1、真核與組（考綱未要求）考特約講師張蘊新DNA的生物考特約講師張蘊新大綱要求的酶。1.2.3.DNA的特征及DNA半保留的基本過程。逆轉錄的概念、逆轉錄酶、逆轉錄的過程。逆轉錄的意義。考特約講師張蘊新（一）DNA1.半保留概念：的基本特征：時雙鏈解開分別作為模板新2條DNA，一條來自親代，一條新。考特約講師張蘊新親代DNA子代DNA2001A-29若將1個完全被放射性標記的DNA放于無放射性中，無放射性標記的環境中標記的DNA三有幾個，所產生的全部DNAA. 1個B. 2個C4個D6個：第二代DNA考特約講師張蘊新經產生8個DNA，只有2個DNA分子各帶母代DNA的各一條鏈，其余6個為無放射標記

2、。解題公式：2的N次方-2。2雙向：時DNA從起始點向兩個方向解鏈，叉。形成兩個延伸相反的考特約講師張蘊新時DNA形成2個延伸方向相反的開鏈區，稱為叉。3535原核生物：環狀DNA；考特約講師張蘊新一個起始點真核生物：DNA有多個兩個起始點之間的DN起始點。段稱為的功能子(replicon)。子是完成。考特約講師張蘊新5353子真核生物多個起始點、子與叉考特約講師張蘊新3半不連續：前導鏈：順著解鏈方向生成的子鏈連續進行后隨鏈：鏈復方向與解鏈方向相反不能連續延長考特約講師張蘊新中的不連續片段稱為岡崎片段2006A-30、岡崎片段是指A.起始時，RNA聚合酶的片段段B. 兩個起始點之間的DNCDN

3、A半不連續時出現的DN段考特約講師張蘊新D. DNA連續EE.coli時出現的DN段起始點oriC的跨度為245bp片段：領頭鏈連續而隨從鏈不連續是DNA的半不連續性。隨從鏈上不連續的片段稱為岡崎片段。考特約講師張蘊新（二）DNA酶學的化學反應考特約講師張蘊新DNA 新鏈生成需引物和模板；新鏈的延長只可沿5¢ 3¢方向進行 。(dNMP)n + dNTP (dNMP)n+1 + PPi1.原核生物DNA聚合酶pol Ipol IIpol III+5¢®3¢聚合酶活性+3¢®5¢外切酶活性考特約講師張蘊新+琴琴5&#

4、162;®3¢外切酶活性校讀、修復、應急狀態修復催化DNA聚合切除引物填補空隙I：監督-糾錯、安排-填空、更改-切除II 二線：值班突況：應急III 住院醫：真正干活pol IV 跨損傷pol V跨損傷DNA聚合酶DNA聚合酶核酸外切酶活性考特約講師張蘊新DNA-pol功能：校讀，去除RNA引物，填補空隙，參與DNA損傷修復。3¢ ® 5¢外切酶活性：辨認錯配堿基并水解。5¢ ® 3¢外切酶活性：切除引物和突變DN段。ADNA聚合酶 IBDNA聚合酶 C二者都是D二者都不是考特約講師張蘊新2001B-123具有3琴

5、5外切酶及5琴3外切酶活性的是 A2001B-124在DNA中鏈延長上起重要作用的B2009X-158、下列有關DNA聚合酶III的敘述正確的有：A、在延長中起主要催化作用的酶B、5'-3'聚合酶活性C、3'-5'外切酶活性D、5'-3'外切酶活性考特約講師張蘊新DNA-pol N 端C 端木瓜蛋白酶考特約講師張蘊新小片段5¢ ® 3¢核酸外切酶活性大片段/Klenow 片段DNA聚合酶活性 3¢ ® 5¢ 核酸外切酶活性RNA聚合酶、逆轉錄酶無3¢ ® 5¢

6、; 外切酶活性，無校對功能錯誤率高Klenow片段是哪種DNA聚合酶的水解片段？A、DNA-pol IB、DNA-pol II C、DNA-pol IIID、DNA-pol 考特約講師張蘊新：木瓜蛋白酶將DNA-pol I水解成小片段和大片段，大片段即Klenow片段。2.真核生物DNA聚合酶DNA-pol 引物酶DNA-pol 低保真應急修復DNA-pol 線粒體DNA-pol 后隨鏈DNA-pol 前導鏈引導 "A=G"-保-射線類似豆芽，迅速生長考特約講師張蘊新所有的真核生物聚合酶都具有5'-3'外切酶活性。2007A-166真核細胞中主要的酶是A、D

