1、. .篇一：直接凝集反響實驗報告免疫學(xué)·直接凝集反響實驗報告實驗一：玻片凝集實驗1. 實驗原理：顆粒性抗原細(xì)菌、紅細(xì)胞等與相應(yīng)的抗體結(jié)合，在適量電解質(zhì)通常是0.85%nacl存在的條件下出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，稱為凝集反響。凝集反響的方法有兩種：直接法；間接法。顆粒性抗原如完整的細(xì)菌或細(xì)胞與相應(yīng)抗體在體外直接結(jié)合而出現(xiàn)的凝集反響，稱為直接凝集反響。如玻片凝集反響和試管凝集反響。將可溶性抗原預(yù)先吸附于一種與免疫無關(guān)的顆粒性載體外表，然后與相應(yīng)的抗體結(jié)合，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，稱為間接凝集反響。如rf因子檢測玻片凝集試驗是使用抗體與未知顆粒性抗原在玻片上直接結(jié)合而出現(xiàn)的凝集反響。此類反響較簡單迅速，常用于

2、抗原或抗體的定性檢測。本次實驗使用玻片凝集試驗的原理進(jìn)展人類abo血型的鑒定。abo血型系統(tǒng)是按照血液中紅細(xì)胞外表的抗原分子來命名的。人類abo血型抗原有兩種：a抗原和b抗原。a型血紅細(xì)胞外表具有a型抗原，血液中具有抗b抗體；b型血紅細(xì)胞外表具有b型抗原，血液中具有抗a抗體；ab型血紅細(xì)胞外表具有a抗原和b抗原，血液中不具有抗a、b抗體；o型血紅細(xì)胞外表不具有a、b抗體，但血液中含有抗a、b抗體。假設(shè)用的抗a血清和抗b血清與受試者紅細(xì)胞上的相應(yīng)抗原結(jié)合，即可引起紅細(xì)胞凝集，根據(jù)凝集反響結(jié)果便可判斷出受試者的血型。2. 實驗方法：1取干凈載玻片一X，用馬克筆分為兩格并注明a、b分區(qū)。2倒置標(biāo)準(zhǔn)抗

3、血清試劑瓶，懸空輕擠出抗a血清一滴，滴在a區(qū)內(nèi)；同法在b區(qū)內(nèi)滴加抗b血清一滴。3使用消毒液對左手無名指進(jìn)展消毒，待消毒液自然枯燥后，使用無菌三棱采血針快速刺破手指。4用木棒的兩端取血，分別在抗a血清和抗b血清中攪拌均勻。5用無菌棉棒壓迫手指止血。6靜置玻片數(shù)分鐘后，觀察紅細(xì)胞凝集反響結(jié)果。3. 實驗結(jié)果：4. 結(jié)果分析：實驗二：試管凝集實驗1. 實驗原理：試管凝集反響是在試管內(nèi)將待檢血清對倍稀釋后，參加等量的顆粒性抗原與待檢血清混合，然后觀察試管內(nèi)有無凝集快出現(xiàn)。如出現(xiàn)凝集塊者為陽性反響。混合后仍均勻渾濁，無凝集塊出現(xiàn)者為陰性反響。根據(jù)血清凝集效價判定待檢血清中相應(yīng)抗體的含量。即在試管內(nèi)用顆粒

4、性抗原檢測未知抗體的相對含量的半定量試驗。本次實驗是以定量的傷寒桿菌為抗原，根據(jù)是否發(fā)生凝集反響來檢測血清中是否含有對應(yīng)的抗體；根據(jù)各試管凝集程度的不同，來判斷抗體的效價。2. 實驗方法：1取試管6支，用馬克筆進(jìn)展標(biāo)記，依次放入試管架中。2在第一支試管中參加生理鹽水0.9ml，其余各管加生理鹽水0.5ml。然后在第一只試管中參加傷寒免疫血清0.1ml，用吸管將它與生理鹽水吹打混勻后，取出0.5ml參加第二支試管中；再將第二只試管的液體吹打混勻，取出0.5ml參加到第三支試管中，其余各管依次按照上述步驟將血清對倍稀釋。至第五支試管時，將試劑混勻后，取出0.5ml棄之不用。是第六支試管不含傷寒免疫

