1、分子診斷學試卷 A二、填空（每空 0.5 分，共 15 分。請將答案填寫在答題紙上）1?從高溫嗜熱細菌中發現高溫 DNA polymerase 后，使得 PCR 技術得以廣泛應用，在高溫下有活性的 DNA polymerase 有、_ 、 _ 、 _。其中具有 3 -5外切活性的高溫 DNA polymerase 有 _ 和 _。2?黏粒（cosmid ）是質粒一噬菌體雜合載體，它的復制子來自_、cos 位點序列來自最大的克隆片段達到 45kb。3._ 感受態細胞 （ Competent cells ）是一種處于 _狀態的細胞。一般通過 _來誘導大腸桿菌感受態的形成。4.PCR 反應過程分為三

2、個步驟，即 _ ， _和一。5.細菌的移動基因存在著三種類型的轉位因子包括、 _、 _。6.Klenow 酶在情況下，呈現 DNA 聚合酶活性，在一情況下呈現外切酶活性。7.外源基因在原核細胞中表達，常用的啟動子有、和 _。8.在 LacZ 標記基因插入外源基因，經 IPTG 誘導，在 X-gal 培養基中顯一色，為性克隆，未插入基因的克隆顯一色，為性克隆。9.基因序列經堿基替代，缺失或插入后，可使遺傳信息產生三種不同的后果，分別為_、 _、 _。10.由一個細胞或者組織的基因組所表達的全部相應的蛋白質，稱為_。三、 判斷題（錯的打“X”對的打“V；每題 1 分，共 10 分。請將答案填在答題

3、紙對應的題號下）1.Maxam-Gilbert 化學降解法測序時，從測序膠上直接讀出的序列是用于測序的模板的互補序列。2.蛋白酶 K 可有效地降解內源蛋白，能快速水解細胞裂解物中的 DNA 酶和 RNA 酶，以利于 完整 DNA 和 RNA 的分離。3.電泳時 EB 加在瓊脂糖凝膠中一般會降低DNA 在瓊脂糖凝膠電泳中的遷移率。4.提取 DNA 時，若用酚除蛋白質，需要用 Tris-HCl 對酚進行平衡，pH 達 7.8 。5.基因組研究可以歸納成為構建 4 張相互關聯的基因組圖譜：遺傳圖、物理圖、序列圖和功能圖。6.DNA 連接酶是一種能催化二條 DNA 鏈之間形成磷酸二酯鍵的酶，因此該酶既

4、可修復基因序列中的缺口，也可修復裂口。7.質粒提取后，在瓊脂糖電泳岀現一條帶時說明質粒提取純度高，當為三條帶時為純度不高。8.COS 位點， COS 質粒， COS 細胞它們均含有用于自身環化的12 個堿基的互補粘性末端。9.入噬菌體的插入型載體只有一個單一限制酶切點，替換型載體有2 個成對的限制性酶切點。10.原核細胞和真核細胞轉錄的 mRNA 均具有與 rRNA 結合的 SD 序列，以利于進行有效的轉錄。四、 選擇題（每題 1 分，共 15 分。請將最佳答案填在答題紙對應的題號下）1.用于核酸分子雜交的探針不能是放射性標記的（）。A.DNA B . RNA C .抗體 D .寡核苷酸2.c

5、DNA 文庫包括該種生物的（）。A ?某些蛋白質的結構基因B ?所有蛋白質的結構基因C?所有結構基因D?內含子和調控區3.關于堿解法分離質粒 DNA ，下面哪一種說法不正確 ?（）A .溶液 I 的作用是懸浮菌體 B .溶液H的作用是使 DNA 變性C . 溶液山的作用是使 DNA 復性D ?質粒 DNA 分子小，所以沒有變性，染色體變性后不能復性4.有關 DNA 序列自動化測定的不正確敘述是（）。A ?不再需要引物 B. 激光掃描分析代替人工讀序C. 基本原理與手工測序相同D. 用熒光代替了同位素標記5.在重組 DNA 技術中，不常用到的酶是（）。A .限制性核酸內切酶 B. DNA 聚合酶

