑型(S型型)粗造型粗造型(R型型)粘液型粘液型(M型型)本卷須知本卷須知1、無菌操作、無菌操作2、密而不重疊、密而不重疊3、勿劃破瓊脂、勿劃破瓊脂4、做好標記，第二天觀察結果、做好標記，第二天觀察結果2、葡萄球菌培養示教）、葡萄球菌培養示教）營養要求不高，普通培養基生長良好營養要求不高，普通培養基生長良好 菌菌 落：落：

8、 S S型菌落，型菌落，金黃色、表皮、腐金黃色、表皮、腐生葡萄球菌各自形生葡萄球菌各自形成金黃色、白色、成金黃色、白色、檸檬色檸檬色- -脂溶性色素脂溶性色素血平板：血平板： 金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌形成的形成的-溶血環溶血環金黃色色素金黃色色素白色色素白色色素3 3、鏈球菌培養示教）、鏈球菌培養示教） 血平板上的菌落：血平板上的菌落： 甲型溶血性鏈球菌形甲型溶血性鏈球菌形成草綠色溶血現象，乙型溶血性鏈球菌形成草綠色溶血現象，乙型溶血性鏈球菌形成透明的完全溶血現象，丙型鏈球菌無溶成透明的完全溶血現象，丙型鏈球菌無溶血現象。血現象。甲鏈甲鏈溶血溶血草綠色溶血草綠色溶血乙鏈乙鏈溶血溶血丙鏈丙鏈

9、不溶血不溶血4、常見致病菌的形態與染色性、常見致病菌的形態與染色性取材：純培養物取材：純培養物染色法：革蘭染色染色法：革蘭染色放大倍數：放大倍數：10X100自閱片之一自閱片之一取材：痰涂片取材：痰涂片染色法：抗酸染色染色法：抗酸染色放大倍數：放大倍數：10X100自閱片之二自閱片之二菌體染成紅色，菌體染成紅色，細長略微彎曲桿細長略微彎曲桿菌，單個或分枝菌，單個或分枝狀排列；狀排列；（非抗酸菌及細（非抗酸菌及細胞染成藍色）胞染成藍色）示教片之一示教片之一取材：泌尿道膿性分泌物取材：泌尿道膿性分泌物染色法：革蘭染色染色法：革蘭染色放大倍數：放大倍數：10X100中性粒細胞分葉核中性粒細胞分葉核淋

10、球菌染成紅色淋球菌染成紅色/G-，腎形或豆形，成雙腎形或豆形，成雙排列排列示教片之二示教片之二取材：純培養物取材：純培養物染色法：革蘭染色染色法：革蘭染色放大倍數：放大倍數：10X100G+粗短桿菌，粗短桿菌，芽胞呈橢圓形，芽胞呈橢圓形，比菌體粗，次極比菌體粗，次極端，細菌呈湯匙端，細菌呈湯匙狀或網球拍狀狀或網球拍狀示教片之三示教片之三取材：小鼠腹腔滲出液取材：小鼠腹腔滲出液染色法：革蘭染色染色法：革蘭染色放大倍數：放大倍數：10X100G+粗大桿菌，粗大桿菌，兩端幾乎平切，兩端幾乎平切，在被感染得人在被感染得人或動物體內形或動物體內形成明顯的莢膜成明顯的莢膜示教片之四示教片之四取材：純培養物

11、取材：純培養物染色法：革蘭染色染色法：革蘭染色放大倍數：放大倍數：10X100G+粗大桿菌，粗大桿菌，有氧條件下形有氧條件下形成橢圓形芽胞，成橢圓形芽胞，位于菌體中央位于菌體中央取材：純培養物取材：純培養物染色法：美藍染色染色法：美藍染色放大倍數：放大倍數：10X100取材：純培養物取材：純培養物染色法：染色法：Neisser染色染色放大倍數：放大倍數：10X100示教片之五示教片之五菌體細長彎曲的桿菌，粗細不一，常一菌體細長彎曲的桿菌，粗細不一，常一端或兩端膨大呈棒狀；排列不規則，呈端或兩端膨大呈棒狀；排列不規則，呈柵欄狀、柵欄狀、V字形或字形或L字形。異染顆粒字形。異染顆粒1、細菌的人工培養講授）、細菌的人工培養講授）2、細菌的培養方法：、細菌的培養方法： 固體培養基接種法自做）；固體培養基接種法自做）； 半固體、液體培養基接種法示教）半固體、液體培養基接種法示教）3、葡萄球菌、鏈球菌培養及生化示教）、葡萄球菌、鏈球菌培養及生化示教）4、細菌的形態觀察、細菌的形態觀察 自閱片：甲型鏈球菌、結核桿菌自閱片：甲型鏈球菌、結核桿菌 示教片：淋球菌、肉毒桿菌、產氣莢膜桿菌、白喉桿菌、炭疽桿菌示教片：淋球菌、肉毒桿菌、產氣莢膜桿菌、白喉桿菌、炭疽桿菌第第2頁：頁： 實驗名稱：細菌平板劃線分離法實驗名稱：細菌平板劃線分離法 （記錄實驗結果繪一簡圖并描