1、第1單元 蛋白質（一）名詞解釋1兼性離子（zwitterion）； 2.等電點（isoelectric point,pI）； 3.構象(conformation）； 4.別構效應(allosteric effect）； 5.超二級結構(super-secondary structure）； 6.結構域（structural domain,domain）； 7. 蛋白質的三級結構（tertiary stracture of protein）； 8.Edman 降解法（Edman degradation）； 9.蛋白質的變性作用(denaturation of protein)； 10.Bohr

2、效應（Bohr effect）； 11.多克隆抗體（polyclonal antibody）和單克隆抗體（monochonal antibody）； 12.分子伴侶（molecular chaperone）； 13.鹽溶與鹽析(salting in and salting out）。 （二）填充題1.氨基酸在等電點時，主要以_離子形式存在，在pHpI的溶液中，大部分以_離子形式存在，在pHpI的溶液中，大部分以_離子形式存在。2.組氨酸的pK1(-COOH)值是1.82，pK2 (咪唑基)值是6.00， pK3(-NH3+)值是9.17，它的等電點是_。3.Asp的pK1=2.09，pK2=

3、3.86，pK3=9，82，其pI等于_。4.在近紫外區能吸收紫外光的氨基酸有_、_和_。其中_的摩爾吸光系數最大。5 .蛋白質分子中氮的平均含量為_，故樣品中的蛋白質含量常以所測氮量乘以_即是。6.實驗室常用的甲醛滴定是利用氨基酸的氨基與中性甲醛反應，然后用堿(NaOH)來滴定_上放出的_。7.除半胱氨酸和胱氨酸外，含硫的氨基酸還有_，除蘇氨酸和酪氨酸外，含羥基的氨基酸還有_，在蛋白質中常見的20種氨基酸中，_是一種亞氨基酸，_不含不對稱碳原子。8.蛋白質的氨基酸殘基是由_鍵連接成鏈狀結構的，其氨基酸殘基的_稱蛋白質的一級結構。9.-折疊片結構的維持主要依靠兩條肽鍵之間的肽鍵形成_來維持。1

4、0.在 螺旋中C=O和NH之間形成的氫鍵與_基本平行，每圈螺旋包含_個氨基酸殘基，高度為_，每個氨基酸殘基使螺旋軸上升_，并沿軸旋轉_度。11.蛋白質顆粒在電場中移動的速率主要取決于_的大小和_量的多少。12.用凝膠過濾法分離蛋白質，相對分子質量較小的蛋白質在柱中滯留的時間較_，因此最先流出凝膠柱的蛋白質，其相對分子質量最_。13.血紅蛋白的輔基是_，當其中的1個亞基與氧結合后，其余亞基與氧的親合力_，這種現象稱_，當CO2或H+濃度增高時，血紅蛋白與氧的親合力_，這種現象稱_。14蛋白質變性時空間結構_，而一級結構_，變性后，蛋白質的溶解度一般會_，生物學功能_。15.穩定蛋白質膠體溶液的因

5、素是_和_。16.凝集素是一類能與_相互作用的蛋白質。17.免疫球蛋白G（IgG）含有_條重鏈，_條輕鏈，通過_鍵聯接成Y形結構，每一分子含有_個抗原結合部位。18.球狀蛋白質形成空間結構時，肽鏈的熵_，而環境中水的熵_。19 .一般說來，球狀蛋白質在其分子內部含有_性氨基酸殘基，而在分子外表面含_性氨基酸殘基。20.胰蛋白酶專一性地切斷_和_的羧基端肽鍵。（三）選擇題（在備選答案中選出1個或多個正確答案）1.下列蛋白質組分中，哪一種在280nm具有最大的光吸收？A. 色氨酸的吲哚環 B. 酪氨酸的酚環 C. 苯丙氨酸的苯環D. 半胱氨酸的硫原子 E. 肽鍵2.關于氨基酸的敘述哪一項是錯誤的？