6、 C. DNA 連接酶 D. DNA 解鏈酶6.關于 cDNA 的最正確的說法是（ ）。A 以 mRNA 為模板合成的雙鏈 DNA B 同 mRNA 互補的單鏈 DNAC.同 mRNA 互補的雙鏈 DNA D .以上都正確7.在分離 DNA 過程造成 DNA 分子斷裂的因素很多，下列說法中哪一項是不正確的（ ）。A ?核酸酶的降解B.化學降解 C.保存液中未加一滴氯仿D?物理剪切8.下列哪一項不是 Southern blotting 的步驟（ ）。A .用限制酶消化 DNA B . DNA 與載體的連接C. 凝膠電泳分離 DNA 片段 D. DNA 片段轉移到硝酸纖維膜上9.下列哪種克隆載體對

7、外源 DNA 的裝載量最大（ ）。A .粘粒 B .酵母人工染色體 C .質粒 D.入噬菌體10.人工染色體載體必須具有的元件是（ ）。A .染色體端粒 B.著絲粒 C.自主復制序列 D.以上三項全部11.入噬菌體外包裝目的基因片段的大小應為（）。A.小于入噬菌體 DNA 的 50% B. 小于噬菌體 DNA 的 75%C.大于入噬菌體 DNA 的 105% D.為入噬菌體 DNA 的 75%A105%12.識別基因序列不同，但酶切后產生的粘性末端相同的一類酶為（）。A.同工酶 B.同尾酶 C.同裂酶 D.同位酶13. 下列生物體的細胞基因組哪些會有斷裂基因？（）A. 大腸桿菌 B. 乙肝病毒

8、 C. 人 D. 噬菌體14. 真核細胞基因表達的特點為（ ）。A .單順反子 B .多順反子 C .轉錄和轉譯連續進行 D .轉錄和轉譯在同一時空進行15. pBR322 質粒作為基因克隆載體不具有下列何種調控元件（ ）。A.Ampr和 TetrB.ori 復制子 C.LacZ 標記 D.多克隆位點五、問答題 （共 36 分，請將答案填寫在答題紙對應的題號下）1.真核細胞基因組中的基因常有內含子存在，能否在原核細胞中表達？為什么？（5 分）2.質粒單酶切點的基因連接如何降低本底和防止自我環化和提高連接效率？（6 分）3.真核表達調控的順式作用元件有哪些？其作用特點是什么？（ 8 分）4.基因

9、工程疫苗研究開發應遵循的原則是什么？（ 8 分）5.有哪幾種反義核苷酸基因失活療法？簡述其原理。（ 9 分）答案 -試卷 A一、名詞解釋 （每題 3 分，共 24 分。請將答案填寫在答題紙上）1.分子診斷：是指通過檢測基因的結構異常或其表達異常，對人體的健康狀況和疾病做出診斷的方法。2.實時定量 PCR（real-time PCR ）: 7?實時 PCR : 通過特定設計的 PCR 儀器來實時檢測 PCR 擴增過程每一輪循環產物的累積數量，推算模板的起始濃度，這種工作方式就稱為實時PCR3.重疊基因 : 不同基因的核苷酸序列有時為相鄰兩個基因共用，將核苷酸彼此重疊的兩個基因稱為重疊基因4.鋅指

10、結構：由兩個半胱氨酸（Cys ）殘基和兩個組氨酸（His）殘基通過位于中心的鋅離子結合成一個穩 定的指狀結構 , 并以鋅輔基敖合形成的環狀結構作為活性單位 , 在指狀突出區表面暴露的堿基及其極 性氨基酸與 DNA 結合有關5.基因置換：是指將致病基因整個地被有功能的正常基因所置換，使致病基因永久地得到更正。6.基因敲除：基因敲除是向正常生物個體內引入某個突變的基因位點而選擇性地使某特定基因功能失活的技術。7.基因芯片：將大量的基因片段有序地、高密度地排列在玻璃片或纖維膜等載體上，稱之為基因芯片（又稱 DNA 芯片、生物芯片）。8.蛋白質組學：指應用各種技術手段來研究蛋白質組的一門新興學科，即研

