1、第六章 抗體制備技術抗體的一些基本概念 多克隆抗體（Polyclonal Antibody）： 即多個B淋巴細胞克隆所分泌的抗體 單克隆抗體（Monoclonal Antibody）： 即由單個B淋巴細胞克隆所分泌的抗體 Epitopes on the surface of pathogensViral surface protein epitopesWhole Virus particlesurface of proteins多克隆抗體的特點 制備方便，操作簡單，可大量產生 容易發生沉淀反應，出現沉淀線 異質性：抗體種類多樣，化學組成復雜，含有較多的無關Ig存在針對多種抗原或一種抗原不同表位

2、的一系列親和力不同的抗體 重復性差，批間差異很大 免疫原需要純化 易出現交叉反應單克隆抗體的特點 高度均質（同一亞類），化學組成均一，不含 或很少含無關Ig 特異性強，只針對一種抗原表位 親和力強 抗原用量少，無需純化 無批間差異 來源穩定，可大批生產，容易標準化 不易形成沉淀線 操作比較麻煩 多克隆抗體與單克隆抗體區別什么情況需要制備單抗目的蛋白有結構類似物抗原不純，無法分開多抗效果不好（已排除非特異性反應）希望將抗體用于治療，研制成藥品希望將抗體用于診斷，研制成診斷試劑 單克隆和多克隆抗體的比較和用途特異性敏感性均一性McAbPcAb低差無高強有1. 用于免疫學檢測，輔助臨床診斷2. Mc

3、Ab用于親和層析，分離微量可溶性抗原3. 標記的McAb用于基礎研究，了解細胞分化等4. 制備生物導彈用于腫瘤、移植等的臨床治療抗體名稱 抗體種類 靶向抗原 適應癥 批準日期OKT3 鼠單抗 CD3 移植排斥 1986Panorex 鼠單抗 17-1A 大腸癌 1995ReoPro 人-鼠嵌合Fab 血小板受體 冠心病 1994 ba Rituxan 人-鼠嵌合抗體 CD20 淋巴瘤 1997Simulect 人-鼠嵌合抗體 CD25 移植排斥 1998Remicade 人-鼠嵌合抗體 TNF- 炎癥性腸病、 1998 類風濕關節炎 1999Zanapax 人源化抗體 CD25 移植排斥 19

4、97Herceptin 人源化抗體 HER-2 乳腺癌 1998Synagis 人源化抗體 RSV F蛋白 RSV感染 1998Mylotarg 人源化抗體 - CD33 淋巴瘤 2000 化療藥物交聯物Campath 人源化抗體 CD52 淋巴瘤 2001已批準上市的治療性單抗購買抗體時要注意廠商的標注 適合于做什么實驗，使用濃度多少？ WB（Western blotting，免疫印跡） IH（Immunohistochemistry, 免疫組織化學） IC（Immunocytochemistry, 免疫細胞化學） IEM（Immune lectron microscopy，免疫電鏡） FC

5、M（Flow Cytometry，流式細胞儀） ELISA（enzyme linked immunosorbent assey, 聯免疫吸附實驗，聯免疫分析）第一節 多克隆抗體制備技術第二節 單克隆抗體制備技術第三節 基因工程抗體制備技術 第四節 抗體庫技術 第六章抗體制備技術 第一節 多克隆抗體制備技術第二節 單克隆抗體制備技術第三節 基因工程抗體制備技術 第四節 抗體庫技術 第六章抗體制備技術 第一節 多克隆抗體制備技術 一、多克隆抗體制備的原理二、多克隆抗體制備的基本條件三、多克隆抗體制備的基本方法第一節 多克隆抗體制備技術 一、多克隆抗體制備的原理二、多克隆抗體制備的基本條件三、多克隆

6、抗體制備的基本方法一、 多克隆抗體制備的原理 多克隆抗體制備的基本流程抗原制備動物免疫抗體純化第一節 多克隆抗體制備技術 一、多克隆抗體制備的原理二、多克隆抗體制備的基本條件三、多克隆抗體制備的基本方法二、 多克隆抗體制備的基本條件 1. 免疫原的制備2. 免疫動物的選擇3. 佐劑的準備 二、 多克隆抗體制備的基本條件 1. 免疫原的制備2. 免疫動物的選擇3. 佐劑的準備 1. 免疫原的制備 （1）完全抗原的提取（2）半抗原與載體的交聯（3）合成肽抗原（1）完全抗原的提取細胞破碎法抗原的提取抗原的純化冷熱交替法反復凍融法超聲破碎法玻璃勻漿法自溶法酶處理法水溶液提取法有機溶劑提取法超濾鹽析電泳