5、血清，作為實驗的陰性對照管。最后在各管中都參加0.5ml傷寒桿菌菌液。3輕搖試管架，混勻試管內(nèi)液體，56水浴1小時后，觀察實驗結(jié)果。3. 實驗結(jié)果：1對照組：即第六支試管，上清液渾濁，管底可有沉淀的細(xì)菌，輕搖后分散呈均勻渾濁。2實驗組：按1-5管依次觀察。陽性者管底出現(xiàn)不規(guī)那么凝集物，較松散。陰性者與對照組一樣。3凝集程度：+：液體澄清透明，細(xì)菌全部凝集于管底，輕搖可見大的凝集塊。 +：液體稍渾，細(xì)菌大多數(shù)凝集于管底，搖動后凝塊較前者小。 +：液體中等混濁，液體中有明顯的凝集物，凝集塊較小。 +：液體混濁，仔細(xì)觀察可以看見液體中有很小的凝集顆粒。 -：與對照管一樣。4凝集效價：出現(xiàn)明顯可見凝集

6、物+時的血清最高稀釋度為血清效價。篇二：細(xì)胞凝集反響實驗報告 *大學(xué)科目 細(xì)胞生物學(xué)實驗 題目細(xì)胞凝集反響細(xì)胞凝集反響【實驗?zāi)康摹?. 了解細(xì)胞膜的外表構(gòu)造；2. 掌握凝集素促使細(xì)胞凝集的原理；3. 學(xué)習(xí)研究細(xì)胞凝集反響的方法。【實驗原理】1. 凝集素凝集素是一類含糖少數(shù)例外并能與糖轉(zhuǎn)移結(jié)合的蛋白質(zhì)，它具有凝集細(xì)胞和刺激細(xì)胞分裂的作用。目前已發(fā)現(xiàn)近千種植物中含有凝集素，在各種真菌、無脊椎動物、脊椎動物，人體的各種組織和器官中及某些病毒體內(nèi)也含有凝集素，在各種真菌、無脊椎動物、脊椎動物，人體的各種組織和器官中及某些病毒體內(nèi)也含有凝集素。常用的為植物凝集素，通常一起被提取的植物命名，如伴刀豆凝集素

7、a、麥胚凝集素、花生凝集素和大豆凝集素等，凝集素是他們的總稱。在細(xì)胞外表，組成細(xì)胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖鏈，形成細(xì)胞外被又稱為糖萼。凝集素能與細(xì)胞外被中的糖分子連接，在細(xì)胞間形成"橋"，從而引起細(xì)胞凝集。凝集素引起的血細(xì)胞凝集，其細(xì)胞膜構(gòu)造沒有發(fā)生變化，與血液凝固中發(fā)生的復(fù)雜生物化學(xué)過程完全不同；另外，凝集素能與不同的糖蛋白特異結(jié)合，參加與凝集素互補的糖可以抑制細(xì)胞的凝集，但是凝集素不是來源或參與免疫反響的產(chǎn)物，因此，ponder提出應(yīng)稱"凝集素組織化學(xué)"而不能稱為"凝集素免疫組織化學(xué)"。人們利用凝集素與不同的糖蛋白特異性結(jié)合的原理