11、究細胞在不同生理或病理條件下蛋白質表達的異同，對相關蛋白質進行分類和鑒定。更重要的是蛋白質組學的研究要分析蛋白質間相互作用和蛋白質的功能.二、填空（每空 0.5 分，共 15 分。請將答案填寫在答題紙上）1. Taq DNA 聚合酶 Tth DNA 聚合酶 Vent DNA 聚合酶 Pwo DNA 聚合酶 Pfu DNA 聚合酶 Pwo DNA聚合酶 Pfu DNA 聚合酶2.質粒噬菌體3.容易接受外源 DNA 片段 CaCl2法4.變性退火延伸5.插入序列轉位子噬菌體 Mu 和 D1086.有 dNTP 沒有 dNTP7.乳糖啟動子 Trp 啟動子 Tac 啟動子噬菌體的 PL和 PR啟動子

12、脂蛋白啟動子8.白陽性藍陰9.同義突變錯義突變無義突變10. 蛋白質組三、判斷題（錯的打“X”對的打“V；每題 1 分，共 10 分。請將答案填在答題紙對應的題號下）題號12345678910答案XVVVVXXXVX四、選擇題（每題 1 分，共 15 分。請將最佳答案填在答題紙對應的題號下）題號123456789101112131415答案CADADACBBDDBCAC五、問答題（共 36 分，請將答案填寫在答題紙對應的題號下）1.真核細胞基因組中的基因常有內含子存在，能否在原核細胞中表達？為什么？（5 分）答：不能，因為原核細胞缺乏對真核基因中內含子的剪接功能和轉錄后加工系統。原核生物必須有

13、相應的原核RNA 聚合酶可識別原核細胞的啟動子，以催化 RNA 的合成。基因表達是以操縱子為單位，操縱子由數個相關的結構基因和調控功能的部位組成的。因此在構建原核表達載體時必須有 1 個強的原核啟動子及其兩側的調控序列。2.質粒單酶切點的基因連接如何降答：目的基因片斷與載體由相同的單一限制性核酸內切酶（如EcoRI ）消化酶切后，兩者的兩端均具有相同的粘性末端，稱為單酶切點的粘性末端，又稱全同源性粘性末端高背景載體經單一限制性核酸內切酶切割后，載體分子易于自我環化，既不利于目的基因的重組連接，大低本底和防止自我環化和提高連接效率？6 分）大降低陽性克隆效率，又可使非重組性載體造成高背景。為了防

14、止載體的自我環化，通常用堿性磷酸酶去除載體粘性末端的 5 -P 以抑制 DNA 的自我環化。在連接反應中，具有 5 -P，的目的基因 DNA 片斷可有效地 與去磷酸化質粒 DNA 載體通過粘性末端發生互補連接，盡管產生的重組 DNA 分子于連接點含有兩個缺口的幵環分子，盡管在轉化時其轉化效率高于線性低于閉和環，但轉化大腸桿菌后，在菌體內其缺口可獲得修復。如第二章圖 2-6雙向插入經單一限制核酸內切酶 （如 EcoRI ）切割的目的基因和載體，因二者的粘性末端是相同的，因此在連接反應 中 , 目的基因可發生雙向插入 , 載體對目的基因表達是有方向的 , 而目的基因可雙向與之相連 , 這種連接若以

