1、第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定第十六第十六章章 細胞細胞(xbo)(xbo)因子與因子與細胞細胞(xbo)(xbo)粘附因粘附因子的測定子的測定第一頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定第一節生物學測定方法第一節生物學測定方法 一、促進細胞一、促進細胞(xbo)(xbo)增殖和抑制細胞增殖和抑制細胞(xbo)(xbo)增殖測定增殖測定法法 二、細胞毒活性測定法二、細胞毒活性測定法 三、抗病毒活性測定法三、抗病毒活性測定法 四、趨化活性測定法四、趨化活性測定法 五、生物學活性測定方法學評價五、生物學活性測定方法學評價第二節第二節 免疫測定方法免疫測定方法 一、一、ELISAE

2、LISA方法方法 二、流式細胞分析法二、流式細胞分析法 三、酶聯免疫斑點試驗三、酶聯免疫斑點試驗(shyn)(shyn) 四、免疫學測定方法學評價四、免疫學測定方法學評價第二頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定第三節第三節 細胞因子與細胞粘附分子測定的臨床應用細胞因子與細胞粘附分子測定的臨床應用 一、臨床應用原則一、臨床應用原則 二、特定疾病診斷的輔助指標二、特定疾病診斷的輔助指標 三、評估機體三、評估機體(jt)(jt)的免疫狀態、判斷治療效果及預后的免疫狀態、判斷治療效果及預后思考題思考題小結小結(xioji)(xioji)第三頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子

3、的測定 是由活化的免疫細胞及某些基質細胞表達并分泌的是由活化的免疫細胞及某些基質細胞表達并分泌的活性物質，其主要活性物質，其主要(zhyo)(zhyo)生物學功能是介導和調節免疫生物學功能是介導和調節免疫應答及炎癥反應，其化學本質是蛋白質或多肽。應答及炎癥反應，其化學本質是蛋白質或多肽。 細胞因子細胞因子細胞細胞(xbo)(xbo)粘附因子粘附因子 是介導細胞間及細胞與細胞外基質間粘附作用的分子，是介導細胞間及細胞與細胞外基質間粘附作用的分子，其化學其化學(huxu)(huxu)本質為糖蛋白，可以細胞膜表面表達和可溶性本質為糖蛋白，可以細胞膜表面表達和可溶性兩種形式存在。兩種形式存在。 第四頁

4、，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定第一節第一節 生物學測定方法生物學測定方法第五頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定 1.1.基于基于DNADNA檢測檢測(jin c)(jin c)的分子生物學測定法：的分子生物學測定法： DNADNA擴增法擴增法 RNARNA印跡法印跡法 原位雜交法原位雜交法 核酸酶保護分析核酸酶保護分析 2.2.生物活性測定法生物活性測定法 生物學測定法分類生物學測定法分類(fn li)(fn li)第六頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定根據細胞因子特定的生物學活性根據細胞因子特定的生物學活性, ,應用應用(yngyng)

5、(yngyng)相應的相應的指示系統指示系統, ,同時與標準品對比測定同時與標準品對比測定, ,從而得知樣品中細從而得知樣品中細胞因子的活性水平胞因子的活性水平, ,一般以活性單位一般以活性單位(U/ml)(U/ml)表示表示生物生物(shngw)(shngw)活性測定法原理活性測定法原理有 助 于 細 胞 因 子 檢 測的 活 性 作 用 包 括有助于細胞因子檢有助于細胞因子檢測測(jin c)(jin c)的活性的活性作用作用刺激細胞增殖或集落形成的活性維持刺激細胞增殖或集落形成的活性維持細胞生長和存活的特性細胞生長和存活的特性抑制細胞生長或破壞細胞的效應促進抑制細胞生長或破壞細胞的效應促

6、進細胞趨化或抗病毒作用細胞趨化或抗病毒作用第七頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定以細胞因子依賴性細胞株為靶向，通過觀察以細胞因子依賴性細胞株為靶向，通過觀察特定的細胞因子刺激或抑制依賴性細胞株增特定的細胞因子刺激或抑制依賴性細胞株增殖來評估殖來評估(pn(pn )細胞因子的活性水平。細胞因子的活性水平。 一、促進一、促進(cjn)(cjn)細胞增殖和增殖抑制測定法細胞增殖和增殖抑制測定法第八頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定直接計數法直接計數法 簡便、直觀簡便、直觀, ,但費時、主觀因素影響大、難以標但費時、主觀因素影響大、難以標準化和自動化準化和自動化 細