8、，識別和研究不同類型膜構(gòu)造的生物學(xué)特征，以及進(jìn)展血型鑒定。abo血型鑒定主要用于臨床輸血，在皮膚、腎等器官移植的時候選擇abo血型相符的供體；不孕癥和新生兒溶血癥病因的分析及親子鑒定等。另外，凝集素在臨床疾病防治、機(jī)體生理活動調(diào)控以及生物工程等方面展示出了十分廣闊的應(yīng)用前景。如：植物凝集素可抑制受精；蕓豆凝集素可直接抑制hiv-1反轉(zhuǎn)錄酶的活性，減少hiv感染者的病毒載量；細(xì)胞膜外表糖復(fù)合物的糖鏈構(gòu)造與腫瘤細(xì)胞增殖、侵染、轉(zhuǎn)移等開展過程密切相關(guān)，凝集素芯片技術(shù)實現(xiàn)了對癌癥的快速、高通量檢測，有助于篩選出癌癥相關(guān)的糖鏈標(biāo)志物。2. 細(xì)胞凝集細(xì)胞凝集是指細(xì)胞彼此聚集在一起，成為一簇不規(guī)那么的細(xì)胞團(tuán)

9、。細(xì)胞膜是雙層脂鑲嵌蛋白質(zhì)構(gòu)造，脂和蛋白質(zhì)又能與糖分子結(jié)合為細(xì)胞外表的分枝狀糖外被。目前認(rèn)為，細(xì)胞間的聯(lián)系，細(xì)胞的生長和分化，免疫反響和腫瘤發(fā)生都和細(xì)胞外表的分枝狀糖分子有關(guān)。凝集素是一類含糖的少數(shù)例外并能與糖專一結(jié)合的蛋白質(zhì)，如植物血球凝集素，伴刀豆凝集素和土豆凝集素等，它具有凝集細(xì)胞核刺激細(xì)胞分裂的作用。凝集素使細(xì)胞凝集是由于它與細(xì)胞外表的糖分子連接，在細(xì)胞間形成"橋"的結(jié)果，參加與凝集素互補的糖可以抑制細(xì)胞的凝集。3. 細(xì)胞凝集的反響技術(shù)一、直接凝集反響技術(shù)顆粒性抗原(細(xì)菌、螺旋體、紅細(xì)胞等)與相應(yīng)的抗體血清混合后，在電解質(zhì)的參與下，經(jīng)過一定時間，抗原抗體凝聚成肉眼可

10、見的凝集塊，這種現(xiàn)象稱為凝集反響。血清中的抗體稱為凝集素。抗原稱為凝集原。細(xì)菌或其他凝集原都帶有一樣的電荷陰電荷，在懸液中相互排斥而呈均勻的分散狀態(tài)。抗原與抗體相遇后，由于抗原和抗體分子外表存在著相互對應(yīng)的化學(xué)基團(tuán)，因而發(fā)生特異性結(jié)合，稱為抗原抗體復(fù)合物。由于抗體與抗原結(jié)合，降低了抗原分子間的經(jīng)典排斥力，抗原外表的親水基團(tuán)減少，由親水狀態(tài)變?yōu)槭杷疇顟B(tài)，此時已有凝集的趨向，在電解質(zhì)如生理鹽水參與下，由于例子的作用，中和科目 細(xì)胞生物學(xué)實驗 題目細(xì)胞凝集反響了抗原抗體復(fù)合物外面的大局部電荷，使之是去了彼此間的經(jīng)典排斥力，分子間相互吸引，凝集成大的絮片或顆粒。出現(xiàn)了肉眼可見的凝集反響。但是，直接凝集

11、反響技術(shù)也有缺點：特異性不高、抗原抗體無法獲得或無法用于實驗。二、間接凝集反響技術(shù)可溶性抗原或抗體吸附于免疫學(xué)反響無關(guān)的顆粒稱為載體外表上，當(dāng)這些致敏的顆粒與相應(yīng)的抗體或抗原相遇時，就會產(chǎn)生特異性的結(jié)合，在電解質(zhì)參與下，這些顆粒就會發(fā)生凝集現(xiàn)象。這種借助于載體的抗原抗體凝集現(xiàn)象就叫做間接凝集反響。載體的存在使反響的敏感性得以大大提高。間接凝集反響的優(yōu)點：1敏感性強(qiáng)：間接凝集反響是最敏感型的血清學(xué)反響方法之一，可以檢測到微量的抗體和抗原；2快速：一般1h-2h即可判定結(jié)果，假設(shè)在玻板上進(jìn)展，那么只需幾分鐘；3特異性強(qiáng)；4使用方便、簡單三、載體具有吸附抗原或抗體的載體很多，如聚苯乙烯乳膠、白陶土、

