1、基因工程1. （2012浙江T6,6分）天然的玫瑰沒有藍色花，這是由于缺少控制藍色色素合成的基因B，而開藍色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B?，F用基因工程技術培育藍玫瑰，下列操作正確的是（ ）A.提取矮牽牛藍色花的mRNA，經逆轉錄獲得互補的DNA，再擴增基因BB.利用限制性核酸內切酶從開藍色花矮牽牛的基因文庫中獲取基因BC.利用DNA聚合酶將基因B與質粒連接后導入玫瑰細胞D.將基因B直接導入大腸桿菌，然后感染并轉入玫瑰細胞答案：A解析：提取矮牽牛藍色花的mRNA，逆轉錄得到DNA，然后擴增，可獲得大量的基因B，A正確；從基因文庫中獲取目的基因，只要根據目的基因的相關信息和基因文庫中的信息進行

2、篩選對比即可，不需要用限制酶進行切割，B錯誤；目的基因與質粒的連接需要用DNA連接酶，而不是DNA聚合酶，C錯誤；目的基因需要和運載體連接后形成重組質粒再導入，而且應該用農桿菌進行感染，而不是大腸桿菌，D錯誤。2. （2012江蘇T13，2分）下列關于轉基因生物安全性的敘述，錯誤的是（）A. 種植轉基因作物應與傳統農業種植區隔離B. 轉基因作物被動物食用后，目的基因會轉入動物體細胞中C. 種植轉基因植物有可能因基因擴散而影響野生植物的遺傳多樣性D. 轉基因植物的目的基因可能轉入根際微生物答案：B解析：種植轉基因作物應防止對別的植物產生基因污染，所以與傳統農業種植區隔離，A正確；動物取食轉基因作

3、物后，要經過消化吸收才進入身體，目的基因不可能直接進入動物細胞，B錯；轉基因植物可能與野生植物發生雜交而出現基因交流，影響野生植物的多樣性，C正確；目的基因被微生物攝入細胞內后，可能進入這些微生物中，D正確。非選擇題1. （2012全國新課標T40， 分）根據基因工程的有關知識，回答下列問題：（）限制性內切酶切割分子后產生的片段，其末端類型有和。（）投料運載體用EcoR切割后產生的片段如下：為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoR切割外，還可用另一種限制性內切酶切割，該酶必須具有的特點是。（）按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即DNA連接酶和DNA連接酶。

4、（）反轉錄作用的模板是，產物是。若要在體外獲得大量反轉錄產物，常采用技術。（）基因工程中除質粒外，和也可作為運載體。（）若用重組質粒轉化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，原因是。答案：（1）黏性末端 平末端1. 能識別EcoR I 識別的核苷酸序列，并且斷開與EcoR I 斷開相同的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵2. E·coli T43. RNA DNA PCR4. 噬菌體的衍生物 動植物病毒等需要用Ca2+處理，使大腸桿菌處于感受態才能吸收周圍環境中的DN解析：1）當限制酶在它識別序列的中心軸線兩側將DNA的兩條鏈分別切開時，產生的是黏性末端，而當限制酶在

5、它識別序列的中心軸線處切開時，產生的則是平末端。（2） 為使運載體與目的基因相連，不同的限制酶應切割出相同的黏性末端，它們必須要能識別相同的核苷酸序列，并且使每條鏈中相同的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。（3） DNA連接酶，根據酶的來源不同，可以將這些酶分為兩類：一類是從大腸桿菌中分離得到的，稱為E·coli DNA連接酶；另一類是從T4噬菌體中分離出來的，稱為T4DNA連接酶。（4） 反轉錄是以RNA為模版來合成DNA的過程。可以在體外短時間內大量擴增DNA的技術叫PCR（多聚酶鏈式反應）（5） 基因工程中除質粒外，還有噬菌體的衍生物、動植物病毒等。（6） 大腸桿菌細胞外有細胞壁

6、和細胞膜，能阻止其他物質的進入，只能通過Ca2+處理細胞，使細胞處于能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態，這種細胞稱為感受態細胞。2. （2012福建T32，10分）現代生物科技專題肺細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發肺癌。研究人員利用基因工程技術將let-7基因導入肺癌細胞實驗表達，發現肺癌細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術基本流程如圖。請回答：（）進行過程時，需用酶切開載體以插入let-7基因。載體應用RNA聚合酶識別和結合的部位，以驅動let-7基因轉錄，該部位稱為。（）進行過程時，需用酶處理貼附在培養皿壁上的細胞，以利于傳代培養。（）研究發現，let-7基因能