15、克隆目的GGTCAA 和 GGGCC 序列，稱為 GC box, 它們經協同作用，以啟動子的轉錄效率因細胞而異，因此需要根據宿主細胞的類型選擇不同的啟動子，以便真核基因的高效表達。常用的啟動子有Rous 肉瘤病毒啟動子 RSV 和巨細胞病毒的啟動子 CMV 還有 SV40早期啟動子,腺病毒的晚期啟動子。 增強子增強子是使啟動子的基因轉錄效率顯著提高（增強轉錄活性）的一類順式作用元件，其本身不具有啟動子活性，是由多個獨立的，具有特征性的核苷酸序列所組成。其基本的核心組件常由812bp 組成，以單拷貝或多拷貝串聯的形式存在。增強子一般有以下特性：增強子能提高同一條DNA 鏈上基因轉錄的速率；增強子

16、對同源或異源基因都有效；增強子的位置可在基因5上游、3下游或內部；無方向性，增 強子從 5-3或是從 3 -5均可對啟動子發揮作用；增強子可遠離轉錄起始點；增強子一般無基因特異性，對各種基因啟動 子均有作用，但具有組織或細胞特異性。典型的增強子首先發現于SV。的病毒中，為 SV。的早期基因增強子，約 200bp,含 2 個 72bp 的重復 序列，位于早期啟動子上游，增強子可促使病毒基因轉錄效率提高 100 倍，因此具有這一增強子的載體已 得到了廣泛的應 用。近些年來，來自于 Rous 肉瘤病毒基因長末端重復序列和人類巨細胞病毒（ CMV 增強子也已被廣泛用于真核細胞 的基因表達。增強子能增強

17、啟動子的轉錄能力， 有效的增強子能促進轉錄達 10 倍或 100 倍以上，在某些情況下，表達產基因片段為目的沒有影響 止密碼子方向表達是定向轉錄的 建表達DNA 重組體選用雙酶切切割目的基因和載體，可使目的基因 隆。3. 真核表達調控的順式作用元件有哪些？其作用特點是什么？（ 答：順式作用元件為一些能與 DBP 結合的特定序列的 應，按功能可分為啟動子、增強子、沉默子、衰減子和終止子等 啟動子真核基因啟動子是基因表達時與基因轉錄起始有關的 型TATA 盒（框），若以表達為目的酶H在正確起始位點轉錄因目的基因由起始密碼子向終 就不能正確轉錄目的基因的 mRNA 若構 與載體的連接發生定向連接重組

18、，以便定向克8 分）DNA 片段，決定轉錄起始位點和 RNA 聚合酶的轉錄效DNA 序列片段。5端 DNA 序列,包括在-30bp 區富含有 AT 的典 啟動元件。前者是引導RNA 聚合后者 UPE 是調節轉錄起始頻率 和提我們就要對插入的片段進行方向鑒定，一旦啟動子與目的基因編碼順序方向相反TATA box ）和在 -70? -80bp 區域（在 TATA box 上游）mRNA 所必需的 DNA 序列，即保證轉錄的精確起始。高轉錄效率的調控序列，后者的序列常為調控基因的轉錄效率。物可能具有細胞毒效應。 因此，最好使用一種可被外界刺激信號誘導表達外源基因的誘導型啟動子有熱休克啟動子、 金屬硫

19、蛋白啟動子、糖皮質激和固醇類激素誘導的啟動子，培養溫度使啟動子轉錄水平提高，重金屬離子可有效地促進金屬硫蛋白啟動子的轉錄活性 RNA 剪接信號多數高等的真核基因都含有內含子序列，在細胞核內轉錄產生的前體含子順序后才成為成熟的 mRNA 分子。雖然許多基因的 cDNA 轉入哺乳類動物細胞后，其表達不受有或無內 含子的影響，但有些基因在真核細胞中表達需要有內含子的存在。一般來說，在哺乳動物細胞的表達載體序列的剪接信號，以提供外源基因 cDNA 表達的需要。常用的內含子剪接序列有SV4o的小 t 抗原的內含子序列等。 負調控元件沉默子和衰減子是抑制基因轉錄的DNA 序列，稱為負調控元件，它們與反式作

