1、中西醫臨床醫學分子生物學成都中醫藥大學第一章 基因和基因組（全面）基因的基本結構外顯子：構成斷裂基因的兩種序列之一，是指初級轉錄物在剪接時被保留的序列及對應的DNA序列，屬于編碼序列，在轉錄區及初級轉錄物中與內含子交替連接。內含子：間插序列，是構成斷裂基因的兩種序列之一，是指促急轉路網在剪接時被切除的序列及對應的DNA序列，屬于非編碼序列。啟動子：是指基因序列中能被RNA聚合酶識別、結合，從而形成轉錄起始復合物并啟動轉錄的DNA序列，通常位于基因（或操縱子）轉錄區的上游，具有方向性，屬于調控序列。基因組：病毒基因組的基本特征：1、所含核酸的種類與結構不同2、所含核酸的分子數不同3、基因組較小4

2、、基因組為單倍體并且所含基因為單拷貝5、基因組序列基本上都是編碼序列6、基因的連續性不同7、相關基因串聯成一個轉錄單位原核生物基因組的基本特征：1、 基因組DNA為單一閉環雙鏈分子2、 基因組DNA只有一個復制起點3、 基因組序列以編碼序列為主，非編碼序列主要是一些調控序列4、 基因組所含基因數目比病毒多，并且其基因多形成操縱子結構真核生物基因組特點：1、 染色體DNA是線性分子，含三種功能元件（復制起點、著絲粒、端粒）2、 細胞核DNA與組蛋白、非組蛋白、RNA形成染色體結構3、 基因組序列僅有不到10%是編碼序列4、 基因在基因組中散在分布，相鄰基因被大量稱為基因間區的非編碼序列隔開5、

3、基因組序列中包含大量重復序列又稱重復DNA（高度重復序列、中度重復序列、單一序列）6、 基因組中存在各自基因家族，基因家族成員或形成基因簇，或散在分布7、 基因組中含大量轉座元件DNA多態性：DNA分子的一種序列特征，是指染色體DNA某個基因座存在不知一種基因型，因而存在個體間差異，表現為堿基序列的差異或堿基序列重復程度的差異，且該差異在種群中穩定存在，遺傳方式符合孟德爾遺傳定律。第二章 DNA的生物合成DNA重組：基因組中或基因組之間發生遺傳信息的重新組合。同源重組：是指發生在兩段同源序列之間的DNA片段交換。轉座子：具有完整轉座元件的功能特征，可攜帶內外源基因組片段（單基因或多基因），可表

4、達出新的表型，由自己編碼的轉座酶催化轉座（轉座元件或其拷貝移動位置的現象）。簡單轉座子復合轉座子結構簡單，長度為7001531bp，由轉座酶基因序列和兩端長度為941bp的反向重復序列構成，其中反向重復序列是轉座酶的識別位點除含轉座酶基因序列和反向重復序列之外，還含與轉座功能無關的其他基因序列，這些基因常常賦予宿主細胞某種表型。第五章 基因表達調控基因表達基本方式特異性基本要素生理意義DNA轉錄過程及轉錄產物翻譯過程組成型表達時間特異性調控序列適應性調控誘導型表達和阻遏表達空間特異性調節蛋白程序性調控協同表達條件特異性第二節 原核生物的基因表達調控操縱子：由一個啟動子、一個操縱基因及其所控制的

5、一組功能相關的結構基因等組成，有些操縱子還有激活蛋白結合位點。基因表達調控的特點：既有正調節，又有負調節；調節蛋白都是DNA結合蛋白；存在衰減調控機制；存在應急應答調控機制。轉錄水平的調控調控因素：調控序列、調節蛋白（轉錄起始因子、阻遏蛋白、激活蛋白）調控序列包括啟動子、終止子、操縱基因、激活蛋白結合位點操縱基因：與啟動子相鄰、重疊或包含，是阻遏蛋白的結合位點。乳糖操縱子 看一下第三節 真核生物的基因表達調控基因表達的特點以基因為轉錄單位；轉錄后加工更復雜；轉錄和翻譯存在時空隔離；翻譯及翻譯后修飾更復雜基因表達調控的特點 既有瞬時調控，又有發育調控；調控環節更多；染色質結構變化影響轉錄效率；轉

6、錄調控以正調節為主；調控序列多并且可以遠離轉錄區；調節蛋白種類繁多，調節機制復雜。染色質水平的調控轉錄水平的調控翻譯水平的調控染色質活化調控序列調節蛋白mRNA穩定性組蛋白修飾啟動子5非翻譯區長度DNA甲基化增強子上游開放閱讀框基因重排沉默子翻譯阻遏蛋白基因擴增翻譯起始因子磷酸化染色質丟失核糖體蛋白磷酸化基因組印記RNA干擾第六章 信號轉導信號轉導：細胞通訊觸發細胞內一系列有序的化學反應，這些反應的本質是將一種信號轉換成另一種信號，最終產生細胞應答，包括代謝物水平和代謝速度的改變，導致細胞的生長、分裂、分化、衰老、死亡速度的改變，這一過程即為信號轉導。細胞通訊方式：細胞間隙連接通訊、細胞表面分