7、NA-pol B、DNA-pol C、DNA-pol D、DNA-pol 考特約講師張蘊新真核細胞中參與校對、修復和填補空隙酶是A、DNA-pol B、DNA-pol C、DNA-pol D、DNA-pol 考特約講師張蘊新：本身有兩個缺口，當然要修復填補空隙。3.保真性的酶學依據（一）的保真性和堿基選擇：DNA聚合酶（二）DNA-pol的核酸外切酶活性：即時校讀、切除片段考特約講師張蘊新（一）解螺旋酶、引物酶和單鏈DNA結合蛋白4.原核生物起始的相關蛋白質蛋白質（）通用名功能辨認起始點DnaA(dnaA )DNA解開雙鏈DnaBDnaC(dnaB )解螺旋酶考特約講師張蘊新(dnaC)Dna

8、B運送和協同DnaG(dnaG)RNA引物酶催化引物生成SSB單鏈DNA穩定已解開的單鏈結合蛋白拓撲異構酶(gyrA, B)理順DNA鏈A是字母表的開頭，是起始點；B 掰開解螺旋酶；G（gou）引物酶；單鏈結合蛋白（single stranded binding protein , SSB) 具有結合單鏈DNA的能力。作用：Ø Ø維待模板的單鏈穩定狀態；免受細胞內廣泛存在的核酸酶的降解。考特約講師張蘊新A、DnaA蛋白B、DnaB蛋白C、DnaC蛋白D、DnaG蛋白考特約講師張蘊新2009B-131、具有辨認起始點功能的蛋白是 A2009B-132、具有解螺旋酶活性的蛋白是

9、B2008A-35下列引物作用的是起始相關蛋白質中，具有RNAA. DnaAB. DnaB CDnaCDDnaG考特約講師張蘊新DNA拓撲異構酶解開超螺旋切斷DNA一股鏈。反應不需ATP。考特約講師張蘊新切斷DNA兩股鏈，利用ATP供能。作用特點：既水解又連接磷酸二酯鍵2005X-133拓撲異構酶對DNA的作用有A. 解開DNA超螺旋B. 切斷單鏈DNAC. 結合單鏈DNAD. 連接磷酸二酯鍵考特約講師張蘊新：拓撲異構酶作用DNA過程中雙螺旋沿軸旋繞，造成DNA打結。拓撲異構酶可解開超螺旋，改變撲構象（A）。切斷DNA雙鏈中的一股使DNA解鏈旋轉，不致打結(B)。適時拓撲酶連接磷酸二酯健，封閉

10、切口。結合單鏈DNA的是單鏈DNA結合蛋白(SSB)。DNA連接酶：連接3¢-OH和5¢-P末端，生成磷酸二酯鍵。OP O-O-O工程重要工具酶，功能是接合缺口：考特約講師張蘊新ATPDNA連接酶1、不連續；AMP2、DNA修復、重組及剪接OOPO-O-HO過程中具有催化3，5磷酸二酯鍵生成的酶有A引物酶BDNA聚合酶C拓撲異構酶DDNA連接酶考特約講師張蘊新考特約講師張蘊新（三）原核生物DNA過程1、起始： 解鏈：拓撲異構酶:松弛超螺旋解螺旋酶:解開雙螺旋成為兩條單鏈考特約講師張蘊新單鏈DNA結合蛋白(single stranded DNA binding protein

11、,SSB)：中維持模板處于單鏈狀態并保護單鏈完整。引物和體：引物（primer）：引物酶催化短鏈的RNA引物酶依賴DNA的RNA聚合酶Ø考特約講師張蘊新Ø催化游離NTP聚合dnaG產物:DnaGØØDna B、 Dna C3¢Dna A5¢3¢考特約講師張蘊新DNA拓撲異構酶5¢SSB含有解螺旋酶、DnaC蛋白、引物酶和DNA起始區域的復合結構稱為體。2005A-32RNA引物在DNA過程中的作用是A. 提供起始模板B. 激活引物酶C提供D提供所需的5'-磷酸所需的3'-羥基考特約講師張蘊新：因DN

12、A聚合酶沒有有聚合dNTP的能力，引物酶先利用游離NTP，形成一段RNA引物，提供3'-OH 末端(為D)。2006X-135參與DNA起始的有ADna蛋白BSSBC解螺旋酶DRNA酶考特約講師張蘊新：RNA酶參與的是終止，而不是起始。總結：常見英文Okazaki fragment：岡崎片段SSB：單鏈結合蛋白 Helicase：解螺旋酶 DnaB rep蛋白Polymerase：聚合酶 Primase：引物酶 DnaGLigase：DNA連接酶考特約講師張蘊新2、延長DNA-pol III催化下dNTP以dNMP形式加入，生成磷酸二酯鍵。前導鏈：5¢ ® 3