7、凝膠過濾離子交換親和層析組織破碎冷熱交替反復凍融超聲破碎玻璃勻漿細胞自溶蛋白酶解溫度驟變迅速解凍超聲剪切物理研磨自身裂解蛋白酶切載體的選擇半抗原與載體的偶聯方法偶聯復合物的鑒定天然蛋白質合成類載體吸收光譜法放射性標記法（2）半抗原與載體的交聯 化學偶聯法半抗原的制備抗原合成 多肽、甾體激素、核酸、化學藥物等載體選擇 天然載體：人、牛血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白、鑰孔磩血藍素等 合成載體：多聚賴氨酸、二軟脂酰賴氨酸、多聚谷氨酸等載體偶聯 羧基、脂族氨基、芳香族胺、連位羧基、甾族、苯酚類 載體的氨基、羧基、酪氨酸抗原鑒定 吸收光譜、同位素標記半抗原與載體偶聯策略免疫原性肽的選擇肽的合成與純化計算機模

8、擬試驗凝膠過濾法反向高效液相色譜（3）合成肽抗原 細胞、細菌和病毒等，一般具有較強的免疫原性，可不加佐劑。例如，直接腹腔注射12107個細胞。顆粒性抗原： 可溶性抗原的來源主要是天然純化，或者用目的基因在原核或真核細胞內表達。可溶性抗原需與弗氏完全或不完全佐劑混勻，進行免疫。可溶性抗原：免疫原制備二、 多克隆抗體制備的基本條件 1. 免疫原的制備2. 免疫動物的選擇3. 佐劑的準備 2. 2. 免疫動物的選擇 兔子（rabbit）：最常用于自制抗體， 抗體量較多（新西蘭、大耳白） 小鼠（mouse）：可用于自制抗體，但 抗體量很少（BALB/C、昆明鼠） 大鼠（rat）：可用于自制抗體，免疫過

9、 程要麻醉動物（Wistar大鼠） 羊（sheep、goat）：常用于較大批量地 生產抗體（商品） 馬（horse）：常用于大批量生產治療用 抗體（商品）。 豚鼠（guinea pig）：國外實驗室常用二、 多克隆抗體制備的基本條件 1. 免疫原的制備2. 免疫動物的選擇3. 佐劑的準備 佐劑的生物學功能 緩釋 促吞噬 激活免疫應答 增強輔助性T細胞 促進淋巴細胞分化和抗體分泌 提高初次和再次免疫應答的抗體滴度 改變抗體類型、促進遲發性超敏反應佐劑的種類 無機佐劑： 氫氧化鋁、明礬等 有機佐劑： 分枝桿菌、百日咳桿菌、內毒素等 合成佐劑： 雙鏈多聚核苷酸、左旋咪唑、異丙肌苷 油劑： 弗氏佐劑、

10、花生油、礦物油、植物油等第一節 多克隆抗體制備技術 一、多克隆抗體制備的原理二、多克隆抗體制備的基本條件三、多克隆抗體制備的基本方法三、 多克隆抗體制備 的基本方法 1. 抗原劑量、免疫途徑與免疫日程2. 小樣試血與采血3. 抗體的分離和純化技術4. 抗體的鑒定5. 抗體的保存 三、 多克隆抗體制備 的基本方法 1. 抗原劑量、免疫途徑與免疫日程2. 小樣試血與采血3. 抗體的分離和純化技術4. 抗體的鑒定5. 抗體的保存 抗原的劑量蛋白質抗原耐受劑量小鼠：為20400g/0.2ml/次大鼠：1001 000g/0.5ml/次 兔：2002 000g/2ml/次 羊：520mg/5ml/次免疫