20、用因子相互結合而起作用。這些負調控元件不受距離和方向的限制，并可對異源基因表達起作用。 終止子和 polyA 信號真核基因轉錄的確切終止信號和終止機制，目前尚不清楚，終止過程不是在 RNA 聚合酶指導下完成的，在不明機制下發生轉錄終止。現在已發現模板DNA 分子的 3端有轉錄終止信號序列，稱終止子。通常由轉錄產生的具有 polyA 尾的基因終止信號是在多聚腺苷酸化位點下游的一段長度為數百個堿基的 DNA 區 域內的 G/T 簇，例如在SV4o中的 AGGTTTTTT 勺 DNA 序列為終止轉錄調控元件。一般轉錄終止子為發夾結構 的反向 重復序列。現在基因工程表達載體上所使用的轉錄終止子都是病毒

21、基因或細胞基因的 3 端的一段序 列，其中也包括 3端不翻譯區。如 SV4o小 t 抗原和B-球蛋白的轉錄終止片段常用于構建真核基因表達載體。一般認為 polyA 的存在增加了 mRNA 分子的穩定性，使之能成功地進行翻譯。準確而有效地進行多聚 腺苷酸化需要兩種序列：位于polyA 位點下游的 GU 豐富區或 U 豐富區；位于 polyA 位點上游的 1130 個核苷酸處的一個由 6 個核苷酸組成的高度保守序列 ( 5-AAUAAA )，這些序列與轉錄后的 RNA 切割和加 尾有關。最 常用的polyA 信號是用 SV40的一段 237kb 的 BamHI-BcLI 酶切片段，它包含早期和晚期

22、轉錄單位 的切割和加 polyA 信 號，兩套信號分別位于不同的 DNA 鏈上 ,作用方向相反，它們對 mRN 的加工都同樣有 效。在雙啟動子的表達載體中，啟動子的轉錄方向為同向時，上游啟動的轉錄由于會穿過下游啟動子，這樣就使得下游的轉錄受到極大的影響，造成下游轉錄水平的下降，但是如果在兩個啟動子間插入一個轉錄終止子后，上游啟動子對下游啟動子的影響就被消除了，這樣下游啟動子的表達量會有明顯提高。當兩個啟動轉錄方向相反時，基因表達可能會被轉錄形成的反義RNA 所抑制，這時插入轉錄終止子將會消除這種抑制作用。4.基因工程疫苗研究開發應遵循的原則是什么？ ( 8 分)熱休克啟動子 的誘導可通過提高細

23、胞的mRNA 要經過剪接過程去掉內中最好有一段內含子答：(1)不能或難于培養的的病原體如乙型肝炎病毒(H BV) ,丙型肝炎病毒(HCV) ,戊型肝炎病毒(HEV),EB 病毒(Epstein-Barr 病毒，EBV),巨細胞病毒(CMV)，人乳頭瘤病毒(HPV)，麻風桿菌，疾原蟲、血吸蟲 等。(2)有潛在致癌性或免疫病理作用的病原體，前者如 1 型嗜人 T 淋巴細胞病毒(HTLV-I)，人免疫缺損 病毒(HIV), 單純皰疹病毒(HSV)，還有 EBV CMV HPV 等。后者如呼吸道合胞病毒(RSV),登革熱病毒(DGV)，腎綜合征出血熱病毒(HFRSV) ；（3）常規疫苗免疫效果差，如霍

24、亂和痢疾菌苗；或者反應大，如百日咳和傷寒菌苗。（4）能大大節約成本，簡化免疫程序的多價疫苗，如以痘苗病毒，腺病毒，卡介苗或沙門氏菌為載體的多價活疫菌；5.有哪幾種反義核苷酸基因失活療法？簡述其原理。（9 分）答：（1）將特異的反義基因重組到表達載體上（病態載體或質粒），導入靶細胞中轉錄出反義RNA，形成雙鏈 RNA （RNA/RNA 雙鏈體），阻礙基因的翻譯。（2）人工合成寡聚脫氧核糖核酸（ODN ）經過化學修飾導 入細胞，與 mRNA 和 DNA 結合，形成 RNA/DNA 雜鏈或 DNA 核苷酸三聚體，影響 基因的翻譯或轉錄。（3） 特異性的核酶，根據癌基因設計出特異的“錘頭”或“發夾”結