12、活性炭、人和多種動物的紅血球、某些細(xì)菌等。良好的載體有以下幾點根本要求：1在生理鹽水或緩沖液無自凝傾向；2大小均勻；3比重與介質(zhì)相似，短時間內(nèi)不能沉淀；4無化學(xué)或血清學(xué)活性5吸附抗原或抗體后，不影響其活性。目前應(yīng)用最廣的是人的o型紅血球和綿羊紅血球。而后者應(yīng)用更廣，因為其來源方便。另外綿羊紅血球的外表有大量的約1000個以上糖蛋白受體，極易吸附某些抗原物質(zhì)，吸附性能好，且大小均勻一致。【實驗用品】1. 材料土豆塊莖、家兔2. 試劑抗凝血劑、pbs、土豆塊莖、生理鹽水和其他等滲液。3器材5ml注射器、酒精棉球、雙凹片、載玻片、普通光學(xué)顯微鏡、托盤天平、滴管、離心管。【操作步驟】1. 取土豆去皮塊

13、莖2克，切碎并加10mlpbs緩沖液，浸泡24小時，浸出的粗體液中即含有可溶性土豆凝集素；2. 用針管抽取一定體積的抗凝劑1%肝素溶液，并使抗凝劑充分浸潤針管各部以及針頭。然后從兔子耳根處或心臟抽取兔子靜脈血1ml，加生理鹽水3ml，在1000r/min條件下，離心5分鐘。重復(fù)三次離心，最后按沉淀的紅細(xì)胞體積用生理鹽水配成1%的紅細(xì)胞懸液；3. 在雙凹片的左孔滴加一滴pbs緩沖液，同時在雙凹片的右孔處滴加一滴土豆凝集素；4. 在雙凹片的左右孔同時滴加一滴1%的紅細(xì)胞懸液，然后使左右孔內(nèi)的液體都充分混勻；5. 左手捏住雙凹片的一端，右手輕輕搖晃雙凹片，使凹槽內(nèi)的液體充分的混合，如此搖晃510分鐘

14、，觀察結(jié)果。科目 細(xì)胞生物學(xué)實驗 題目細(xì)胞凝集反響6. 先以白紙為襯托，直接觀察雙凹片凹槽內(nèi)混合樣品發(fā)生凝集的現(xiàn)象，注意左右凹槽內(nèi)不同現(xiàn)象的比照，對于發(fā)生凝集的一邊注意觀察凝集與不發(fā)生凝集的區(qū)別。直接觀察后在光學(xué)顯微鏡下觀察兩凹槽內(nèi)現(xiàn)象的區(qū)別，并用照相機(jī)拍攝實驗結(jié)果。【實驗結(jié)果】1. 肉眼觀察，對照組中紅細(xì)胞沉積在雙凹片凹槽底部呈大紅點；用凝集素處理的實驗組。顏色越來越淺，透明度逐漸變高，經(jīng)過1分30秒，背景顏色變?yōu)橥该鳎t細(xì)胞呈顆粒狀聚集2.低倍鏡下可以看到對照組中紅細(xì)胞分布較均一，無凝集；實驗組中紅細(xì)胞聚集在一起對照組實驗組【實驗結(jié)果分析與本卷須知】分析：1. 把液體滴加到雙凹片上時，注意

