1、1第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 生物藥物分析的對(duì)象生物藥物分析的對(duì)象藥物所到之生物體的體液、器官、組織、排泄物等。生物藥物分析的目標(biāo)生物藥物分析的目標(biāo)母體藥物和代謝產(chǎn)物生物藥物分析的意義生物藥物分析的意義n藥物質(zhì)量的正確評(píng)價(jià)n臨床合理用藥2第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 生物藥物分析的特點(diǎn)生物藥物分析的特點(diǎn)n生物樣品中被測(cè)組分的存在形式多樣w原型藥（游離型）、結(jié)合型、代謝物、綴合物等n被測(cè)組分濃度低（10-6-10-9g/ml），變化幅度大n樣品干擾物質(zhì)多，部分樣品穩(wěn)定差n樣品量少n要求較快提供結(jié)果n測(cè)定數(shù)據(jù)的處理和闡明有時(shí)不太容易3第二節(jié)第二節(jié) 藥物在生物體內(nèi)的存在狀態(tài)與生物轉(zhuǎn)化藥物在生物體內(nèi)的存在狀態(tài)與

2、生物轉(zhuǎn)化藥物在生物體內(nèi)的存在狀態(tài)藥物在生物體內(nèi)的存在狀態(tài)藥物代謝藥物代謝保證臨床用藥的安全、合理和有效n藥物代謝的部位：藥物代謝的部位：肝臟、腎、脾、肺、腸粘膜、胎盤等n藥物代謝反應(yīng)藥物代謝反應(yīng)w第一階段（一相）：第一階段（一相）：P450等催化下的氧化、還原、水解等反應(yīng)，增大極性w第二階段（二相）：第二階段（二相）：與葡萄糖醛酸、硫酸鹽等結(jié)合，進(jìn)一步增大極性，隨尿排出4第三節(jié)第三節(jié) 生物樣品的制備生物樣品的制備 常用生物樣品常用生物樣品n生物樣品的選取原則生物樣品的選取原則w能夠反映出濃度與藥效之間的關(guān)系能夠反映出濃度與藥效之間的關(guān)系w易于獲得易于獲得w便于處理便于處理w根據(jù)不同目的和要求進(jìn)

3、行選取根據(jù)不同目的和要求進(jìn)行選取5第三節(jié)第三節(jié) 生物樣品的制備生物樣品的制備 常用生物樣品常用生物樣品n常用生物樣品的種類、特點(diǎn)與采集常用生物樣品的種類、特點(diǎn)與采集 血漿(plasma)w血樣血樣 血清(serum) 全血(whole blood)w尿液尿液(urine)用于藥物劑量回收、藥物腎清除率及生物利用度的研究 尿液藥物濃度變化大，應(yīng)測(cè)定一定時(shí)間內(nèi)尿中藥 物總量。 尿液與血液中藥物的相關(guān)性差。 尿中藥物大多呈綴合狀態(tài)。6第三節(jié)第三節(jié) 生物樣品的制備生物樣品的制備 常用生物樣品常用生物樣品n常用生物樣品的種類、特點(diǎn)與采集常用生物樣品的種類、特點(diǎn)與采集w唾液唾液(saliva)用于藥物濃度

4、監(jiān)測(cè)和藥代動(dòng)力學(xué)研究w其他其他動(dòng)物臟器組織勻漿等n樣本的代表性樣本的代表性力求取樣條件標(biāo)準(zhǔn)化n樣品的貯存樣品的貯存w血樣離心，冷凍保存w尿液立即測(cè)定，否則應(yīng)冷藏或加防腐劑7第三節(jié)第三節(jié) 生物樣品的制備生物樣品的制備 樣品預(yù)處理樣品預(yù)處理n提取方法的選擇依據(jù)提取方法的選擇依據(jù)w藥物的理化性質(zhì)藥物的理化性質(zhì)-酸堿度、極性、揮發(fā)性、可能的生物轉(zhuǎn)化途徑等w藥物的濃度范圍藥物的濃度范圍w藥物測(cè)定的目的藥物測(cè)定的目的w生物樣品的類型生物樣品的類型w樣品處理與分析技術(shù)的關(guān)系樣品處理與分析技術(shù)的關(guān)系8第三節(jié)第三節(jié) 生物樣品的制備生物樣品的制備 樣品預(yù)處理樣品預(yù)處理n藥物的提取藥物的提取w蛋白質(zhì)處理蛋白質(zhì)處理n