11、動物的方法 免疫原制備 無佐劑免疫法適用于顆粒性抗原 福氏佐劑免疫法適用于可溶性抗原 鋁佐劑免疫法適用于人免疫 免疫動物 皮內免疫法 皮下或肌肉免疫法 淋巴結免疫法 混合法 抗體效價滿意后靜脈注射加強免疫抗原免疫的基本策略 加強免疫的劑量：約首次劑量的1/2 加強免疫的時間：間隔28周 加強免疫次數： 2-5次 高特異性的抗血清：低劑量短間隔免疫法 高效價的抗血清： 高劑量長程免疫法常見注射方法肌肉注射法尾靜脈注射三、 多克隆抗體制備 的基本方法 1. 抗原劑量、免疫途徑與免疫日程2. 小樣試血與采血3. 抗體的分離和純化技術4. 抗體的鑒定5. 抗體的保存 抗血清的獲得 眼眶取血 頸動脈放血

12、 心臟采血免疫效果評價 取血：兔耳靜脈、鼠尾靜脈 檢測：雙向免疫擴散（1:32以上） ELISA（1：5000以上）三、 多克隆抗體制備 的基本方法 1. 抗原劑量、免疫途徑與免疫日程2. 小樣試血與采血3. 抗體的分離和純化技術4. 抗體的鑒定5. 抗體的保存 抗體的分離和純化技術 鹽析法 凝膠過濾法 離子交換層析法 親和層析法 電泳分離法三、 多克隆抗體制備 的基本方法 1. 抗原劑量、免疫途徑與免疫日程2. 小樣試血與采血3. 抗體的分離和純化技術4. 抗體的鑒定5. 抗體的保存 4. 抗體的鑒定 蛋白濃度測定： 紫外分光比色法，雙縮脲法、 福林-酚法、 二辛可寧酸（BCA）法， 考馬氏

13、藍法，Lowry法等 免疫效果評價： 雙向免疫擴散、ELISA 純度分析：免疫印跡 抗體類別分析：免疫金試條 親和力分析：ELISA、Biacore、熒光偏振三、 多克隆抗體制備 的基本方法 1. 抗原劑量、免疫途徑與免疫日程2. 小樣試血與采血3. 抗體的分離和純化技術4. 抗體的鑒定5. 抗體的保存 5. 抗體的保存 抗體的濃縮： 吸收、蒸發、超濾 抗體的保存： 濃縮抗體+防腐劑+甘油免疫效果不佳可能的原因 純度不夠 免疫原性低抗原 乳化不完全 免疫劑量不合適免疫途徑 動物疾病 種屬差異小動物第一節 多克隆抗體制備技術第二節 單克隆抗體制備技術第三節 基因工程抗體制備技術 第四節 抗體庫技

14、術 第六章抗體制備技術 第二節 單克隆抗體制備技術 一、單克隆抗體制備的原理二、單克隆抗體制備的基本條件三、單克隆抗體制備的基本方法第二節 單克隆抗體制備技術 一、單克隆抗體制備的原理二、單克隆抗體制備的基本條件三、單克隆抗體制備的基本方法單克隆抗體制備技術細胞工程抗體技術、 B細胞雜交瘤技術 問題的由來： B細胞 抗體 單克隆B細胞 單克隆抗體 如何獲得抗原特異性的B細胞克隆？ 如何使B細胞長期存活，永遠產生抗體？ 而： 腫瘤細胞 永生性 細胞功能的嵌合B CELLCANCER CELL？抗體分泌永生性 可能性：Barski等（1960）發現細胞的自然融合現象，但頻率很低。岡田等（1967）

15、和Kao等（1974）分別發現滅活的仙臺病毒（HVJ）和聚乙二醇（PEG）能顯著提高細胞融合率。Continuous cultures of fused cells secreting antibodies of predefined specificity. Nature 1975,256:495綿羊紅細胞小鼠脾細胞導致生命科學領域的一場革命 ！ 骨髓瘤細胞仙臺病毒Georges J.F. KhlerCsar MilsteinHybridomas: The making of a revolution. Science 1982 Vol 205 pp1073-1075Niels K. Jer

16、neGeorges J.F. Koehler Federal Republic of Germany Basel Institute for Immunology Basel, Switzerland (1946 -1995) Car Milstein(1927-2002)Argentina and United Kingdom MRC Laboratory of Molecular Biology Cambridge, United Kingdom 第二節 單克隆抗體制備技術 一、單克隆抗體制備的原理二、單克隆抗體制備的基本條件三、單克隆抗體制備的基本方法單克隆抗體的制備過程 二、 單克隆抗