7、胞代謝活性測定方法細胞代謝活性測定方法 3 3H-TdRH-TdR、125125I-UdRI-UdR摻入法或摻入法或MTTMTT等比色法等比色法細胞代謝產物測定法細胞代謝產物測定法 代謝產物熒光代謝產物熒光(ynggung)(ynggung)強度測定法和指示細胞表強度測定法和指示細胞表面標記或可溶性分子測定法面標記或可溶性分子測定法細胞增殖檢測細胞增殖檢測(jin c)(jin c)方法分類方法分類第九頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定 通過檢測細胞通過檢測細胞DNADNA合成合成(hchng)(hchng)的增加或減少來判斷細胞增殖的方法。在細胞的的增加或減少來判斷細胞增殖

8、的方法。在細胞的增殖過程中，增殖過程中，DNADNA合成合成(hchng)(hchng)的增加使得指示細胞對核苷或堿基的需求增多，若將核的增加使得指示細胞對核苷或堿基的需求增多，若將核苷標記上可以示蹤的同位素（苷標記上可以示蹤的同位素（3 3H/H/125125I I ），通過檢測細胞內的同位素含量，則可），通過檢測細胞內的同位素含量，則可反映細胞增殖的程度。反映細胞增殖的程度。結果客觀易于自動化；適結果客觀易于自動化；適用用(shyng)(shyng)于大標本量的測于大標本量的測定定 方法的特異性受依賴細胞株方法的特異性受依賴細胞株影響；放射性污染影響；放射性污染(1) (1) 放射性核素摻

9、入法放射性核素摻入法第十頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定常見常見(chn(chn jin) jin)細胞因子細胞因子3 3H-TdRH-TdR摻入檢測法所需細胞及參考試驗條摻入檢測法所需細胞及參考試驗條件件細細 胞胞 株株所需濃度所需濃度（細胞數（細胞數/ml/ml）3 3H-TdRH-TdR前培養時間前培養時間3 3H-TdRH-TdR后培養時間后培養時間檢測細胞因子檢測細胞因子D10G4.1D10G4.12 210105 5484818-2018-20IL-1IL-1L929L9292 210105 556561616IL-1IL-1CTLL-2CTLL-210105

10、524244-64-6IL-2IL-2FDC-P1,32DCL-27FDC-P1,32DCL-275 510104 424244-84-8IL-3IL-3CT.4SCT.4S10105 524244-64-6IL-4IL-4CH12CH125 510103 348486 6IL-5IL-5B13B135 510104 436361212IL-5IL-5T88-MT88-M1 110105 524241212IL-5IL-5BCL1BCL110105 572726 6IL-5IL-5Clone-K,IClone-K,IN/2bxN/2bx10105 524244-64-6IL-7IL-7TS1T

11、S13 310104 466666 6IL-9IL-9T10T1010105 572726 6IL-11IL-11UT-7UT-71.51.510105 572726 6SCFSCF（干細胞因子）（干細胞因子）CCL-64CCL-64* *5 510108 872728 8TGF-TGF-DA3.15, IFDA3.15, IF5 510104 424244-84-8GM-CSFGM-CSFM14/NES60.4M14/NES60.45 510104 424244-84-8M-CSF/G-CSFM-CSF/G-CSF第十一頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定特點：不使用放射性核

12、素，特點：不使用放射性核素， 以細胞以細胞(xbo)(xbo)代謝變化為增殖指征代謝變化為增殖指征 指示細胞的增殖情況與線粒體代謝活性相關指示細胞的增殖情況與線粒體代謝活性相關 測定測定(cdng)(cdng)步驟步驟類似類似與同位素摻入法相比與同位素摻入法相比(xin b)摻入物：摻入物：MTTMTT而非而非3 3H-TdRH-TdR；反應條件：選用的細胞及其濃度、反應條件：選用的細胞及其濃度、 培養培養時間不同時間不同(2) MTT (2) MTT 比色法比色法第十二頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定細胞株細胞株/ /原代細胞原代細胞細胞終濃度（細胞數細胞終濃度（細胞數/

