1、實(shí)驗(yàn)一、微生物的簡(jiǎn)單染色思考題1油鏡與普通物鏡在使用方法上有何不同？應(yīng)特別注意些什么？答：油鏡在使用時(shí)必須在載玻片與物鏡之間滴加鏡頭油。油鏡使用過(guò)程中要注意兩點(diǎn)：(1)、使用后鏡頭的清潔：鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度，用完油鏡必須進(jìn)行“三擦”(觀察完畢，上懸鏡筒，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后再用擦鏡紙沾取少量二甲苯(或者乙醇乙醛溶液)擦去殘留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的二甲苯，后將鏡體全部復(fù)原)。(2)、.觀察標(biāo)本時(shí)，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當(dāng)目視接目鏡時(shí)，特別在使用油鏡時(shí)，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。2、使用油鏡時(shí)，為什么必須用鏡頭油？答

2、：在使用普通顯微鏡時(shí)，當(dāng)光線由反光鏡通過(guò)玻片與鏡頭之間的空氣時(shí)，由于空氣與玻片的密度不同，使光線受到曲折，發(fā)生散射，降低了視野的照明度。若中間的介質(zhì)是一層油(其折射率與玻片的相近)，則幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進(jìn)光量，從而使物象更加清晰。3、鏡檢標(biāo)本時(shí)，為什么先用低倍鏡觀察，而不是直接用高倍鏡或油鏡觀察？答：低倍鏡視野比較大，能看到的范圍大，容易找到觀察的目標(biāo)，然后在用放大倍數(shù)高的高倍鏡或油鏡有目的的觀察。實(shí)驗(yàn)二、革蘭氏染色(1)為什么必須用培養(yǎng)24h以?xún)?nèi)的菌體進(jìn)行革蘭氏染色？答：24h以?xún)?nèi)的菌體處于活躍生長(zhǎng)期，菌體細(xì)胞壁具有典型特征，而處于老齡的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌壁結(jié)構(gòu)開(kāi)始發(fā)生變化，染色時(shí)會(huì)被

3、染成紅色而造成假陰性(2)要得到正確的革蘭氏染色結(jié)果，必須注意哪些操作？哪一步是關(guān)鍵步驟？為什么？答：應(yīng)注意如下幾點(diǎn)：其一，選用活躍生長(zhǎng)期菌種染色，老齡的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌會(huì)被染成紅色而造成假陰性；其二，涂片不宜過(guò)厚，以免脫色不完全造成假陽(yáng)性；其三，脫色是革蘭氏染色是否成功的關(guān)鍵，脫色不夠造成假陽(yáng)性，脫色過(guò)度造成假陰性(3)當(dāng)你對(duì)未知菌進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)，怎樣保證操作正確，結(jié)果可靠？答：當(dāng)要確證未知菌的革蘭氏反應(yīng)時(shí)，可用已知菌進(jìn)行混合涂片，使二者染色條件保持一致,如果已知菌的結(jié)果與預(yù)期相符，則證明操作操作正確，結(jié)果可靠。實(shí)驗(yàn)三、微生物的顯微鏡直接計(jì)數(shù)法1、在顯微鏡下直接測(cè)定微生物數(shù)量有什么優(yōu)缺點(diǎn)？答

4、：1)優(yōu)點(diǎn)：直觀、快速、操作簡(jiǎn)單。2)缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)；需要相對(duì)高的細(xì)菌濃度；個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察；實(shí)驗(yàn)四、微生物大小的測(cè)定1、在不改變目鏡和目鏡測(cè)微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來(lái)測(cè)定同一細(xì)菌的大小時(shí)，其測(cè)定結(jié)果是否相同？為什么？答：相同；目鏡測(cè)微尺是一塊圓形玻片，其中央刻有精確等分的刻度，有把5毫米刻成為50等分或把10毫米長(zhǎng)度刻成100等分。測(cè)量時(shí)，將其放在接目鏡中的隔板上來(lái)測(cè)量經(jīng)顯微鏡放大后的細(xì)胞物象。由于在不改變目鏡和目鏡測(cè)微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來(lái)測(cè)定同一細(xì)菌的大小時(shí)，物象的放大倍數(shù)與每小格目鏡測(cè)微尺所代表的長(zhǎng)度在變化比例上是同步的，故