5、利用蛋白質(zhì)脫水沉淀利用蛋白質(zhì)脫水沉淀n有機(jī)溶劑、中性鹽等n利用蛋白質(zhì)形成不溶性鹽沉淀利用蛋白質(zhì)形成不溶性鹽沉淀n酸性沉淀劑酸性沉淀劑（TCA、高氯酸、苦味酸等）n重金屬鹽重金屬鹽（Zn2+、Cu2+）n其他方法其他方法n加熱、離心、超濾和透析、酶消化法加熱、離心、超濾和透析、酶消化法9第三節(jié)第三節(jié) 生物樣品的制備生物樣品的制備 樣品預(yù)處理樣品預(yù)處理n藥物的提取藥物的提取w綴合物（結(jié)合物）水解綴合物（結(jié)合物）水解n酸水解酸水解無(wú)機(jī)酸無(wú)機(jī)酸 簡(jiǎn)便快速，但專屬性差，有可能造成被測(cè)物分解。n酶水解酶水解n葡萄糖醛酸苷酶葡萄糖醛酸苷酶(glucuronidase)n芳基硫酸酯酶芳基硫酸酯酶(arylsu

6、lfatase) 專屬性強(qiáng)，一般不會(huì)造成被測(cè)物分解，但水解時(shí)間長(zhǎng)，費(fèi)用高。n溶劑解溶劑解10第三節(jié)第三節(jié) 生物樣品的制備生物樣品的制備 樣品預(yù)處理樣品預(yù)處理n藥物的提取藥物的提取w冷凍干燥冷凍干燥n適用于適用于-大批量的生物樣品大批量的生物樣品-水溶性很強(qiáng)的樣品水溶性很強(qiáng)的樣品-揮發(fā)性樣品揮發(fā)性樣品-對(duì)熱不穩(wěn)定的樣品對(duì)熱不穩(wěn)定的樣品11第三節(jié)第三節(jié) 生物樣品的制備生物樣品的制備 樣品預(yù)處理樣品預(yù)處理n藥物的分離與凈化藥物的分離與凈化w液液-液萃取液萃取萃取率：不低于萃取率：不低于50%n影響提取率的因素影響提取率的因素npH值值n提取溶劑提取溶劑n離子強(qiáng)度離子強(qiáng)度n離子對(duì)提取離子對(duì)提取12第三

7、節(jié)第三節(jié) 生物樣品的制備生物樣品的制備 樣品預(yù)處理樣品預(yù)處理n藥物的分離與凈化藥物的分離與凈化w液液-固萃取固萃取n固相提取柱（使用硅藻土、氧化鋁、離子固相提取柱（使用硅藻土、氧化鋁、離子交換樹(shù)脂、活性炭等填充劑）交換樹(shù)脂、活性炭等填充劑）n“干混合物干混合物”萃取萃取n待測(cè)組分的富集待測(cè)組分的富集w真空揮發(fā)或通氣流揮發(fā)真空揮發(fā)或通氣流揮發(fā)n衍生化處理衍生化處理13第三節(jié)第三節(jié) 生物樣品的制備生物樣品的制備 樣品預(yù)處理樣品預(yù)處理n待測(cè)物的損失待測(cè)物的損失w吸附、化學(xué)降解、衍生化反應(yīng)、絡(luò)合、吸附、化學(xué)降解、衍生化反應(yīng)、絡(luò)合、蒸發(fā)蒸發(fā)n樣品玷污樣品玷污w增塑劑增塑劑w脂肪酸和酯類脂肪酸和酯類w其他

8、其他14第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品內(nèi)藥物分析方法生物樣品內(nèi)藥物分析方法 分析方法建立的一般步驟分析方法建立的一般步驟 n以純品進(jìn)行測(cè)定以純品進(jìn)行測(cè)定 確定線性范圍、最適測(cè)定濃度、靈敏度、最佳測(cè)定條件等n空白樣品測(cè)定空白樣品測(cè)定n以水代替空白樣品，添加對(duì)照品后測(cè)定以水代替空白樣品，添加對(duì)照品后測(cè)定 了解提取回收率和最低檢測(cè)濃度的大致情況n空白樣品中添加對(duì)照品后測(cè)定（回收率實(shí)驗(yàn)）空白樣品中添加對(duì)照品后測(cè)定（回收率實(shí)驗(yàn)）n實(shí)際樣品測(cè)定實(shí)際樣品測(cè)定15第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品內(nèi)藥物分析方法生物樣品內(nèi)藥物分析方法 方法的評(píng)價(jià)方法的評(píng)價(jià)n準(zhǔn)確度（準(zhǔn)確度（accuracy）w回收率回收率相對(duì)穩(wěn)定w與參比方法相比較與參比方法相比較相關(guān)系數(shù)r 0.95n精密度（精密度（precision） 各濃度點(diǎn)RSD不應(yīng)大于15%，最低定量限不應(yīng)大于20%。n靈敏度靈敏度w檢測(cè)限(LOD)、定量限(LOQ)、最低檢測(cè)濃度16第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品內(nèi)藥物分析方法生物樣品內(nèi)藥物分析方法 方法的評(píng)價(jià)方法的評(píng)價(jià)n方法的專屬性（方法的專屬性（specificity） 注重考慮代謝物、內(nèi)源性物質(zhì)和同時(shí)服用注重考慮代謝物、內(nèi)源性物質(zhì)和同時(shí)服用藥物的干擾藥物的干擾n線性范圍線性范圍-相關(guān)系數(shù)r 0.99 n樣品穩(wěn)定性考察樣品穩(wěn)定性考