6、A. 酪氨酸和絲氨酸含羥基 B.酪氨酸和苯丙氨酸含苯環C. 亮氨酸和纈氨酸是支鏈氨基酸 D.賴氨酸和精氨酸是堿性氨基酸 E. 谷氨酸和天冬氨酸含兩個氨基3.在pH7時，其R基帶有電荷的氨基酸是A. 纈氨酸 B. 甘氨酸 C. 半胱氨酸 D. 酪氨酸 E. 賴氨酸4.每個蛋白質分子必定具有的結構是什么A. -螺旋 B. -折疊 C. 三級結構 D. 四級結構5.下列哪一種氨基酸側鏈基團的pKa值最接近于生理pH值？A. 半胱氨酸 B. 谷氨酸 C. 谷氨酰胺 D. 組氨酸 E. 賴氨酸6. Arg的pK1=2.17，pK2=9.04， pK3=12.48 其pI等于A .5.613 B. 7.3

7、32 C 7.903 D. 10.767.關于蛋白質中L-氨基酸之間形成的肽鍵，下列哪些敘述是正確的A. 具有部分雙鍵的性質 B. 比通常的C-N單鍵短 C. 通常有一個反式構型 D. 能自由旋轉8.典型的 螺旋是A. 2.610 B. 310 C. 3.613 D. 4.015 E. 4.4169.維持蛋白質分子中的螺旋主要靠A. 鹽鍵 B. 范德華鍵 C. 共價鍵 D. 氫鍵10.維系蛋白質三級結構穩定的最重要的鍵或作用力是A鹽鍵 B二硫鍵 C氫鍵 D疏水作用力 E范德華力11.血紅蛋白質的氧合曲線是A.雙曲線 B.拋物線 C. S形曲線 D.直線 E.鐘罩形12.維持蛋白質二級結構的主要

8、化學鍵是A.肽鍵 B.二硫鍵 C.氫鍵 D.疏水鍵13.存在于蛋白質分子中的下列作用力，哪項不是次級鍵 A .氫鍵 B.肽鍵 C.鹽鍵 D.疏水鍵 E.二硫鍵14.關于蛋白質三級結構的描述錯誤的是A.有三級結構的蛋白質均有酶活性 B.球蛋白均有三級結構C.三級結構的穩定性由多種次級鍵維系 D.親水基團多分布在三級結構的表面E.決定盤曲折疊的因素是氨基酸序列15.某蛋白質的等電點為7.5，在pH6.0的條件下進行電泳，它的泳動方向是A.在原點不動 B.向正極移動 C.向負極移動 D.無法預測. 16.用凝膠過濾層析柱分離蛋白質時，下列哪項是正確的A.分子體積最大的蛋白質最先洗脫下來 B.分子體積

9、最小的蛋白質最先洗脫下來C.不帶電荷的蛋白質最先洗脫來來 D.帶電荷的蛋白質最先洗脫來來E.沒有被吸附的蛋白質最先洗脫下來17.有一蛋白質水解產物在pH6用陽離子交換柱層析時，第一個被洗脫下來的氨基酸是A. Val（pI為5.96） B. Lys（pI為9.74） C. Asp（pI為2.77） D. Arg （pI為10.76）18.為獲得不變性的蛋白質，常用的方法有A.用三氯醋酸沉淀 B.用苦味酸沉淀 C.用重金屬鹽沉淀 D.低溫鹽析 E.常溫醇沉淀19.用6mol/L HCl水解某種蛋白質時能檢出的氨基酸種類是A. 20種 B. 19種 C. 18種 D. 17種或更少20.SDS凝膠電