5、而測(cè)定結(jié)果相同。實(shí)驗(yàn)五、培養(yǎng)基的配置與高壓蒸汽滅菌1、培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌堂口何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是否無(wú)菌？為什么要倒置培養(yǎng)？答：由于配制培養(yǎng)基的各類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和容器等含有各種微生物，因此，已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，如果來(lái)不及滅菌，應(yīng)暫存冰箱內(nèi)，以防止其中的微生物生長(zhǎng)系列而消耗養(yǎng)分和改變培養(yǎng)基的酸堿度所帶來(lái)的不利影響。將滅菌的培養(yǎng)基放入37c溫箱中培養(yǎng)2448h,無(wú)菌生長(zhǎng)即可證明滅菌后的培養(yǎng)基無(wú)菌。倒置培養(yǎng)的主要目的：1）由于重力的作用使培養(yǎng)基表面及次層能富集微生物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，利于微生物生長(zhǎng)；2）防止空氣中微生物的污染培養(yǎng)基及培養(yǎng)物：倒置時(shí)平板內(nèi)的空氣是不流動(dòng)的，雜菌不會(huì)

6、沉降到培養(yǎng)基表面，如果不倒置很快平板周邊會(huì)長(zhǎng)起雜菌。3）倒置培養(yǎng)使瓊脂里水分不易蒸發(fā)出去，而充分的保持瓊脂的彈性與細(xì)菌容易繁殖和生存的環(huán)境。如果不倒置，大概3天左右培養(yǎng)基就會(huì)出現(xiàn)龜裂等水分散失的情況。而一些落菌等試驗(yàn)，需驗(yàn)證培養(yǎng)基無(wú)菌，就要先倒置培養(yǎng)48小時(shí)才可作為模板做落菌，水分散失是很重要的。2、在配制培養(yǎng)基的操作過(guò)程中應(yīng)注意些什么問(wèn)題？為什么？答：一般而言，培養(yǎng)基的配置要注意如下幾點(diǎn)原則：1）、營(yíng)養(yǎng)成分的配比：碳源和氮源的比例（C/N）要適當(dāng)；2）、適宜的酸堿度（pH值）：配制培養(yǎng)基時(shí)pH的調(diào)節(jié)；3）、滲透壓：營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)要有適合的濃度；4）、培養(yǎng)基不能反復(fù)高溫滅菌。5）、稱(chēng)不溶性固形物時(shí)，

7、應(yīng)單獨(dú)稱(chēng)，若量少的可以與無(wú)機(jī)鹽一起稱(chēng)，但一定要混勻再分裝；6）、一般情況下培養(yǎng)基用自來(lái)水配制。操作細(xì)節(jié)上則要注意：1）、稱(chēng)藥品用的牛角匙不要混用，稱(chēng)完藥品應(yīng)及時(shí)蓋緊瓶蓋2）、調(diào)pH值不要調(diào)過(guò)頭，以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度3）、分裝時(shí)注意不要污染棉塞、試管口，以免染菌。4）、及時(shí)滅菌，以免培養(yǎng)基及容器里的微生物生長(zhǎng)繁殖消耗養(yǎng)分、改變酸堿度。3、高壓蒸氣滅菌開(kāi)始之前，為什么要將鍋內(nèi)冷空氣排盡？滅菌完畢后，為什么待壓力降低“0”時(shí)才能打開(kāi)排氣閥，開(kāi)蓋取物。答：1）在使用高壓蒸汽滅菌時(shí)，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要，因?yàn)榭諝獾呐蛎泬捍笥谒羝呐蛎泬海裕?dāng)水蒸氣中含有空氣時(shí)，在同一

8、壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。2）壓力未降至“0”便開(kāi)蓋取物的可能后果：壓力鍋內(nèi)壓力驟然降低，引起容器中的溶液噴出容器口導(dǎo)致污染或?qū)е氯藛T的燙傷。實(shí)驗(yàn)：化學(xué)因素對(duì)微生物的影響1、利用濾紙片法測(cè)定化學(xué)消毒劑對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響時(shí)，影響抑菌圈大小的因素有哪些？答：微生物的種類(lèi)；化學(xué)消毒劑的含量；培養(yǎng)的條件；濾紙片的大小、厚度；接種量的大小等。實(shí)驗(yàn)：霉菌的形態(tài)觀察1、你主要根據(jù)哪些形態(tài)特征來(lái)區(qū)分四種霉菌？答：1）菌絲特征：青菌與曲霉菌絲與膈；毛霉與根霉則無(wú)；2）菌絲的特化結(jié)構(gòu)：曲霉有足細(xì)胞，其它霉菌無(wú)；根霉有假根與匍匐枝，其它霉菌無(wú)；3）抱子頭特征：青霉的抱子頭為掃帚狀；根霉與毛霉的抱子