13、ml/ml）加入加入MTTMTT前溫育時間（前溫育時間（h h）檢測細胞因子檢測細胞因子B9B9，MH60,BSF2,TTD1MH60,BSF2,TTD15 510104 4/2/210105 596/4896/48IL-6IL-6B9-11B9-115 510104 49696IL-11IL-11B9-1-3B9-1-35 510104 49696IL-13IL-13KYM-1D4KYM-1D42 210103 37272MV-3D9MV-3D95 510103 3120120TGF-TGF-WEHI-164/clone13WEHI-164/clone132 210103 37272TNFT

14、NF32D/Mp110S32D/Mp110S1 110103 34444L929L9292 210105 55656TNFTNFCTLL-2CTLL-210105 522-2422-24IL-2IL-2小鼠基質細胞小鼠基質細胞, 32DCL-27, 32DCL-271.51.510105 57272IL-3IL-3細胞增殖或抑制細胞增殖或抑制(yzh)(yzh)活性檢測的活性檢測的MTTMTT比色法常用靶細胞比色法常用靶細胞第十三頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定 對指示細胞具有破壞作用的細胞因子，若與細胞共育將會導致細胞死亡。因此，待對指示細胞具有破壞作用的細胞因子，若與細

15、胞共育將會導致細胞死亡。因此，待測細胞因子作一系列稀釋后加至指示細胞培養體系，以檢測測細胞因子作一系列稀釋后加至指示細胞培養體系，以檢測(jin c)(jin c)培養細胞的死細培養細胞的死細胞數作為判斷指標，死細胞數量與細胞因子的活性呈正比。試驗時，與細胞增殖或抑制胞數作為判斷指標，死細胞數量與細胞因子的活性呈正比。試驗時，與細胞增殖或抑制方法一樣，以已知活性的細胞因子標準品為對照。死、活細胞情況可用同位素方法一樣，以已知活性的細胞因子標準品為對照。死、活細胞情況可用同位素5151CrCr釋放法釋放法判斷，或應用臺盼蘭染色死細胞后直接計數。也可通過結晶紫、萘酚藍黑、判斷，或應用臺盼蘭染色死細

16、胞后直接計數。也可通過結晶紫、萘酚藍黑、MTTMTT、NBBNBB等著染活細胞，再用等著染活細胞，再用脫色液脫出染料后酶標儀比色測定吸光值。死細胞數、脫色液脫出染料后酶標儀比色測定吸光值。死細胞數、5151CrCr釋放量越高或比色測定的吸光值越低，表明釋放量越高或比色測定的吸光值越低，表明待測細胞因子的細胞毒活性則越高。應用系列稀釋的細胞因子標準品，制作其活性與劑量關系的標待測細胞因子的細胞毒活性則越高。應用系列稀釋的細胞因子標準品，制作其活性與劑量關系的標準曲線，以此作為待測品活性的定量測定的基礎。準曲線，以此作為待測品活性的定量測定的基礎。本法常用本法常用(chn(chn yn yn) )

17、于于TNFTNF等的等的測定測定二、細胞毒活性測定法二、細胞毒活性測定法基本原理基本原理第十四頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定Wish、Hep2/c 人干擾素人干擾素L929 小鼠干擾素小鼠干擾素Ratec 大鼠干擾素大鼠干擾素A549MDBK 多種族多種族(zhngz)的的IFN-和和IFN-本法本法(bn f)(bn f)常用于常用于IFNIFN等的測定，等的測定，IFNIFN可誘導細胞產生抑制病毒可誘導細胞產生抑制病毒RNARNA和和DNADNA合成的酶，保護細胞不受病毒感染，產生細胞病變效應（合成的酶，保護細胞不受病毒感染，產生細胞病變效應（CPECPE）。）。 V