25、構，它能夠催化切割，降解異常表達基因的mRNA 而影響基因的翻譯。分子診斷學試卷 B、選擇題（每題 1 分，共 15 分；請將答案填寫在答題紙上）1. 限制性核酸內切酶是由細菌產生的，其生理意義是2. 生物工程的下游技術是3.基因工程操作常用的酶是A. I + II B. I + III + IV C. II + III + IV D. I +11 + IV + III4.限制性內切核酸酶的星活性是指（）oA.在非常規條件下，識別和切割序列也不發生變化的活性B. 活性大大提高C. 切割速度大大加快D.識別序列與原來的完全不同5.下列五個 DNA 片段中含有回文結構的是（）A. GAAACTGC

26、TTTGAC B. GAAACTGGAAACTGC. GAAACTGGTCAAAG D. GAAACTGCAGTTTC6.關于 cDNA 的不正確的提法是（）。A.同 mRNA 互補的單鏈 RNAB. 同 mRNA 互補的含有內含子的 DNAC. 以 mRNA 為模板合成的雙鏈 RNAD. 以上都不正確7.下列有關連接反應的敘述，錯誤的是（）oA.連接反應的最佳溫度為37 B.連接反應緩沖體系的甘油濃度應低于10%C. 連接反應緩沖體系的 ATP 濃度不能高于 1mMA.修復自身的遺傳缺陷C. 強化自身的核酸代B.促進自身的基因重組A.基因工程及分離工程B.蛋白質工程及發酵工程C.基因工程及蛋

27、白質工程D.分離工程及蛋白質工程:（I 內切酶D. 連接酶通常應過量 2-5 倍8.T4-DNA 連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段DNA 片段連接在一起，其底物的關鍵基團是（）A. 2 -OH 和 5 -P B. 2 -OH 和 3 -PC. 3 -OH 和 5 -P D. 5 -OH 和 3 -P9.載體的功能是（）。A.外源基因進入受體的搭載工具B.不能為外源基因提供整合能力C.不能提供復制能力D.不能為外源基因提供表達能力10. 黏性末端連接法，不僅操作方便，而且( )。A.產生新切點 B.易于回收外源片段C.載體不易環化 D.影響外源基因的表達11. 下列哪種克隆載體對外源 DNA 的

28、容載量最大 ? ( )A.質粒 B.黏粒 C.酵母人工染色體(YAC) D.入噬菌體12. 考斯質粒 ( cosmid ) 是一種()。A.容量最大一種載體 B.由入-DNA 的 cos 區與一質粒重組而成的載體C.是一種單鏈 DNA 環狀載體 D.不能在受體細胞內復制，但可以表達13. 13 ( ) 某一重組 DNA 的載體部分有兩個 BamHI 酶切位點。用 BamHI 酶切后凝膠電泳上出現四條長度不同的帶子，其長度總和與已知數據吻合，該重組分子插入片段上的BamHI 酶切位點共有 ( )。A.4 個 B. 3 個 C. 1 個 D. 2 個14. 下列哪一種酶作用時需要引物 ? ( )A

29、.限制酶 B.末端轉移酶 C.反轉錄酶 D. DNA 連接酶15. 用下列方法進行重組體的篩選，只有( )說明外源基因進行了表達。A.Southem 印跡雜交 B.Northem 印跡雜交C.Western 印跡 D.原位菌落雜交三、簡答題(每題 5 分，共 25 分; 請將答案填寫在答題紙上 )1.什么是包涵體？2.什么是a-互補篩選？3.簡述酶切反應體系及反應條件？4.核酸操作的基本技術有哪些？5.基因工程誕生的理論基礎是什么？四、論述題(每題 10 分，共 40 分; 請將答案填寫在答題紙上 )1.如何有效地提高外源基因的表達效率？2.試述載體構建一般方法。3.試述 5 RACE 技術原