10、泳分離蛋白質是根據各種蛋白質A.pI的差異 B.分子大小的差異 C.分子極性的差異 D.溶解度的差異 E.以上說法都不對21.血紅蛋白的氧合曲線向右移動是由于A.O2分壓降低 B.CO2分壓降低 C.CO2分壓增高 D.N2分壓增高 E.pH值降低22.如果要測定一個小肽的氨基酸順序，下列試劑中你認為最合適使用哪一個 A .茚三酮 B.CNBr C.胰蛋白酶 D.異硫氰酸苯酯23.下列有關血紅蛋白運輸氧的敘述哪些是正確的？A.四個血紅素基各自獨立地與氧結合，彼此之間并無聯系B.以血紅蛋白結合氧的百分數對氧分壓作圖，曲線呈S形C.氧與血紅蛋白的結合能力比一氧化碳弱 D.氧與血紅蛋白的結合并不引起

11、血紅素中鐵離子價數的變化24.關于蛋白質變性的敘述哪些是正確的？A.蛋白質變性是由于特定的肽鍵斷裂 B.是由于非共價鍵破裂引起的C.用透析法除去尿素有時可以使變性蛋白質復性 D.變性的蛋白質一定會沉淀25.一個生物樣品的含氮量為5%，它的蛋白質含量為A .12.50% B. 16.00% C. 38.00% D. 31.25%（四）判斷題1.氨基酸為氨基取代的羧酸，可直接用酸堿滴定法進行定量測定。2.當溶液的pH等于某一可解離基團的pKa時，該基團一半被解離。3.在pH很高或很低的溶液中，氨基酸主要以非離子化形式出現。4.肽鏈的主鏈有1/3化學鍵不能旋轉。5.溴化氰可以斷裂甲硫氨酸的氨基參與形

12、成的肽鏈。6.體內合成肽鏈的方向是從N端向C端，而在體外用固相化學合成法合成多肽時，通常是從C端向N端合成。7.核磁共振研究蛋白質三維結構的主要優勢是可以研究溶液中的蛋白質三維結構，并能提供有關的動態信息。8.在水溶液中，蛋白質折疊形成疏水核心，會使水的熵增加。9.原子之間的距離越小，范德華引力越強。10.在-螺旋中，每3.6個氨基酸繞一圈，并形成1個氫鍵。11.膠原蛋白的原膠原分子是3股右手螺旋扭曲成的左手螺旋。12.球蛋白的三維折疊多采取親水側基在外，疏水側基藏于分子內部的結構模式。13.胎兒血紅蛋白與2，3-二磷酸甘油（2,3DPG）的結合力較弱。14.血紅蛋白與氧的結合能力隨pH降低而

13、增高。15.由于一級結構可以決定空間結構，基因工程表達的肽鏈一定可以自然地形成天然構象。16.測定別構酶的相對分子質量可以用SDS-PAGE。17.當溶液的pH小于某蛋白質的pI時，該蛋白質在電場中向陽極移動。18.用凝膠過濾分離蛋白質，小分子蛋白由于所受的阻力小首先被洗脫出來。19.若蛋白質與陰離子交換劑結合較牢，可用增加NaCI濃度或降低pH的方法將其從層析柱洗脫出來。20.糖蛋白的N-糖肽鍵是指與天冬酰胺的-酰胺N原子與寡糖鏈形成糖苷鏈。23.糖蛋白的O-糖肽鍵是指氨基酸殘基的羧基O原子與寡糖鏈形成的糖苷鍵。（五）分析和計算題1.判斷氨基酸所帶的凈電荷，用pI-pH比pH-pI更好，為什

14、么？2.分別計算谷氨酸、精氨酸和丙氨酸的等電點。3.在下面指出的pH條件下，下列蛋白質在電場中向哪個方向移動？A表示向陽極，B表示向陰極，C表示不移動。人血清蛋白：pH5.5，pH3.5；血紅蛋白：pH7.07，pH9.0；胸腺組蛋白：pH5.0，pH8.0，pH11.5；已知：人血清蛋白的pI=4.64 血紅蛋白的pI=7.07 胸腺組蛋白的pI=10.8。4.簡述蛋白質溶液的穩定因素，和實驗室沉淀蛋白質的常用方法。5.簡要敘述蛋白質形成寡聚體的生物學意義。6.在體外，用下列方法處理，對血紅蛋白與氧的親和力有何影響？（1）pH值從7.0增加到7.4；(2) CO2分壓從1000 Pa增加到4