18、SV、EMCV及及Sindbis virus等等細胞病變效應細胞病變效應(CPE)、抑制病毒抑制病毒(bngd)蝕斑形成或抑制病毒蝕斑形成或抑制病毒(bngd)的產量的產量三、抗病毒活性測定法三、抗病毒活性測定法常用于檢測抗病毒活性的細胞株常用于檢測抗病毒活性的細胞株常用于攻擊細胞的病毒常用于攻擊細胞的病毒檢測抗病毒活性的方法檢測抗病毒活性的方法第十五頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定 TNF- TNF-和和TNF-TNF-與同一受體結合，故兩者生物學活性相似與同一受體結合，故兩者生物學活性相似 用用TNF-TNF-與與TNF-TNF-特異性中和抗體作阻斷試驗，以區別兩類特異

19、性中和抗體作阻斷試驗，以區別兩類TNFTNFTNFTNF活性測定靶細胞：小鼠成纖維細胞株活性測定靶細胞：小鼠成纖維細胞株L929L929、L-ML-M、WEHI164.13WEHI164.13注意：注意： 若選用若選用L929L929細胞，其不宜細胞，其不宜(by)(by)生長過密。生長過密。 細胞被某種因素激活后，代謝增強，線粒體脫氫酶活性也增強，細胞被某種因素激活后，代謝增強，線粒體脫氫酶活性也增強， 著色也會加深。著色也會加深。 MTTMTT染色時，必須考慮待檢樣品中有無激活靶細胞的因素。染色時，必須考慮待檢樣品中有無激活靶細胞的因素。細胞毒活性測定法常用細胞毒活性測定法常用(chn(c

20、hn yn yn) )于于TNFTNF等的測定等的測定第十六頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定細胞病變程度分為細胞病變程度分為5 5個等級，個等級，即：即： “ “0”0”，表示無明顯，表示無明顯CPECPE； “ “1+”1+”，CPE25CPE25； “ “2+”2+”，CPECPE為為25255050； “ “3+”3+”，CPECPE為為50507575； “ “4+”4+”，CPECPE為為7575100100。根據病。根據病變程度找出變程度找出CPEI50CPEI50的標本稀釋范圍，并的標本稀釋范圍，并以此計算出距離比例和確定以此計算出距離比例和確定IFNIFN效

21、價。效價。 該法操作復雜、影響因素較多，該法操作復雜、影響因素較多，在試驗前應對所用在試驗前應對所用(su yn(su yn) )的的病毒進行滴定。病毒進行滴定。 標本稀釋度log4兩孔平均CPE細胞病變抑制程度細胞病變抑制積累細胞病變積累細胞病變抑制率30416016/16(100%)40412012/12(100%)504808/8(100%)61.52.541.54/5.5(73%)72.51.51.541.5/5.5(27%)800080/8(0%)細胞細胞(xbo)(xbo)病變抑制法結果判斷舉例病變抑制法結果判斷舉例* * *結果結果(ji gu)(ji gu)：CPEI50CPE

22、I50稀釋度介于稀釋度介于4-6-4-74-6-4-7之間，距離比例為之間，距離比例為(73-50)/(73-27) (73-50)/(73-27) =0.50=0.50，效價為，效價為46.546.5；同法計算；同法計算IFNIFN標準品的標準品的CPEI50CPEI50稀釋度，將稀釋度，將IFNIFN效價換算成國際單位，效價換算成國際單位，IFNIFN國際單位國際單位= =樣品樣品CPEL50CPEL50的稀釋度的稀釋度/ /標準品標準品CPEI50CPEI50稀釋度稀釋度標準品的單位。標準品的單位。 第十七頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定趨化性趨化性(chemotax

23、is)(chemotaxis)： 誘導細胞向由誘導細胞向由趨化因子低濃度出向趨化因子低濃度出向趨化因子高濃度處作定向移動的特性趨化因子高濃度處作定向移動的特性, ,可采用瓊脂糖和微孔小室趨化試驗。可采用瓊脂糖和微孔小室趨化試驗。化學增活性化學增活性(chemokinesis)(chemokinesis)： 細胞因子增強細胞的隨機運動細胞因子增強細胞的隨機運動(yndng)(yndng)能力的特性能力的特性, ,可采用瓊脂糖小可采用瓊脂糖小滴化學動力學試驗檢測。滴化學動力學試驗檢測。趨化因子誘導趨化因子誘導(yudo)(yudo)細胞移動的方式細胞移動的方式四、趨化活性測定法四、趨化活性測定法第