30、理和方法4.大腸桿菌作為基因工程受體菌的優缺點是什么？答案 -試卷 B一、名詞解釋 ( 每題 2 分，共 20 分 )1.轉化：嚴格地說是指感受態的大腸桿菌細胞捕獲和表達質粒載體 DNA 分子的生命過程 2. 質粒不親和 性：在沒有 選擇壓力的情況下，兩種不同質粒不能夠在同一宿主細胞系中穩定地共存的現象。3.cDNA 文庫：是指某生物某一發育時期所轉錄形成的 cDNA 片段與某種載體連接而成的克隆的集合。4.RACE : 是一種通過 PCR 進行 cDNA 末端快速克隆的技術，是以mRNA 為模板反轉錄成 cDNA 第一鏈后用 PCR 技術擴增出某個特異位點到3，或 5，端之間未知序列的方法。

31、5.基因文庫 :通過克隆方法保存在適當宿主中的某種生物，組織，器官或細胞類型的所有DNA 片段而構成的克隆集合體。6.RT-PCR:先用逆轉錄酶作用于 mRNA，以寡聚 dT 為引物合成 cDNA 第一鏈，然后用已知一對引物，擴增嵌合分子，這種方法稱為逆轉錄 PCR 。7.載體 : 指基因工程中攜帶外源基因進入受體細胞的運載工具，它的本質是DNA 復制子。8.S-D 序列：在大腸桿菌 mRNA 的核糖體結合位點上，含有一個轉譯起始密碼子及同16S 核糖體 RNA 3,末端堿基互補的序列，該序列最初由Shine 、Dalgarno 發現，故后來命名為 Shine-Dalgarno 序列，簡稱 S

32、-D 序列。9.穿梭質粒載體：指一類由人工構建的具有兩種不同復制起點的選擇標記，因而可在兩種不同宿主細胞中 存活和復制的質粒載體。10. MCS :指載體上人工合成的含有緊密排列的多種限制核酸內切酶的酶切位點的DNA 片段、選擇題（每題 1 分，共 15 分）題號123456789101112131415答案DAADDCACDCCBDCC三、簡答題（共 25 分，每題 5 分）1.什么是包涵體？答：重組蛋白在胞內表達時，常常以不溶性蛋白聚集成的晶狀物形式存在，這種晶狀體即包涵體。包涵體的形成是外源蛋白的高效表達時的普遍現象，這是由于肽鏈折疊過程中部分折疊的中間態發生了錯誤聚合，而不是形成成熟的

33、天然態或完全解鏈的蛋白。2.什么是a-互補篩選？答：質粒載體具有B-半乳糖苷酶基因（lacZ），當外源 DNA 插入到它的lacZ，可造成表達后的p-半乳糖苷酶 失活，利用這一點就可以通過大腸桿菌轉化子菌落在添加有X-gal-IPTG 培養基中的顏色變化鑒別岀重組子和非重組子。有些大腸桿菌上帶有lacZ 基因的部分編碼序列，質粒載體中含有別一部分編碼序列，當質粒轉入載體后，可形成具有酶活性的蛋白質。這種lacZ 基因上缺失了一部分編碼序列的突變體與帶有這一部分編碼序列的突變體之間實現互補的現象叫a互補。3.限制性核酸內切酶的活性受哪些因素影響？答：酶的純度。DNA 樣品的純度。DNA 的甲基化程度。酶切反應的溫度與時間。DNA 分子的構型。限制性核酸內切酶的反應緩沖液。4.核酸操作的基本技術有哪些？答：核酸提取與純化核酸的檢測與保存核酸的凝膠電泳核酸分子雜交5.基因工程誕生的理論基礎是什么？答：是現代分子