15、 000 Pa；(3) O2分壓從6000 Pa下降到2000 Pa； (4)2,3-二磷酸甘油酸的濃度從8×10-4mol/L下降到2×10-4ol/L；（5）22解聚成單個亞基。7.胎兒血紅蛋白（Hb F）在相當于成年人血紅蛋白（Hb A） 鏈143殘基位置含有Ser，而成年人 鏈的這個位置是具陽離子的His殘基。殘基143面向 亞基之間的中央空隙。（1）為什么2，3-二磷酸甘油酸（2，3-BPG）同脫氧Hb A的結合比同脫氧Hb F更牢固？（2）Hb F對2，3-BPG低親和力如何影響到Hb F對氧的親和力？這種差別對于氧從母體血液向胎兒血液的運輸有何意義。8.試述蛋

16、白質二級結構的三種基本類型。9.蛋白質變性后，其性質有哪些變化？ 10.為什么大多數球狀蛋白質在溶液中具有下列性質。（1）在低pH值時沉淀。（2）當離子強度從零逐漸增加時，其溶解度開始增加，然后下降，最后出現沉淀。（3）在一定的離子強度下，達到等電點pH值時，表現出最小的溶解度。（4）加熱時沉淀。（5）加入一種可和水混溶的非極性溶劑減小其介質的介電常數，導致溶解度的減小。（6）如果加入一種非極性強的溶劑。使介電常數大大地下降會導致變性。11.凝膠過濾和SDS-PAGE均是利用凝膠，按照分子大小分離蛋白質的，為什么凝膠過濾時，蛋白質分子越小，洗脫速度越慢，而在SDS-PAGE中，蛋白質分子越小，

17、遷移速度越快？12.已知牛血清白蛋白含色氨酸0.58%（按質量計），色氨酸相對分子質量為204。（1）計算牛血清白蛋白的最低相對分子質量（2）用凝膠過濾測得牛血清白蛋白相對分子質量大約為7萬，問牛血清白蛋白分子中含幾個色氨酸殘基？參考答案（一）名詞解釋1氨基酸、蛋白質等分子既含有酸性基團，又含有堿性基團，在中性pH的水溶液中，羧基等酸性基團脫去質子帶負電荷，氨基等堿性基團結合質子帶正電荷，這種既有帶負電荷基團，又有帶正電荷基團的離子稱兼性離子或兩性離子，亦稱偶極離子（dipolar ion）2.調節兩性離子（氨基酸、蛋白質等）溶液的pH，使該兩性離子所帶的凈電荷為零，在電場中既不向正極，也不向

18、負極移動，此時，溶液的pH稱該兩性離子的等電點（pI）。不同結構的兩性離子有不同的pI值。3.構象是指具有相同結構式和相同構型的分子在空間里可能的多種形態，構象形態間的改變不涉及共價鍵的破裂。一個給定的蛋白質理論上可采取多種構象，但在生理條件下，只有一種或很少幾種在能量上是有利的。4.多亞基蛋白質一般具有多個配體結合部位，結合在蛋白質分子的特定部位上的配體對該分子的其它部位所產生的影響(如改變親和力或催化能力)稱為別構效應。別構效應可分為同促效應和異促效應。5.在蛋白質中，特別是球狀蛋白質中，經常可以看到由若干相鄰的二級結構單遠組合在一起，彼此相互作用，形成有規則、在空間上能辯認的二級結構組合