24、十八頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定敏感性較高敏感性較高特異性不高特異性不高操作操作(cozu)(cozu)繁瑣繁瑣易受干擾易受干擾五、生物學活性測定方法學評價五、生物學活性測定方法學評價(pngji)(pngji)第十九頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定第二節第二節 免疫學測定法免疫學測定法 細胞因子細胞因子( (或受體或受體) )與相應的特異性抗體與相應的特異性抗體( ( 單單克隆抗體或多克隆抗體克隆抗體或多克隆抗體) )結合，通過同位素、熒結合，通過同位素、熒光或酶等標記技術加以光或酶等標記技術加以(jiy)(jiy)放大和顯示，放大和顯示， 從而從

25、而定性或定量顯示細胞因子定性或定量顯示細胞因子( (或受體或受體) )的水平。的水平。第二十頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定根據抗體性質和特異性不同，夾心根據抗體性質和特異性不同，夾心(jixn)(jixn)法法ELISAELISA可分為：可分為：1. PcAb1. PcAb與與McAbMcAb夾心法夾心法2. McAb2. McAb與與PcAbPcAb夾心法夾心法 3. 3. 雙雙McAbMcAb夾心法夾心法4. 4. 細胞、細胞、McAbMcAb夾心法夾心法一、一、ELISAELISA方法方法(fngf)(fngf)ELISAELISA法是應用最為廣泛的非均相酶標免疫分

26、析技術，一步或多步的抗原法是應用最為廣泛的非均相酶標免疫分析技術，一步或多步的抗原抗體反應和一步酶促反應構成抗體反應和一步酶促反應構成ELISAELISA的基本步驟，可作定性或定量分析的基本步驟，可作定性或定量分析(dnglingfnx)(dnglingfnx)。ELISAELISA法不僅可以用于細胞因子檢測，也可用于可溶性法不僅可以用于細胞因子檢測，也可用于可溶性細胞因子受體或可溶性粘附因子的測定細胞因子受體或可溶性粘附因子的測定 第二十一頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定敏感性偏低敏感性偏低不能判斷不能判斷(pndun)(pndun)細胞因子的生物學活性。細胞因子的生物學

27、活性。ELISAELISA特異、簡便特異、簡便易于推廣和標準化等優點易于推廣和標準化等優點可同時檢測大量標本可同時檢測大量標本(biobn)(biobn)且試驗廢棄物便于處理且試驗廢棄物便于處理細胞因子測定的首選方法細胞因子測定的首選方法第二十二頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定二、流式細胞分析法二、流式細胞分析法 流式細胞分析法，是基于熒光抗體流式細胞分析法，是基于熒光抗體(kngt)(kngt)染色技術并借助流式細胞儀敏感的分辨力所建染色技術并借助流式細胞儀敏感的分辨力所建立的方法。該法主要用于細胞內細胞因子和細胞表面粘附分子的檢測，通過特異性的熒光抗體立的方法。該法主要

28、用于細胞內細胞因子和細胞表面粘附分子的檢測，通過特異性的熒光抗體(kngt)(kngt)染色，能簡單、快速地進行單個細胞水平的細胞因子或粘附因子的檢測，精確判斷不染色，能簡單、快速地進行單個細胞水平的細胞因子或粘附因子的檢測，精確判斷不同細胞亞群細胞因子和膜分子的表達情況。同細胞亞群細胞因子和膜分子的表達情況。 1 1分離和培養待檢細胞分離和培養待檢細胞 2 2細胞固定細胞固定(gdng)(gdng) 3 3封閉非特異性結合位點封閉非特異性結合位點 4 4染色與分析染色與分析 基本基本(jbn)步驟步驟第二十三頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定使用使用(shyng)(shyn

29、g)流式細胞分析法，可以：流式細胞分析法，可以：區分不同分泌特性的細胞亞群：區分不同分泌特性的細胞亞群： Th1Th1細胞細胞 IFN-IFN- Th2 Th2細胞細胞 IL-4IL-4細胞表面的粘附分子或細胞因子受體：細胞表面的粘附分子或細胞因子受體： 單克隆抗體技術單克隆抗體技術 直接或間接熒光抗體染色直接或間接熒光抗體染色 無需作細胞固定和非特異性結合位點的封閉無需作細胞固定和非特異性結合位點的封閉 待測細胞是新鮮分離或培養待測細胞是新鮮分離或培養(piyng)(piyng)的活細胞，保持良好的活細胞，保持良好狀態狀態第二十四頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定三、酶聯免

