1、秦巴山區虎杖內生真菌的 抗菌活性研究 研究背景研究意義研究目標研究問題藥用植物虎杖為蓼科蓼屬多年生草本植物，其性味微苦，微寒，歸肝、膽、肺經，具活血散瘀定痛，清熱解毒利濕，化痰止咳通喘之功效。 利用虎杖的內生真菌抑菌活性的初步研究，進一步尋找新的具有抑菌活性物質，旨在為開辟抗菌藥物新為抗菌新藥物研究開發利用找到一條新的途徑。 虎杖內生真菌對金黃色葡萄球菌，白色念珠菌，大腸桿菌，枯草芽孢桿菌等病原菌是否有一定的抑制作用。研究概述途徑奠定基礎 。內生真內生真菌的分菌的分離和純離和純化化 內生真菌的初步分類鑒定 內生真內生真菌的液菌的液體培養體培養 內生真菌的分離和純化 內生真菌的液體培養 發酵液的

2、處理抑菌試驗 研究框架 是指生活在植物體內，通常被宿主細胞膜包圍或細胞質基質包圍與宿主互惠共生的一類菌。其種類極其豐富，主要包括：真菌、細菌和放線菌等。他們主要生長在植物表皮下的組織當中。近年來的研究表明, 幾乎所有植物中都存在內生菌。相關概念內生菌 (endophytic fungi)是指那些在其生活史中的某段時期或全部階段生活在植物組織內，對植物組織沒有明顯引起病害癥狀的一類真菌 。內生真菌 近年來，國內外從多種藥用植物內生真菌中篩選出各種生理活性物質陸續見有報道，內生真菌產生的生物活性物質存在極大的多樣性(如:抗腫瘤、抗病毒、抗細菌、抗真菌、抗蟲等物質)，表明植物內生真菌能夠產生結構新穎

3、、功能特殊的次生代謝產物，是新化合物、新藥物的潛在資源，它們在醫藥、工業、農業等領域具有重要的應用前景。由此可見，植物內生真菌是一類潛在的產生生物活性物質的巨大資源。 本實驗通過對30株虎杖內生真菌進行液體發酵，后對其發酵液進行抑菌活性研究，進一步尋找新的具有抑菌活性物質，從而為開發抗菌藥物新途徑奠定基礎。研究綜述 新鮮虎杖根莖采自陜西省佛坪長角壩鄉。研究材料 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(PDA)、查氏（Czapek）培養基；馬鈴薯葡萄糖液體培養基(PDB)；細菌培養基：牛肉膏蛋白胨固體培養基，白色念珠菌培養基：酵母浸出粉胨葡萄糖培養基（YPD）。 大腸桿菌（Escherichia coli）、枯

4、草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、白色念珠菌（Candida albicans）共4種。1.材料2.培養基3.受試菌株抑菌試驗 抑菌采用濾紙片擴散法 方法過程提前活化供試菌實驗前用受試細菌置無菌水的試管中，震蕩搖勻，制成菌懸液 移液槍分別取供試細菌接種到培養基表面用涂菌棒涂布均勻 將以虎杖內生真菌發酵液浸過的濾紙片貼到培養基表面，每皿接4片 37培養2448 h觀察并測量抑菌圈直徑。 抑菌試驗結果注：A-大腸桿菌；B-枯草芽孢桿菌；C-金黃色葡萄球菌；D-白色念珠菌；“-”代表沒有抑菌圈；”+”代表有抑菌圈，10-1

5、1 mm表示為”+”12-13 mm表示為”+”。ABCDF226+F225+F240+L112+L256+L1012+L1001+L307+F104+L213+L355+L237+LB011-20+LB2011、5+F205+L246+虎杖內生真菌抑菌試驗結果部分照片(a)大腸桿菌(b)金黃色葡萄球菌(c)大腸桿菌(d)金黃色葡萄球菌(f)大腸桿菌(e)金黃色葡萄球菌 植物內生菌是個巨大的微生物新資源,具有重要的醫藥應用潛力，必將在天然藥物研究中得到開發和應用。從傳統藥用植物以及一些特殊環境植物的內生真菌次生代謝產物中尋找新型活性物質，仍是內生真菌研究的研究熱點。植物內生真菌的生境特殊性決定

6、了其既有理論研究的廣度和深度，又有多方面的應用潛力，是個潛力巨大、尚待開發的微生物新資源。 問題討論 本實驗利用30株虎杖的內生真菌的發酵液對金黃色葡萄球菌等4種常見的細菌及真菌進行了抑菌實驗，重點就它們對供試菌的抑菌效果，其中，有12株對受試菌有不同程度的拮抗作用，因此具有一定的潛在應用價值，有可能會成為抗菌新藥物研究開發利用的一條新的途徑。這對開發新的具有抑菌活性物質有一定的參考價值。 本論文是在彭浩老師的悉心指導下完成的。從論文的選題、實驗的每一步進展到論文的寫作都凝聚著老師的心血和汗水。老師敏銳的思維、嚴謹的治學態度、忘我的工作精神和對科學問題的洞察力時刻感染和鞭策著我，令我敬佩，讓我

7、受益終生。在此向尊敬的彭老師及其他給以關懷和支持的老師表示最誠摯的敬意和最衷心的感謝！此外在實驗過程中，也得到了楊婷婷，彭瑞東，李砥成，王乃嘉，魏亮，唐潔，王忠紅同學的大力支持和幫助，在此向她們（他們）表示衷心的感謝！致謝 謝謝！Thank you very much!請各位老師批評指正! 植物內生菌是個巨大的微生物新資源,具有重要的醫藥應用潛力，必將在天然藥物研究中得到開發和應用。從傳統藥用植物以及一些特殊環境植物的內生真菌次生代謝產物中尋找新型活性物質，仍是內生真菌研究的研究熱點。植物內生真菌的生境特殊性決定了其既有理論研究的廣度和深度，又有多方面的應用潛力，是個潛力巨大、尚待開發的微生物新資源。 問題討論 本論文是在彭浩老師的悉心指導下完成的。從論文的選題、實驗的每一步進展到論文的寫作都凝聚著老師的心血和汗水。老師敏銳的思維、嚴謹的治學態度、忘我的工作精神和對科學問題的洞察力時刻感染和鞭策著我，令我敬佩，讓我受益終生。在此向尊敬的彭老師及其他給以關懷和支持的老師表