19、體，充當三級結構的構件，稱為超二級結構。稱為超二級結構在結構的組織層次上高于二級結構，但沒有構成完整的結構域。常見的超二級結構有 ， ，Rossman折疊， -發夾， -曲折，希臘花式拓撲結構（Greek key topology）等。6.蛋白質的三級結構常可區分成1個和數個球狀區域，折疊得較為緊密，各行其功能，稱為結構域。7.蛋白質的三級結構指肽鏈在二級結構，超二級結構，結構域（對分子較大，由多個結構域的蛋白質而言）基礎上形成的完整空間結構，一個三級結構單位通常由一條肽鏈組成，但也有一些三級結構單位是由經二硫鍵連接的多條肽鏈組成的，如胰島素就是由兩條肽鏈折疊成的1個三級結構單位。8.為肽鏈氨

20、基酸測序的方法。異硫氰酸苯脂與肽段氨基末端的游離 -氨基作用，再用冷稀酸處理，氨基末端殘基從肽鏈上脫落下來，成為異硫氰酸苯酯的衍生物，用層析的方法可鑒定為何種氨基酸的衍生物。殘留的肽鏈可繼續與異硫氰酸苯酯作用，逐個鑒定出氨基酸的排列順序。9.天然蛋白質因受物理的或化學的因素影響，其分子內部原有的高度規律性結構發生變化，致使蛋白質的理化性質和生物學性質都有所改變，但并不導致蛋白質一級結構的破壞，這種現象稱變性作用。10.H+和CO2濃度增加，會降低氧和血紅蛋白的親和力，使得血紅蛋白的氧合曲線向右移動，提高了O2從血紅蛋白的釋放量，這種作用稱作Bohy效應。11.多克隆抗體是識別一個抗原的不同抗原

21、決定簇的多種抗體的混合物。單克隆抗體由同一個B細胞克隆合成并分泌，是一種均一的抗體，識別同一個抗原決定簇。12.是一個協助新合成的多肽鏈正確折疊和轉運的蛋白質家族。它們能夠阻止部分肽段的錯誤折疊，抑制新生肽鏈的不恰當聚集，排除與其他蛋白質的不合理結合，協助多肽鏈的正確折疊和跨膜轉運，協助寡聚蛋白的組裝。 13.低濃度的中性鹽可以增加蛋白質的溶解度，這種現象稱為鹽溶。鹽溶作用主要是由于蛋白質分子吸附某種鹽類離子后，帶電層使蛋白質分子彼此排斥，而蛋白質分子與水分子間的相互作用卻加強，因而溶解度增高。當離子強度增加到足夠高時，很多蛋白質可以從水溶液中沉淀出來，這種現象稱為鹽析。鹽析作用主要是由于大量

22、中性鹽的加入使水的活度降低，原來溶液中的大部分甚至全部的自由水轉變為鹽離子的結合水。鹽析法沉淀出來的蛋白質一般不變性，且不同的蛋白質可以用不同濃度的鹽沉淀出來，稱作分段鹽析。鹽析法是對蛋白質進行粗分離的常用方法。（二）填充題1.兩性，負，正； 2. 7.59； 3. 2.97； 4.苯丙氨酸，酪氨酸，色氨酸，色氨酸； 5. 16%，6.25； 6. ，H+； 7. 甲硫氨酸，絲氨酸，脯氨酸，甘氨酸； 8. 肽，排列順序； 9. 氫鍵； 10. 螺旋軸，3.6，0.54，0.15，100； 11. 分子，凈電荷； 12.長，大； 13. 血紅素，增加，正協同效應，下降，Bohr效應； 14. 破

23、壞，不變，下降，喪失； 15. 水化層，雙電層；16. 糖基；17. 2，2，二硫，2； 18.減少，增加； 19.疏水，親水； 20. 賴氨酸，精氨酸；（三）選擇題1.（A）色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸在280nm的摩爾消光系數分別為5 500，540，120，顯然色氨酸的光吸收最大。由于大多數蛋白質中含酪氨酸的量比色氨酸多，蛋白質在280nm處的光吸收主要來源于酪氨酸。肽鍵在215nm處具有最大的光吸收，胱氨酸中的二硫鍵在240nm處只有微弱的光吸收。半胱氨酸中的硫原子在這一波長范圍內無明顯光吸收。2.（E）谷氨酸和天冬氨酸含有兩個羧基，而不是含有兩個氨基。其它選項的敘述均是正確的。3.（E）