30、疫斑點試驗三、酶聯免疫斑點試驗(shyn)(shyn)(ELISPOT(ELISPOT或或ElisaSpot) ElisaSpot) 在包被有待測細胞因子抗體的微孔板上，加入可分泌相應在包被有待測細胞因子抗體的微孔板上，加入可分泌相應細胞因子的待測細胞，經在有或無刺激物存在的條件細胞因子的待測細胞，經在有或無刺激物存在的條件(tiojin)(tiojin)下培養，待測細胞分泌細胞因子于其周圍，并被板上的特異性下培養，待測細胞分泌細胞因子于其周圍，并被板上的特異性抗體捕獲。后續的反應如同抗體捕獲。后續的反應如同ELISAELISA，即在洗去細胞后視用于試驗，即在洗去細胞后視用于試驗的酶標抗體為一

31、抗或二抗，分別作直接或間接法。的酶標抗體為一抗或二抗，分別作直接或間接法。 一個一個(y (y )斑點代表一個斑點代表一個(y (y )細胞因子分泌細胞，細胞因子分泌細胞，斑點的顏色深淺程度與細胞分泌的細胞因子量相關斑點的顏色深淺程度與細胞分泌的細胞因子量相關 基基本本原原理理第二十五頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定四、免疫學測定方法學評價四、免疫學測定方法學評價(pngji)(pngji)優點：優點： 特異性高特異性高 操作簡便、快速，無需依賴細胞株操作簡便、快速，無需依賴細胞株 影響因素較少且易控制，重復性好，方法容易標準化。影響因素較少且易控制，重復性好，方法容易標準

32、化。缺點：缺點： 所測定的只是細胞因子的蛋白含量，與其生物活性不一定呈正所測定的只是細胞因子的蛋白含量，與其生物活性不一定呈正比比 結果與所用的抗體來源及親和力有很大的關系結果與所用的抗體來源及親和力有很大的關系(gun x)(gun x) 敏感性相對較低敏感性相對較低 標本中細胞因子的可溶性受體，會影響特異性抗體對細胞因子標本中細胞因子的可溶性受體，會影響特異性抗體對細胞因子的結合的結合第二十六頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定第三第三(d sn)(d sn)節節 細胞因子與細胞粘附分子測定的臨床應用細胞因子與細胞粘附分子測定的臨床應用細胞因子的測定主要應用于：細胞因子的測

33、定主要應用于：特定疾病的輔助診斷特定疾病的輔助診斷機體免疫狀態的評估機體免疫狀態的評估(pn(pn )臨床疾病治療效果的監測和指導用藥臨床疾病治療效果的監測和指導用藥疾病預防疾病預防第二十七頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定一、臨床一、臨床(ln chun(ln chun) )應用原則應用原則 細胞因子和粘附分子的細胞因子和粘附分子的異質性異質性、功能交叉性功能交叉性和和多樣性、多樣性、來源的復雜性來源的復雜性和和組織細胞的非特異性組織細胞的非特異性，決定了在進行這些，決定了在進行這些分子檢測分子檢測(jin c)(jin c)時，必須對方法選擇和結果判斷作出綜時，必須對方法

34、選擇和結果判斷作出綜合考慮。合考慮。 第二十八頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定細胞因子的檢測方法多種多樣，各有利弊。細胞因子的檢測方法多種多樣，各有利弊。 高敏感性方法：特異性的降低、廢棄物難處理高敏感性方法：特異性的降低、廢棄物難處理 活性測定方法：定性試驗活性測定方法：定性試驗 基因分析法：利于細胞基因分析法：利于細胞(xbo)(xbo)內定位分析、操作煩瑣內定位分析、操作煩瑣（一）方法（一）方法(fngf)(fngf)的聯合應用的聯合應用第二十九頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定常用臨床標本：抗凝全血，并分離獲得單個核細胞常用臨床標本：抗凝全血，并分