9、頭為囊狀；曲霉為菊花狀抱子頭。實(shí)驗(yàn)：四大類(lèi)微生物菌落形態(tài)觀察1、請(qǐng)你從六個(gè)方面描述四大類(lèi)微生物菌落形態(tài)的特征。2、答：總體可從各類(lèi)微生物菌落的形狀、大小、色澤、透明度、致密度、邊緣著手描述它們的特征。Qt虬猷娥首、我舒4苒醇瞬般鞋期M斷用的K1康母N91雷落袤面用i腔艮肘做機(jī)與觸雌住要戰(zhàn)眥楠的腦則出小期蠢牌.濾冊(cè)或M布大小不袁獻(xiàn)頻哭覷膿白色自包施梅布禮為麴鼾氟嬲崎沫觸鬻毛此:但不及圈HA混氯例幼柏加瞬毗it翱林翻懷及蛾酬糕乳與賺It相嘮腳九蔓上著翎u鞭陋喝”藏百睚M聯(lián)柵躺操醐麻魏和眄生蛾施孑州伊相肝的附毗版看塾柔燦MHJW明基施州也秘脆第！與峨部螭Y$整導(dǎo)酬*群訴版扃熹斛沒(méi)殖加1睚富國(guó)蝴用惟施

10、州.營(yíng)落生長(zhǎng)過(guò)g從開(kāi)始械到也醐麗提姚為埴尢購(gòu)施色加夫勵(lì)在獨(dú)中出既m融趣期犍米耗好就由鉆艇及好也并蚓不弱微削W超融釀上極自軸穌般肘肝耿眥麻魁出現(xiàn)稠她,斛土財(cái)菌料耕實(shí)驗(yàn)：細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)的染色1、若涂片中觀察到的只是大量游離芽抱，很少看到芽抱囊及營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，你認(rèn)為這是什么原因？答：1）營(yíng)養(yǎng)缺乏，培養(yǎng)條件不適宜，芽胞桿菌群體形成抗逆體2）培養(yǎng)時(shí)間太長(zhǎng)，營(yíng)養(yǎng)體已大部分形成芽胞且芽抱囊破裂游離出來(lái)。2.組成莢膜的成分是什么琳片一般用什么固定方法，為什么？答：莢膜為粘液狀或膠狀物質(zhì)，其成分為多糖、糖蛋白或多肽；因?yàn)楹扛撸鰺嵋资冃危识潭〞r(shí)采用自然晾干的方法固定。實(shí)驗(yàn)：酸奶1、如果你利用生牛乳通過(guò)細(xì)菌

11、自然發(fā)酵制造能飲用的酸牛乳，應(yīng)控制在哪一時(shí)期？答：從牛乳酸敗過(guò)程中細(xì)菌的生態(tài)演變過(guò)程來(lái)看，生牛乳的狀態(tài)經(jīng)歷了幾個(gè)階段的變化:1-牛乳PH中性，含豐富的乳糖乳酸PH下降；2、引起蛋白質(zhì)Z塊抑制了乳鏈球菌的繁殖3、乳桿菌能耐受低PH,發(fā)酵乳糖PH更低4、酵母菌在這低PH環(huán)境下利用乳酸生長(zhǎng)乳糖、乳酸消失，PH上升；5、假單胞菌、芽胞桿菌能產(chǎn)生蛋白酶，分解凝結(jié)的牛乳蛋白，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)被利用完畢，牛乳的分解也就完成了。在第三階段，也是生牛乳中乳糖被天然微生物充分發(fā)酵生成易被人體消化吸收的乳酸的時(shí)期，故而應(yīng)控制在第三階段。實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和人體表面的微生物檢查1、比較洗手前后菌落數(shù)的變化，談?wù)勀愕捏w會(huì)。洗手后仍有少量細(xì)菌生長(zhǎng)，你認(rèn)為是什么原因？答：一般洗手后菌落數(shù)變少。這說(shuō)明洗手是防止病菌的一項(xiàng)必要措施。洗手后仍有少量細(xì)菌有可能是：1）、洗手并不能徹底清除手中粘附的微生物；2）、洗手的用水本