7、子接觸通訊、化學信號通訊信號轉導的基本機制：通過數量調節改變信號轉導分子濃度、通過結構調節改變信號轉導蛋白構象、通過靶向轉運改變信號轉導分子分布信號分子分類：親水性信號分子（第一信使）、疏水性信號分子通訊方式：內分泌、旁分泌、自分泌、神經分泌受體：細胞內受體、細胞膜受體（離子通道受體、G蛋白偶聯受體、單次跨膜受體、蛋白質降解受體）分子開關：G蛋白的特點：是一類水解酶，以GTP為激活劑、GDP為抑制劑；是一類GTPase，能把GTP水解成GDP和磷酸，即把激活劑水解成抑制劑。GTPase開關蛋白是控制信號轉導的一類分子開關，分為大G蛋白和小G蛋白大G蛋白和小G蛋白第二信使：第一信使與膜受體結合，

8、引起細胞內一些小分子物質濃度的改變，這些小分子物質是下游效應蛋白的変構劑，通過對效應蛋白進行変構調節來傳導信號。離子通道分為：配體門控通道、電壓門控離子通道、機械門控離子通道。G蛋白偶聯受體街道的信號傳導途徑：蛋白激酶A途徑、IP3-DAG途徑。蛋白激酶A途徑以改變靶細胞內cAMP水平和蛋白激酶A活性為主要特征，是激素調控細胞代謝和基因表達的重要途徑。1 主要成分：激活型三聚體G蛋白或抑制型三聚體G蛋白、腺苷酸環化酶、環腺苷酸、蛋白激酶A。2 轉導過程：腎上腺素與其一種受體-腎上腺素受體結合、激素-受體復合物將三聚體G蛋白激活成G·GTP，每一個激素-受體復合物可激活100個三聚體G

9、蛋白，故產生放大效應、G·GTP變構激活腺苷酸環化酶、腺苷酸環化酶催化ATP合成第二信使cAMP，使細胞內cAMP濃度在幾秒內升高數倍、cAMP激活蛋白激酶A3 特導效應：短期效應（核外效應）、長期效應（核內效應）4 放大效應發生在受體、腺苷酸環化酶、蛋白激酶A及其他化學修飾環節。5 特異性：在肝細胞內激活糖原磷酸化酶b激酶，促進肝糖原分解，補充血糖。在脂肪細胞內激活激素敏感性脂肪酶，促進脂肪動員。在心肌細胞內磷酸化細胞膜電壓門控鈣通道，增加Ca2+內向銅梁，增強心肌收縮。在胃黏膜壁細胞促進微管泡轉運，補充頂端膜H+,K+-ATPase，促進胃酸分泌。在海馬錐體細胞抑制Ca2+激活的

10、鉀通道，使細胞去極化，延長放電時間。第七章 核酸提取與測序DNA測序的鏈終止法（Sanger建立）（雙脫氧法）原理：建立四個反應體系，每個體系都含DNA聚合酶、引物和dNTP，可以用待測DNA作為模版，合成其互補鏈，然后進行電泳、顯影和讀序。第八章 印跡雜交技術雜交：不同來源單鏈核酸的退火。探針：指用于指示特定（如核酸、蛋白質、細胞結構）的性質或狀態的一類標記分子。核酸探針：是帶有標記物且序列已知的核酸片段，能與待測核酸中的特定序列特異雜交，形成的雜交體可以檢測。合適的核酸探針的條件：特異性高、單鏈核酸、帶有標記物標記物穩定且靈敏度高。常用核酸印跡法（DNA印跡法、RNA印跡法）DNA印跡法步

11、驟：樣品制備、電泳分離、變性、印跡、固定、預雜交、雜交、漂洗、分析。RNA印跡法步驟（與DNA差不多）：RNA不需要酶切，變性劑處理，不能用堿變性，電泳凝膠不能加入溴化乙錠，所有操作嚴格防止Rnase污染。蛋白質印跡法步驟：樣品制備、電泳分離、印跡、封閉、監測分析第九章 生物芯片技術基因芯片（DNA芯片、DNA微陣列、寡核苷酸微陣列）：有序固定了寡核苷酸、基因組DNA或互補DNA高密度陣列的生物芯片，可用于分析基因組圖譜、基因表達譜等。蛋白質芯片（蛋白質微陣列）：在幾平方厘米的基片表面有序固定多達數萬個蛋白質探針點，可以進行抗原-抗體相互作用、蛋白質-蛋白質相互作用等為基礎的大規模分析。第十章

12、 聚合酶鏈反應技術PCR基本原理 步驟：變性、退火、延伸PCR體系組成：DNA聚合酶（耐熱 TapDNA聚合酶）、引物、dNTP、模版、緩沖溶液。第十一章 重組DNA技術重組DNA技術（基因工程）：DNA克隆所采用的技術和相關工作的統稱。DNA克隆：將某種DNA片段與DNA載體連接成重組DNA，導入細胞進行復制，并隨細胞分裂而擴增，最終獲得該DNA片段的大量拷貝。限制性內切酶：一種內切酶，由原核生物（主要是細菌）基因編碼。能識別雙鏈DNA的特定序列（限制性酶切位點），水解該序列內部或附近的磷酸二酯鍵。限制性內切酶的分類：I型限制性內切酶 III型限制性內切酶 II型限制性內切酶克隆載體的特點：分子小，容量大，容易導入宿主細胞，拷貝數高，容易提取，抗剪切力強表達載體的特點：第十三章 基因診斷和基因治療基因診斷：指直接檢測基因組中致病基因或疾病相關基因的改變，或病原體基因的存在，并以此作為疾病的診斷指標。基因治療：指把缺陷基因的野生型拷貝導入患者細胞內，以治療疾病。基本條件：對所治療的疾病已有充分認識，并且傳統治療無效或效果不佳；致