35、離獲得單個核細胞炎癥局部細胞因子的水平：局部分泌液炎癥局部細胞因子的水平：局部分泌液細胞因子或粘附分子的細胞內定位檢測細胞因子或粘附分子的細胞內定位檢測(jin c)(jin c)：相應細胞：相應細胞相應細胞因子的基因和相應細胞因子的基因和mRNAmRNA表達：相應細胞表達：相應細胞療效觀察和預后判斷：疾病急性期和恢復期雙份標本進行動態觀測療效觀察和預后判斷：疾病急性期和恢復期雙份標本進行動態觀測免疫熒光染色和流式細胞分析：注意待檢細胞的活性和狀態，以保免疫熒光染色和流式細胞分析：注意待檢細胞的活性和狀態，以保 證結果的特證結果的特異性異性（二）標本的適當（二）標本的適當(shdng)(shd

36、ng)選取選取第三十頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定意義：意義： 細胞因子具有網絡調節的狀調節的特點細胞因子具有網絡調節的狀調節的特點 級聯效應或相互抑制作用的網絡系統。級聯效應或相互抑制作用的網絡系統。 有助于提供有效的疾病診斷和機體免有助于提供有效的疾病診斷和機體免 疫狀態信息疫狀態信息舉例舉例(j l)(j l)： T T細胞、巨噬細胞和上皮樣細胞分泌相應細胞因子的細胞、巨噬細胞和上皮樣細胞分泌相應細胞因子的 功能：功能：IL-1IL-1、 IL-2IL-2、IFN-IFN-和和GM-CSFGM-CSF Th1/Th2 Th1/Th2細胞平衡狀態：細胞平衡狀態：IL-

37、2IL-2、IL-4IL-4、IL-10IL-10和和IFN-IFN-（三）細胞因子的聯合（三）細胞因子的聯合(linh)(linh)檢測檢測第三十一頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定二、特定二、特定(tdng)(tdng)疾病診斷的輔助指標疾病診斷的輔助指標 許多疾病過程均可出現粘附分子和細胞因子表達許多疾病過程均可出現粘附分子和細胞因子表達的異常改變，高表達、低表達或是缺陷均可與某的異常改變，高表達、低表達或是缺陷均可與某些特定疾病密切關聯，同時些特定疾病密切關聯，同時(tngsh)(tngsh)還可反映疾病還可反映疾病的進程的進程 （一）細胞因子檢測在特定（一）細胞因子

38、檢測在特定(tdng)(tdng)疾病診斷中的意義疾病診斷中的意義第三十二頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定（二）粘附分子檢測（二）粘附分子檢測(jin c)(jin c)在特定疾病診斷中的意義在特定疾病診斷中的意義粘附分子有可溶性和膜結合性兩種形式，均與機體的粘附分子有可溶性和膜結合性兩種形式，均與機體的免疫狀態和疾病的發生有關，在炎癥、腫瘤免疫狀態和疾病的發生有關，在炎癥、腫瘤(zhngli)(zhngli)轉轉移和器官移植排斥反應中發揮著重要的作用。相關粘移和器官移植排斥反應中發揮著重要的作用。相關粘附分子的檢測有助于此類疾病的診斷。附分子的檢測有助于此類疾病的診斷。

39、第三十三頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定三、評估機體的免疫狀態三、評估機體的免疫狀態(zhungti)(zhungti)、判斷治療效果及預后、判斷治療效果及預后 機體免疫應答的強弱可通過細胞因子或粘附分子的表達水平來反映，其過機體免疫應答的強弱可通過細胞因子或粘附分子的表達水平來反映，其過高或過低表達均系免疫調節異常的結果高或過低表達均系免疫調節異常的結果細胞因子和粘附分子的水平，作為觀察治療效果和判斷預后的重要細胞因子和粘附分子的水平，作為觀察治療效果和判斷預后的重要指標指標接受接受(jishu)治療的患者進行細胞因子水平的監測，對保證治療效果具有指治療的患者進行細胞因子水平的監測，對保證治療效果具有指導意義導意義。 第三十四頁，共三十八頁。第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定1 1細胞因子和細胞粘附分子的特性是什么？可分為幾類？細胞因子和細胞粘附分子的特性是什么？可分為幾類？2 2基于促進基于促進(cjn)(cjn)細胞增殖生物學活性，檢測細胞增殖