24、在pH7時，賴氨酸的R基上的 帶有正電荷，纈氨酸和甘氨酸的R基不含可解離的基團，半胱氨酸的-SH和酪氨酸的-OH在pH7時不可能解離，因而不會帶電荷。4.（C） -螺旋是蛋白質常見的、最典型的一種結構元件。而絲心蛋白沒有-螺旋結構。羊毛、豬毛、鳥毛等蛋白質幾乎全是-螺旋結構，不存在-折疊。不少蛋白質沒有四級結構，但所有的蛋白質都具有三級結構。5.（D）組氨酸咪唑基的 為6.0，最接近于生理pH值。6.（D）Arg是堿性氨基酸，其等電點pI=1/2（pK2+ pK3） =1/2（9.02+12.48）7.（A，B，C）肽鍵的部分雙鍵性質防止了肽鍵的自由旋轉。肽鍵通常有反式構型，并且比C-N單鍵短

25、。8.（C）典型的 螺旋是3.613。表示每圈螺旋包含3.6個氨基酸殘基，氫鍵所封閉的環有13個原子。9.（D）螺旋的構象是相當穩定的，這是因為所有氨基酸殘基軍參與了鏈內氫鍵的形成。10.（D）維持蛋白質三級結構最主要的作用力是疏水作用力，二硫鍵是一種很強的共價鍵，但蛋白質形成特定的空間結構，最主要的作用力是氨基酸殘基側鏈的疏水相互作用。11.（C）血紅蛋白與氧的結合有正協同效應，所以氧合曲線呈S形。12.（C）蛋白質的二級結構如 螺旋， 折疊， 轉角等均是由氫鍵維持的。13. (B，E) 肽鍵和二硫鍵屬于共價鍵，氫鍵、鹽鍵、疏水鍵、范德華力屬于次級鍵。14.（A）有些有三級結構的蛋白質沒有催

26、化功能。15.（C）在pH6.0的條件下，pI為7.5的蛋白質帶正電荷，向負極移動。16.（A）凝膠過濾時，分子體積最大的蛋白質最先被洗脫，蛋白質的帶電狀況和吸附作用對洗脫速度影響不大。17.（C) 氨基酸與陽離子交換樹脂作用力的大小次序是堿性氨基酸>中性氨基酸>酸性氨基酸。溶液的pH高于等電點時氨基酸帶正電，低于等電點時氨基酸帶負電。選項中Arg （pI為10.76）所帶正電荷最多，與交換樹脂親和力最強，后被洗脫。A sp（pI為2.77）所帶負電荷最多，與交換樹脂親和力最弱，先被洗脫。18.（D）低溫鹽折沉淀的蛋白質不會變性，題中列出的其它方法沉淀的蛋白質均會變性。19. (D

27、) 用6mol/L HCl水解蛋白質時，色氨酸完全破壞，天冬酰胺被水解成天冬氨酸，谷氨酰胺被水解成谷氨酸，絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸遭到部分破壞。20.（B）SDS使蛋白質解離成亞基，并結合大量的SDS，從而使蛋白質分子帶有足夠的負電荷，消除了蛋白質分子原有的電荷差異，所以電泳速度只取決于蛋白質分子的大小。21.（C，E）曲線向右移動表明血紅蛋白結合氧的能力降低，降低pH值或增加CO2的分壓均會導致血紅蛋白與氧親和力的下降，促使氧合血紅蛋白釋放氧，這就是所謂的波耳（Bohr）效應。22. (D) 茚三酮反應可以鑒定并定量測定各種氨基酸， CNBr只斷裂由甲硫氨酸殘基的羧基參加形成的肽鏈，胰蛋白酶是