17、體制備 的基本條件 1. 動物的免疫2. 酶缺陷型骨髓瘤細胞的篩選 和培養3. 單抗檢測方法的建立 二、 單克隆抗體制備 的基本條件 1. 動物的免疫2. 酶缺陷型骨髓瘤細胞的篩選 和培養3. 單抗檢測方法的建立 1. 動物的免疫抗原與載體動物的選擇免疫途徑第一次免疫：可溶性抗原加弗氏完全佐劑第二次免疫：可溶性抗原加弗氏不完全佐劑第三次免疫：可溶性抗原加生理鹽水小鼠背部皮下注射小鼠背部皮下注射小鼠背部皮下注射小鼠背部皮下注射4周后周后3周后周后小鼠腹腔注射小鼠腹腔注射10天后天后檢測血清效價加強免疫：可溶性抗原加生理鹽水小鼠腹腔注射小鼠腹腔注射細胞融合3天后天后免疫動物舉例二、 單克隆抗體制備

18、 的基本條件 1. 動物的免疫2. 酶缺陷型骨髓瘤細胞的篩選 和培養3. 單抗檢測方法的建立 骨髓瘤細胞的演化酶缺陷型骨髓瘤細胞的篩選HGPRT缺陷型骨髓瘤細胞的選擇： 8-雜氮鳥嘌呤（8-azaguanine，8-AG） 6-硫代鳥嘌呤（6-thioguanine，6-TG)TK缺陷型骨髓瘤細胞的選擇： 溴脫氧尿嘧啶核苷（bromodeoxyuridine， BrdU）細胞DNA生物合成途徑嘌呤合成旁路途徑核酸生物合成主要途徑嘧啶合成旁路途徑次黃嘌呤（H）氨基酸谷氨酰胺尿核苷單磷酸DNA胸腺嘧啶脫氧核苷酸鳥嘌呤核苷酸胸腺嘧啶核苷（T）HGPRT（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶）TK（胸腺嘧啶核

19、苷激酶）酶缺陷型細胞的篩選嘌呤合成旁路途徑核酸生物合成主要途徑嘧啶合成旁路途徑次黃嘌呤（H）氨基酸谷氨酰胺尿核苷單磷酸DNA胸腺嘧啶脫氧核苷酸鳥嘌呤核苷酸胸腺嘧啶核苷（T）HGPRT（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶）TK（胸腺嘧啶核苷激酶）8-AG或6-TGBrdU二、 單克隆抗體制備 的基本條件 1. 動物的免疫2. 酶缺陷型骨髓瘤細胞的篩選 和培養3. 單抗檢測方法的建立 單克隆抗體的鑒定 免疫酶技術 免疫熒光技術 免疫擴散試驗第二節 單克隆抗體制備技術 一、單克隆抗體制備的原理二、單克隆抗體制備的基本條件三、單克隆抗體制備的基本方法三、 單克隆抗體制備 的基本方法 1. 酶缺陷型骨髓瘤細胞

20、的培養2. 飼養細胞的制備3. 脾細胞的分離4. 細胞融合5. HAT選擇性培養 6. 陽性克隆的篩選7. 克隆化培養8. 單克隆抗體的擴大生產三、 單克隆抗體制備 的基本方法 1. 酶缺陷型骨髓瘤細胞的培養2. 飼養細胞的制備3. 脾細胞的分離4. 細胞融合5. HAT選擇性培養 6. 陽性克隆的篩選7. 克隆化培養8. 單克隆抗體的擴大生產組織培養的基本條件儀器：包括CO2培養箱、倒置顯微鏡、超凈工作臺、液氮罐、低速低溫離心機等試劑：培養液、HAT培養液、HT培養液、 牛血清、抗生素等耗材：培養板、培養瓶、吸管、移液管等組織培養的常用儀器骨髓瘤細胞系的選擇要點所選擇的骨髓瘤細胞應與提供免疫

21、脾細胞的動物品系相同自身不產生免疫球蛋白的重鏈與輕鏈對氨基碟呤敏感與免疫脾細胞融合后產生穩定分泌Ig雜交瘤細胞三、 單克隆抗體制備 的基本方法 1. 酶缺陷型骨髓瘤細胞的培養2. 飼養細胞的制備3. 脾細胞的分離4. 細胞融合5. HAT選擇性培養 6. 陽性克隆的篩選7. 克隆化培養8. 單克隆抗體的擴大生產飼養細胞的作用： 小鼠腹腔巨噬細胞小鼠脾細胞成纖維細胞飼養細胞（feeder cell）增加細胞密度，滿足新生的雜交瘤細胞對 細胞密度的要求 吞噬清除死亡的細胞 分泌生長刺激因子促進雜交瘤細胞的生長飼養細胞的種類和制備方法：三、 單克隆抗體制備 的基本方法 1. 酶缺陷型骨髓瘤細胞的培養