7、影響RAS的表達，其影響機理如圖。據圖分析，可從細胞提取進行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉錄。肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由于細胞中（RASmRNA/RAS蛋白）含量減少引起的。答案：（1）限制性核酸內切酶（或限制） 啟動子（2）胰蛋白（3）RNA RAS蛋白解析：（1）過程表示基因表達載體的構建，在該過程中需要用限制酶對載體進行切割以便于目的基因的插入（限制性核酸內切酶，簡稱限制酶，寫其他的不得分）；啟動子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶結合和識別的位點，RNA聚合酶結合到該位點，可驅動轉錄過程。（2）過程表示動物細胞培養，培養過程中出現接觸抑制后可以用胰蛋白酶處理，使之分散

8、成單個的細胞，之后分裝到其他培養瓶里面進行傳代培養。（3）判斷目的基因是否在受體細胞中轉錄，可用分子雜交技術來進行，從細胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標記的目的基因單鏈DNA片段進行雜交。根據題中信息“肺組織細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達就增強，引發肺癌”導入let7基因后，肺癌細胞受到抑制，說明RAS基因表達減弱，導致細胞中的RAS蛋白質含量減少進而導致癌細胞受抑制。3. （2012江蘇T32.9分）圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度(bp即堿基對)和部分堿基序列,圖2表示一種質粒的結構和部分堿基序列。 現有Msp玉、BamH玉、Mbo玉、Sma玉4種限制性核

9、酸內切酶,它們識別的堿基序列和酶切位點分別為C請回答下列問題: (1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由連接。(2)若用限制酶Sma玉完全切割圖1中DNA片段,產生的末端是末端,其產物長度為 。(3)若圖1中虛線方框內的堿基對被T-A堿基對替換,那么基因D就突變為基因d。 從雜合子中分離出圖1及其對應的DNA片段,用限制酶Sma玉完全切割,產物中共有種不同長度的DNA片段。(4)若將圖2中質粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行連接,形成重組質粒,那么應選用的限制酶是 。 在導入重組質粒后,為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌, 一般需要用添加 的培養基進行培養。經檢測,部分含有重組質粒

10、的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達,其最可能的原因是 。答案：(1)脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖 (2) 平 537 bp、790 bp、661 bp (3)4 (4)BamH抗生素 B同種限制酶切割形成的末端相同,部分目的基因 D 與質粒反向連接解析：(1)DNA的基本單位是脫氧核苷酸，每個脫氧核苷酸又是由一分子的脫氧核糖，一分子含氮堿基和一分子磷酸組成，其中脫氧核糖和磷酸交替連接構成DNA分子的基本骨架。-C C CG G G-G G G C C C-(2) 每種限制酶只能識別特定的核苷酸序列，并在特定的堿基之間切割磷酸二酯鍵，酶識別的切割位點是CCCGGG，而該DNA分子的此序列為：因此

11、產生的末端為平末端。在目的基因的796 bp的片段中后三對被切斷，卸下6個堿基，因此產物長度變為537 bp、790 bp（796 3）、661 bp（658+3）。(3)從圖一中可知，正常時目的基因中有兩個限制酶Sma的識別序列，完全切割后可產生三個大小不一的片段（537 bp、790 bp、661 bp），突變后的d所在的DNA分子只有一個切割位點，可產生二段（1327 bp和661 bp），因此雜合子被切割后有種長度不同的DNA分子片段。 (4)一種類限制性核酸內切酶只能識別一種特定的核苷酸序列，并在特定的切點切割DNA分子。在題干中的四種內切酶中只有酶BamH能識別GATC序列?？股?/p>

12、抗性基因屬于標記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。導致外源基因不能正常表達的重要因素叫基因沉默。重復序列或同源序列是基因沉默的普遍原因之一，在構建表達載體時，同種限制酶切割形成的末端相同,部分目的基因 D 與質粒反向連接就會致使目的基因不能正常表達。評析：本題重點考查轉基因技術的相關知識，需特別注意基因工程的步驟、DNA的復制、基因工程操作工具等知識。本題需特別注意圖示過程，從中獲取有效信息，然后結合教材知識，即可正確解答。4. （2012上海T(六)，10分）回答下列有關遺傳信息傳遞和表達的問題。55如圖18所示，若用兩種識別切割序列完全不同的限制酶E和F從基因組DNA上切下目的基因，并將之取

13、代質粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000對堿基)上相應的EF區域 (0.2kb)，那么所形成的重組質粒pZHZ2_。A既能被E也能被F切開 B能被E但不能被F切開C既不能被E也不能被F切開 D能被F但不能被E切開56已知在質粒pZHZl中，限制酶G切割位點距限制酶E切割位點08kb，限制酶H切割位點距限制酶F切割位點O5kb。若分別用限制酶G和H酶切兩份重組質粒pZHZ2樣 品，據表4所列酶切結果判斷目的基因的大小為kb；并將目的基因內部的限制酶G和H切割位點標注在圖19中。57若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達產物，則需將重組質粒pZHZ2導入至山羊的_細胞中。若pZHZ2進入細