28、蛋白水解酶，只斷裂賴氨酸或精氨酸殘基的羧基參與形成的肽鍵，多肽或蛋白質的末端氨基能與異硫氰酸苯酯反應，生成PTC-多肽或蛋白質。此方法可以用來測定氨基酸序列。23.（B，C，D）由于分子中四個氧結合位的協同作用使其飽和曲線呈S形。氧與血紅蛋白結合并不引起亞鐵離子價數的變化。一氧化碳和氰化物與血紅蛋白的親和力比氧大。24.（B，C）蛋白質變性是由于次級鏈破裂引起空間結構破壞，但一級結構保持完整，用透析法除去尿素有時可以使變性蛋白質復性，稀溶液中的蛋白質用弱酸、弱堿等變性后，有時可以不沉淀。25. (D) 各種蛋白質含氮量的平均值是16%。因此含氮量為5%，它的蛋白質含量為56.25=31.25%

29、（四）判斷題1.錯。不能用酸堿滴定法直接進行滴定，只能用甲醛滴定法滴定氨基。2.對4.對。在多肽鏈的主鏈中1/3為不能旋轉的肽鍵。5.錯。溴化氰專一性地斷裂甲硫氨酸的羧基參與形成的肽鍵。6.對。7.對。8.對。9.錯。原子間的距離小于兩個原子的范德華半徑之和會產生范德華斥力。10.錯。 -螺旋每3.6個氨基酸繞一圈，但除螺旋一端的4個-N-H和另一端的4個-C=0不參與形成氫鍵外，其余的-N-H和-C=0均參與氫鍵的形成。11.錯。原膠原分子是由3股左手螺旋扭曲成的右手螺旋。12.對。13.對。胎兒血紅蛋白與2，3-DPG的結合力弱，因而與氧的結合力強，有利于胎兒從母體血液獲取氧。14.錯。隨

30、著pH的降低，血紅蛋白與氧的結合力降低，這有利于血紅蛋白在CO2含量較高的組織釋放氧。15.錯。真核生物的蛋白質折疊常有分子伴侶參與，所以，用原核生物表達的真核蛋白質不一定能自然地形成天然構象。另外，基因工程表達的蛋白質有時會形成包含體，需要先分離包含體，裂解包含體后，再使蛋白質復性，才能形成天然構象。16.錯。別構酶一般由多個亞基構成，SDS-PAGE只能測定亞基的相對分子質量。17.錯。當溶液的pH小于某蛋白質的pI時，該蛋白質帶凈正電荷，向陰極移動。18.錯。用凝膠過濾法分離蛋白質時，相對分子質量大的蛋白質先流出層析柱。19.對。20.對。21.錯。O-糖肽鍵是指氨基酸殘基的羥基O原子與

31、寡糖鏈形成的糖苷鍵。（五）分析和計算題1.當一種氨基酸的凈電荷用q=pI-pH表達時，若q為正值，則該氨基酸帶正電荷；若q為負值，則該氨基酸帶負電荷。q值的正與負和該氨基酸所帶電荷的種類是一致的。如果采用q=pH-pI來表達，則會出現相反的結果，即q為負值時，氨基酸帶正電荷；q為正值時，氨基酸帶負電荷。因此，用pI-pH更好。2.每個氨基酸可解離基團的pKa在生化書中可以查到（也可根據酸堿滴定曲線確定），氨基酸的凈電荷為零時溶液的pH（即等電點，pI）在滴定曲線上位于兩個相應基團pKa之間的中點，在這兩個pKa點上，它們的凈電荷分別是+0.5和-0.5。因此：（1）根據谷氨酸的解離曲線，其pI