15、用量，防止懸液過多而溢出，使兩個細(xì)胞懸液接觸，導(dǎo)致實驗結(jié)果不可靠。科目 細(xì)胞生物學(xué)實驗 題目細(xì)胞凝集反響2. 滴加1%的紅細(xì)胞懸液時，可適當(dāng)?shù)亩嗉狱c兒，便于實驗結(jié)果的觀察。3. 用手晃動雙凹片時，注意搖晃的姿勢：一只手用手掌處貼緊雙凹片，另一只手抵住雙凹片的另一側(cè)上下晃動。4. 搖晃的時間可適當(dāng)延長，提高紅細(xì)胞凝集程度。5. 浸出土豆凝集素時選發(fā)芽的或發(fā)青色的土豆。由此可知發(fā)芽土豆不宜食用，因其所含土豆凝集素可讓血細(xì)胞發(fā)生凝集。6. 區(qū)分血清與血漿，血清指血液自然沉降后所得上清液，而血漿是血液加抗凝劑后離心所得上清液。7. 凝血是指多個細(xì)胞聚集成不規(guī)那么細(xì)胞簇，溶血是紅細(xì)胞在低滲溶液作用下，腫

16、脹破裂放出血紅蛋白的過程。篇三：細(xì)胞凝集反響實驗報告*班級13級生命基地班 學(xué)號 同組者：科目 細(xì)胞生物學(xué)實驗 實驗題目 細(xì)胞凝集反響【實驗題目】細(xì)胞凝集反響【實驗?zāi)康摹?、了解細(xì)胞的外表構(gòu)造。2、掌握細(xì)胞凝集的原理。3、掌握細(xì)胞凝集實驗的操作方法。【實驗材料與用品】1. 試劑：pbs緩沖溶液、0.9%的氯化鈉溶液生理鹽水2. 器具：酒精棉球、雙凹片、載玻片、普通光學(xué)顯微鏡、托盤天平、滴管、離心管3. 材料：兔子靜脈血【實驗原理】1. 凝集素凝集素lectin是一類含糖的少數(shù)例外并能與糖專一結(jié)合的蛋白質(zhì)，它具有凝集細(xì)胞和刺激細(xì)胞分裂的作用。目前已發(fā)現(xiàn)近千種植物中含有凝集素，在各種真菌、無脊椎動

17、物、脊椎動物、人體的各種組織和器官中及某些病毒體內(nèi)也含有凝集素。常用的為植物凝集素，通常以其被提取的植物命名，凝集素為它們的總稱。在細(xì)胞外表，組成細(xì)胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖鏈，形成細(xì)胞外被糖萼。凝集素使細(xì)胞凝集是由于它與細(xì)胞外表的糖分子連接，在細(xì)胞間形成"橋"的結(jié)果，參加與凝集素互補的糖可以抑制細(xì)胞的凝集。2. 細(xì)胞凝集細(xì)胞凝集是指細(xì)胞彼此聚集在一起，成為一簇不規(guī)那么的細(xì)胞團(tuán)，目前認(rèn)為，細(xì)胞間的聯(lián)系、細(xì)胞的生長和分化、腫瘤的發(fā)生與免疫反響都與細(xì)胞外表的分枝狀糖分子有關(guān)。3. 細(xì)胞凝集的反響技術(shù)*班級13級生命基地班 學(xué)號 同組者：科目 細(xì)胞生物學(xué)實驗 實驗題目 細(xì)胞凝集反

18、響1直接凝集反響技術(shù)顆粒性抗原與相應(yīng)的抗體血清混合后，在電解質(zhì)的參與下，經(jīng)過一定時間，抗原抗體凝集成肉眼可見的凝集塊，這種現(xiàn)象稱為凝集反響。血清中的抗體稱為凝集素。抗原稱為凝集原。細(xì)菌或其他凝集原都帶有一樣的電荷陰電荷，在懸液中相互排斥而呈均勻的分散狀態(tài)。抗原和抗體相遇后，由于抗原和抗體分子外表存在相互對應(yīng)的化學(xué)基團(tuán)，因而發(fā)生特異性結(jié)合，稱為抗原抗體復(fù)合物，由于抗體與抗原結(jié)合，降低了抗原分子間的排斥力，抗原外表的親水基團(tuán)減少，此時已有凝集趨勢，在電解質(zhì)參與下，中和了抗原抗體復(fù)合物的大局部電荷，使之失去了經(jīng)典排斥力，分子間相互吸引，凝集成較大顆粒。出現(xiàn)了肉眼可見的凝集反響。2間接凝集反響技術(shù)可溶