14、胞后插入在一條染色體DNA上，那么獲得轉基因純合子山羊的方式是_。58上述目的基因模板鏈中的。TGA序列對應一個密碼子，翻譯時識別該密碼子的tRNA上相應的堿基序列是_。一般而言，一個核糖體可同時容納_分子的tRNA。59下列四幅圖中能正確反映目的基因轉錄產物內部結構的是_。TSS：轉錄起始位點，TTS：轉錄終止位點，STC：起始密碼子，SPC：終止密碼子答案：55.A56.1.2 見右圖57.受精卵 轉基因山羊間相互交配58.UGA 2（或3）59.B解析：55.用限制酶從基因組DNA上切下目的基因，并取代質粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000對堿基)上相應的EF區域 (0.2kb)，

15、用DNA連接酶連接后形成重組質粒，則在重組質粒中仍然含有限制酶E和限制酶F的切割位點，形成的重組質粒pZHZ2既能被E也能被F切開，故本題選A。56. 根據題中信息，原來質粒長度為3.7kb切去EF之間的還有3.5kb，插入目的基因后構成重組質粒，重組質粒長度為1.6+3.1=1.2+3.5=4.7kb，可推導出目的基因長度為1.2kb。重組質粒中G的切割位點距E的切割位點0.8kb，單獨用限制酶G切割后產生1.6kb和3.1kb的兩種片段，說明在重組質粒中除了圖中標示出來的G酶識別位點外，還有一個G酶識別位點；H的酶切位點距F0.5kb，用H單獨酶切產生1.2kb和3.5kb兩種片段，說明在

16、重組質粒中含有另外一個H的酶切位點，根據題中信息提示“將目的基因內部的限制酶G和H的識別位點標注在圖19中”，可確定在EF之間分別含有G和H的一個識別位點?？蓴喽℅的識別位點，在舉例E點右側0.8kb處，H的識別位點在距F左側0.7kb處。57.將目的基因導入動物細胞中，通常以受精卵作為受體細胞，當受精卵發育成山羊后，在雌性山羊的乳汁中可以提取到目的基因的表達產物。重組質粒插入在一條染色體DNA上，可通過雌雄轉基因山羊雜交的方法來獲取轉基因純合子山羊。58.目的基因的模板連中堿基為TGA，則mRNA中對應的密碼子為ACU，tRNA中的反密碼子為UGA，在翻譯的過程中，一個核糖體一般可以容納兩個

17、tRNA攜帶氨基酸進入核糖體與mRNA進行互補配對，使得兩個氨基酸之間脫水縮合形成肽鍵，最多不會超過3個。59.基因轉錄產物為mRNA，作為基因開始轉錄形成的在mRNA上的轉錄起始位點和終止位點應在mRNA兩端；作為起始密碼子應在轉錄起始位點之后，終止密碼子應在轉錄終止位點之前，這樣才能保證翻譯的正常開始和終止。5. （2012山東T35，8分）毛角蛋白型中間絲（KIF）基因與絨山羊的羊絨質量密切相關。獲得轉KIF基因的高絨質絨山羊的簡單流程如圖。導入目的基因的細胞重組表達載體KIF基因轉基因絨山羊代孕母羊早期胚胎成纖維細胞卵（母）細胞成年母絨山羊羊胎兒皮膚組織塊重組細胞（1）過程中最常用的運

18、載工具是_，所需要的酶是限制酶和_。（2）在過程中，用_處理將皮膚組織塊分散成單個成纖維細胞。在培養過程中，將成纖維細胞置于5CO2的氣體環境中，CO2的作用是_。（3）在過程中，用_處理以獲取更多的卵（母）細胞。成熟卵（母）細胞在核移植前需要進行_處理。（4）從重組細胞到早期胚胎過程中所用的胚胎工程技術是_。在胚胎移植前，通過_技術可獲得較多胚胎。答案:（1）質粒 DNA連接酶 （2）胰蛋白酶（或膠原蛋白酶） 維持培養基（液）的pH（3）促性腺激素（或促濾泡素、孕馬血清） 去核（4）（早期）胚胎培養 胚胎分割解析:本題以獲得轉KIF II基因的高絨質絨山羊的流程圖為情景，考查生物工程的基本操作，注重生物技術應用于生產的理念。考查的面廣，但以以識記的知識點應用分析為主。6. （2012海南T31，15分）已知甲種農作物因受到乙種昆蟲危害而減產，乙種昆蟲食用某種原核生物分泌的丙種蛋白質后死亡。因此，可將丙種蛋白質基因轉入到甲種農作物體內，使甲種農作物獲得抗乙種昆蟲危害的能力。回答下列問題：（1）為了獲得丙中蛋白質的基因，在已知丙種蛋白