22、2. 飼養細胞的制備3. 脾細胞的分離4. 細胞融合5. HAT選擇性培養 6. 陽性克隆的篩選7. 克隆化培養8. 單克隆抗體的擴大生產拉頸處死小鼠無菌操作取出脾臟清洗、研磨收集細胞離心洗滌細胞計數脾細胞的分離三、 單克隆抗體制備 的基本方法 1. 酶缺陷型骨髓瘤細胞的培養2. 飼養細胞的制備3. 脾細胞的分離4. 細胞融合5. HAT選擇性培養 6. 陽性克隆的篩選7. 克隆化培養8. 單克隆抗體的擴大生產細胞融合的方法 PEG融合 仙臺病毒 電融合細胞融合 骨髓瘤細胞與脾細胞 按1: 10或1: 5的比例混合 并加入促融劑PEGPEGPEG介導的細胞融合融合后的細胞類型脾細胞脾細胞脾細胞

23、脾細胞瘤細胞瘤細胞瘤細胞瘤細胞B CELLCANCER CELL三、 單克隆抗體制備 的基本方法 1. 酶缺陷型骨髓瘤細胞的培養2. 飼養細胞的制備3. 脾B細胞的分離4. 細胞融合5. HAT選擇性培養 6. 陽性克隆的篩選7. 克隆化培養8. 單克隆抗體的擴大生產雜交瘤細胞的選擇性培養HAT選擇性培養的原理： 細胞的DNA生物合成有主要途徑和補償途徑。當有氨基碟呤存在時，能夠阻斷DNA合成的主要途徑，需通過補償途徑合成DNA，這時就需要次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶（HGPRT）利用次黃嘌呤合成DNA，或胸腺嘧啶核苷激酶（TK）利用胸腺嘧啶核苷合成DNA。正常細胞DNA生物合成途徑嘌呤合成旁

24、路途徑核酸生物合成主要途徑嘧啶合成旁路途徑次黃嘌呤（H）氨基酸谷氨酰胺尿核苷單磷酸DNA胸腺嘧啶脫氧核苷酸鳥嘌呤核苷酸胸腺嘧啶核苷（T）HGPRT（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶）TK（胸腺嘧啶核苷激酶）氨基蝶呤（A）酶缺陷型細胞的篩選嘌呤合成旁路途徑核酸生物合成主要途徑嘧啶合成旁路途徑次黃嘌呤（H）氨基酸谷氨酰胺尿核苷單磷酸DNA胸腺嘧啶脫氧核苷酸鳥嘌呤核苷酸胸腺嘧啶核苷（T）HGPRT（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶）TK（胸腺嘧啶核苷激酶）8-AG或6-TGBrdU氨基蝶呤（A）HAT選擇性培養H：次黃嘌呤 A：氨基喋呤 T：胸腺嘧啶核苷 融合后34天后，可見外形似骨髓瘤細胞，渾圓透亮的克隆

25、。 融合后第79天取培養上清，檢測特異性抗體。細胞生長情況：篩選后存活的細胞脾細胞脾細胞脾細胞脾細胞瘤細胞瘤細胞瘤細胞瘤細胞獲得雜交瘤細胞三、 單克隆抗體制備 的基本方法 1. 酶缺陷型骨髓瘤細胞的培養2. 飼養細胞的制備3. 脾細胞的分離4. 細胞融合5. HAT選擇性培養 6. 陽性克隆的篩選7. 克隆化培養8. 單克隆抗體的擴大生產分泌單克隆抗體雜交瘤細胞的檢測方法 免疫酶技術 間接ELISA 免疫熒光技術 間接免疫熒光測定法 流式細胞術分析（陰性對照：骨髓瘤細胞培養上清； 陽性對照：免疫鼠血清）三、 單克隆抗體制備 的基本方法 1. 酶缺陷型骨髓瘤細胞的培養2. 飼養細胞的制備3. 脾