19、性抗原或抗體吸附于免疫學(xué)反響無關(guān)的顆粒外表上，當(dāng)這些致敏的顆粒與相應(yīng)的抗體或抗原相遇時，就會產(chǎn)生特異性的結(jié)合，在電解質(zhì)的參與下，這些顆粒就會發(fā)生凝集現(xiàn)象。這種借助于載體的抗原抗體凝集現(xiàn)象就叫做間接凝集反響技術(shù)。4. 載體具有吸附抗原抗體的載體很多，如聚苯乙烯乳膠、白陶土、活性炭、人和多種動物的紅血球、某些細(xì)菌等。良好的載體有以下幾點根本要求：1在生理鹽水或緩沖液中無自凝現(xiàn)象；2大小均勻；3比重與介質(zhì)相似，短時間內(nèi)不沉淀；4無化學(xué)或血清學(xué)活性；5吸附抗原或抗體后，不影響其活性；目前使用最廣泛的是人的o型紅血球和綿羊紅血球。后者使用更廣，因其來源方便，另外綿羊紅血球的外表有大量的糖蛋白受體，極易吸

20、附某些抗原物質(zhì)，吸附性能好，且大小均勻一致。*班級13級生命基地班 學(xué)號 同組者：科目 細(xì)胞生物學(xué)實驗 實驗題目 細(xì)胞凝集反響【實驗步驟】一、大體流程 取兔子靜脈血配置1紅細(xì)胞懸液二、具體操作1、稱取土豆去皮塊莖2g，加10mlpbs緩沖液，浸泡24小時，浸出的粗提液中即含有可溶性 土豆凝集素。教師已做好2、抽取兔子靜脈血液加抗凝劑1ml，加生理鹽水3ml，在1000r/min條件下，離心5min，顯微鏡下觀察 搖晃5-10min 觀察 土豆凝集素+紅細(xì)胞懸液 混合 pbs+紅細(xì)胞懸液 混合對照*班級13級生命基地班 學(xué)號 同組者：科目 細(xì)胞生物學(xué)實驗 實驗題目 細(xì)胞凝集反響重復(fù)3次離心，最后

21、按壓積紅細(xì)胞體積用生理鹽水配成1%紅細(xì)胞懸液。3、分別用滴管吸取土豆凝集素和1%紅細(xì)胞懸液各一滴，置雙凹片左孔內(nèi)，充分混勻。4、同時分別用滴管吸取pbs緩沖液和1%的紅細(xì)胞懸液各一滴，置雙凹片右孔內(nèi)，充分混勻，做對照實驗。5、搖晃5-10min后，觀察有無發(fā)生細(xì)胞凝集并置顯微鏡下觀察。【實驗結(jié)果與分析】i.如圖1、圖2所示：剛開場計時時，兩側(cè)溶液均無凝集現(xiàn)象；4min左右時，可看到雙凹片左側(cè)溶液中出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，一局部血細(xì)胞在中央聚集呈沙粒狀，溶液周圍較澄清；而右側(cè)溶液無凝集現(xiàn)象。說明土豆凝集素可以使血液發(fā)生凝集，而pbs緩沖液那么不能。圖1: 剛開場時雙凹片兩側(cè)溶液比照圖 圖2：4min時雙凹片兩側(cè)溶液比照圖ii.如圖3、圖4所示：在10×10顯微鏡下觀察，可看到左側(cè)溶液中