32、應該是它的 -羧基和側鏈羧基pK。值之和的算術平均值，即pI=（2.1+4.07）/2=3.08；（2）精氨酸pI應該是它的 -氨基和側鏈胍基的pK。和之的算術平均值，即pI=（8.99+12.48）/2=10.7；（3）丙氨酸pI應該是它的 -氨基和 -羧基pKa值之和的算術平均值，即pI=(2.35+9.87)/2=6.11。3.人血清蛋白的pI=4.64，在pH5.5的電場中帶負電荷，向陽極移動；在pH3.5的電場中帶正電荷，向負極移動。血紅蛋白的pI=7.07，在pH7.07不帶凈電荷，在電場中不移動；在pH9.0時帶負電荷，向陽極移動。胸腺組蛋白的pI=10.8，在pH5.0和 pH

33、8.0時帶正電荷，向陰極移動；在pH11.5時帶負電荷，在電場中向陽極移動。4.維持蛋白質溶液穩定的因素有兩個：（1）水化膜：蛋白質顆粒表面大多為親水基團，可吸引水分子，使顆粒表面形成一層水化膜，從而阻斷蛋白質顆粒的相互聚集，防止溶液中蛋白質的沉淀析出。（2）同種電荷：在pHpI的溶液中，蛋白質帶有同種電荷。若pHpI，蛋白質帶負電荷；若pH<pI，蛋白質帶正電荷。同種電荷相互排斥，阻止蛋白質顆粒相互聚集而發生沉淀。沉淀蛋白質的方法，常用的有：（1）鹽析法，在蛋白質溶液加入大量的硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等中性鹽，去除蛋白質的水化膜，中和蛋白質表面的電荷，使蛋白質顆粒相互聚集，發生沉淀。用不

34、同濃度的鹽可以沉淀不同的蛋白質，稱分段鹽析。鹽析是對蛋白質進行粗分離的常用方法。（2）有機溶劑沉淀法：使用丙酮沉淀時，必須在04低溫下進行，丙酮用量一般10倍于蛋白質溶液的體積，蛋白質被丙酮沉淀時，應立即分離，否則蛋白質會變性。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。此外，還可用加重金屬鹽，加某些有機酸，加熱等方法將樣品中的蛋白質變性沉淀。5.（1）能提高蛋白質的穩定性。亞基結合可以減少蛋白質的表面積/體積比，使蛋白質的穩定性增高。（2）提高遺傳物質的經濟性和有效性。編碼一個能裝配成同聚體的單位所需的基因長度比編碼一個與同聚體相同相對分子質量的超長肽鏈所需的基因長度要小得多（如煙草花葉病毒的外殼有213

35、0多個亞基）。（3）形成功能部位。不少寡聚蛋白的單體相互聚集可以形成新的功能部位。（4）形成協同效應。寡聚蛋白與配體相互作用時，有可能形成類似血紅蛋白或別構酶那樣的協同效應，使其功能更加完善。有些寡聚蛋白的不同亞基可以執行不同的功能，如一些酶的亞基可分為催化亞基和調節亞基。6.（1）pH值增加，Hb與氧的親和力增加。（2）CO2分壓增加，Hb與氧的親和力下降。（3）O2分壓下降，Hb與氧的親和力下降。（4）2，3-DPG濃度下降，Hb與氧的親和力增加。（5）22解聚成單個亞基，Hb與氧的親和力增加。7.（1）由于2，3-BPG是同脫氧Hb A中心空隙帶正電荷的側鏈結合，而脫氧Hb F缺少帶正電荷的側鏈（ 鏈143位的His殘基），因此2，3-BPG是同脫氧Hb A的結合比同脫氧Hb F的結合更緊。（2）2，3-BPG穩定血紅蛋白的脫氧形式，降低血紅蛋白的氧飽和度。由于Hb F同 2，3-BPG親和力比Hb A低，HbF受血液中2，3-BPG影響小，因此Hb F在任何氧分壓下對氧的親和力都比Hb A大，（3）親和力的這種差別允許氧從母親血向胎兒有效轉移。8.（1）-螺旋：右手螺旋，一圈為