26、細胞的分離4. 細胞融合5. HAT選擇性培養 6. 陽性克隆的篩選7. 克隆化培養8. 單克隆抗體的擴大生產陽性細胞的單克隆化 克隆（cloning）：由單個細胞繁殖、擴增而形成性狀均一的細胞集落的過程。 有限稀釋法 軟瓊脂克隆技術 有限稀釋法 從陽性分泌孔收集雜交瘤細胞，經逐步稀釋，使每孔只有一個細胞。軟瓊脂克隆技術 從陽性分泌孔收集雜交瘤細胞，以適當濃度雜交瘤細胞加入軟瓊脂培養基中，形成由一個細胞增殖而成的細胞集落。雜交瘤細胞的克隆化篩選：單克隆抗體的鑒定 抗體敏感性的測定 對腹水和培養上清進行效價測定 抗體特異性的檢測 是否與其他抗原有交叉反應 抗體效價的測定 抗體亞類的鑒定 IgG（

27、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3），IgM 抗體親和力分析 識別表位分析三、 單克隆抗體制備 的基本方法 1. 酶缺陷型骨髓瘤細胞的培養2. 飼養細胞的制備3. 脾細胞的分離4. 細胞融合5. HAT選擇性培養 6. 陽性克隆的篩選7. 克隆化培養8. 單克隆抗體的擴大生產單克隆抗體的擴大生產 細胞培養法（50g/ml） 小鼠體內誘生法（mg/ml） 生物反應器（g/10L） 細胞培養法雜交瘤細胞培養瓶或罐中培養收集上清液純化抗體動物體內誘生法Balb/c小鼠腹腔注射0.5ml液體石臘或降植烷腹腔內接種雜交瘤細胞收集腹水生物反應器單抗制備常見問題 污染：培養環境、操作 融合細胞不生長

28、：PEG、血清、HAT培養基 抗體分泌不足：支原體污染、細胞突變、 培養體系有問題 雜交瘤細胞難以克隆化：血清質量、細胞活性第一節 多克隆抗體制備技術第二節 單克隆抗體制備技術第三節 基因工程抗體制備技術 第四節 抗體庫技術 第六章抗體制備技術 基因工程抗體 基因工程抗體優點抗體抗體制備制備特異特異性高性高質量質量穩定穩定成本成本低廉低廉工藝工藝簡單簡單異源異源性低性低穿透穿透性好性好功能功能豐富豐富原核表達抗體人源化小分子抗體雙功能抗體易于改造親和力成熟產業化第三節 基因工程抗體制備技術 一、鼠源抗體人源化二、小分子抗體三、抗體融合蛋白第三節 基因工程抗體制備技術 一、鼠源抗體人源化二、小分

29、子抗體三、抗體融合蛋白鼠源抗體應用中的障礙 免疫原性 半衰期短 抗體功能片段失活（Fc）一、鼠源抗體人源化1. 嵌合抗體2. 改型抗體1. 嵌合抗體（chimeric antibody） 可變區基因的克隆 表達載體的構建 嵌合抗體的表達2. 人改型抗體基因工程抗體種類第三節 基因工程抗體制備技術 一、鼠源抗體人源化二、小分子抗體三、抗體融合蛋白二、小分子抗體1. Fab段抗體2. Fv抗體和單鏈抗體3. 單域抗體4. 最小識別單位小分子抗體的優點可在原核體系中表達，降低生產成本因其分子量小，穿透能力強，易進入病灶部位，有利于對腫瘤等疾病的治療不含Fc段，不與Fc受體結合，可減少因廣泛分布的Fc受體而帶來的不利影響在體內半衰期較短，有利于體內毒性物質的清除易于進一步基因工程改造 第三節 基因工程抗體制備技術 一、鼠源抗體人源化二、小分子抗體三、抗體融合蛋白三、抗體融合蛋白1. 重組免疫毒素2. 其他抗體融合蛋白3. 胞內抗體4. 雙價抗體5. 抗體酶6. 抗原化抗體嵌合受體第一節 多克隆抗體制備技術第二節 單克隆抗體制備技術第三節 基因工程抗體制備技術 第四節 抗體庫技術 第六章抗體制備技術 第四節 抗體庫技術 即用基因克隆技術將全套抗體（repertoire）輕、重鏈可變區基因克隆出來，重組到原核表達載體，通過原