13、62;后隨鏈：5¢ ® 3¢考特約講師張蘊新3、終止：原核生物是環狀DNA，雙向的片段在的終止點(ter)處匯合。考特約講師張蘊新oriE.coli8232ter5¢隨從鏈岡崎片段連接：去除RNA引物：DNA 5¢聚合酶IRNA酶填補空隙：DNA聚合酶I5¢結合缺口5¢OHP考特約講師張蘊新DNA-pol 5¢5¢PATPDNA連接酶ADP+Pi5¢5¢2003X-134、DNA過程中參與岡崎片段之間連接的酶有A、RNA酶B、DNA琴pol C、DnaA蛋白D、連接酶考特約講師張蘊新：

14、岡崎片段處理:RNA酶水解:去掉RNA引物并換成DNA，把DN段連接完整。RNA水解由RNA酶成;RNA水解后留下空隙由DNA-pol填補;DNA連接酶連接缺口。岡崎片段的處理所需酶為RNA酶、DNA-pol、DNA連接酶。考特約講師張蘊新（四）真核生物DNA過程1、的起始 真核生物性，即有多個起始點，是多子。有時序子以分組方式激活而不是同步起動。 增殖細胞核抗原(PCNA)在起始和延長中起關鍵作用。考特約講師張蘊新2000A-29下列關于真核生物DNA特點描述錯誤的是ARNA引物較小B岡崎片段較短C片段連接時由ATP供給能量考特約講師張蘊新D在E僅有一個中，DNA鏈的延長短度較慢起點：真核生

15、物的DNA段的長度小于原核生物。有許多特點。如RNA引物和岡崎片速度慢、僅為原核生物的1琶10。2、的延長引物和岡崎片段較原核短；組裝成核小體速度慢考特約講師張蘊新2011X-160.下列真核生物與原核生物特點的比較中正確的有A.真核生物的可能需要端粒酶參與B.真核生物的岡崎片段短于原核生物C.真核生物的起始點少于原核生物考特約講師張蘊新D.真核生物DNA聚合酶的催化速率低于原核生物真核DNA終止：1、岡崎片段連接2、端粒和端粒酶端粒（telomere）是指真核生物線性DNA末端的結構部分，通常膨大成粒狀。考特約講師張蘊新結構特點： 由末端DNA序列和蛋白質。 末端DNA序列是多次重復的富含G

16、、T堿基的短序列。TTTTGGGGTTTTGGGG考特約講師張蘊新功能：維持維持DNA穩定性完整性端粒酶(telomerase)Ø線性DNA完成后，末端由于引物RNA水解可能出現縮短。Ø需要在端粒酶的催化下，進行延長反應。考特約講師張蘊新端粒酶（RNA-蛋白質復合體）以RNA為模板通過逆轉錄過程對末端DNA鏈進行延長 端。粒酶特殊逆轉錄酶端粒酶RNA：提供DNA模板端粒酶協同蛋白端粒酶逆轉錄酶-蛋白質考特約講師張蘊新 老化與端粒酶活性下降有關； 腫瘤的發生與端粒酶活性有關；A. 核酶(ribozyme)B. 端粒酶C二者都是D二者都不是考特約講師張蘊新2000B-123一種

17、由RNA和蛋白質組成的酶是2000B-124屬于一種特殊的反轉錄酶的是BB：端粒酶是一種由RNA和蛋白質組成的酶。終止時DNA末端可縮短，通過端粒不依賴模板的可補償。端粒酶以其自身攜帶的RNA為模板特殊的逆轉錄酶（反轉錄酶）。互補鏈，故端粒酶可看作一種2004X-135.下列選項中含有RNA的酶有A. 核酶B. 端粒酶C. 逆轉錄酶D. RNase考特約講師張蘊新：含有RNA催化劑-核酶、端粒酶、snRNP。（五）逆轉錄和逆轉錄酶逆轉錄：逆轉錄酶催化下以RNA為模板DNA的過程。RNA模板考特約講師張蘊新逆轉錄酶雙鏈DNA2001A-31、下列有關反轉錄酶的敘述錯誤的是:A反轉錄酶以mRNA為模板，催化cDNA方向B催化的DNAC在催化DNA反應也是5'琴3'開始進行時不需要有引物考特約講師張蘊新D具有RNase活性E反轉錄酶無3'琴5'核酸外切酶活性，無校對功能：DNA的有引物。方向是'3'，在催化DNA開始時需要逆轉錄酶特點：ØRNA指導DNA聚合活性ØRNase H活性RNA 模板ØDNA指導DNA聚合活性逆轉錄酶考特約講師張蘊新DNA-RNA雜化雙鏈RNA酶單鏈DNA逆轉錄酶雙鏈DNA下列對于逆