1、化學發光發光試劑及其應用2化學發光試劑及其應用 化學發光試劑概述 化學發光分析的基本原理 化學發光試劑的主要類型 化學發光試劑的應用3化學發光試劑概述 發光被定義為處在激發態的分子或原子回到基態時所發射的光。按照獲得激發態能源的不同有各種類型的發光。在化學發光（chemluminescence, CL）中，由化學反應產生能的原子或分子由激發態回到基態時所產生的這一光輻射現象叫化學發光。根據化學發光的強度測定物質含量的分析方法叫化學發光分析。 1887年 Redziszewski首次報道了絡吩堿（lophine,2,4,5-三苯基咪痤）在堿性條件下與氧氣反應發出黃金設色的光人為的化學發光 4化學

2、發光的特點化學發光的特點 1。靈敏度高，如用熒光素酶和磷酸三腺苷（ATP）的發光反應，可測定2*10-17mol/L的ATP，即可檢測一個細胞中的ATP含量。 2分析方法簡單快捷，不需要復雜的儀器，不需要光源和色散裝置，業沒有光學分析方法中常見的散射光和雜散光等引起的背景值。 化學發光分析法的測量儀器比較簡單，主要包括樣品室、光檢測器、放大器和信號輸出裝置?；瘜W發光反應在樣品室中進行，反應發出的光直接照射在檢測器上，目前常用 56LUM-F流動注射化學發光儀器7 1化學發光的基本條件化學發光的基本條件w 一個化學反應要產生化學發光現象，必須滿足以下條件：w第一是：該反應必須提供足夠的激發能（對

3、于藍光發射需300kj.mol-1,紅光需150kj.mol-1），導致電子從基態躍遷至激發態。w第二是：化學反應的能量至少能被一種物質所說接受并使之生成激發態。w第三是：處于激發態的分子或原子必須具有一定的化學發光量子效率時期能釋放出光子，或能轉移它的能量給另一個分子使之處于激發態并使 發出光子113 3化學發光強度與反應物濃度的關系化學發光強度與反應物濃度的關系 化學發光反應所以能用于分析測定，是因為化學發光強度（ICL）與化學反應速度（dp/dt）相關聯，而一切影響反應速度的因素有多可以作為建立測定方法的依據。化學發光反應一般可表示為： A+B C*, C* C+hv該發光反應的化學發光

4、強度取決于翻譯的速度dp/dt和反應的化學發光量子效率（ CL ） ICL（T）= CLdp/d式中CL可表示為：CL=r+f,其中r為生成激發態產物的量子效率，f 為激發態產物分子的發光量子效率，對于一定的化學發光反應， 為一定值;其反應速度可按質量作用定律表示出與反應體系中物質濃度的關系。因此，通過測定化學發光強度就可以測定反應體系種某種物質的濃度，原則上講，對任何發光反應，只要反應是一級或假一及反應，都可以通過上式進行化學發光定量分析。化學發光分析測定的物質對象可分為三類：第一類物質是化學發光反應中的的反應物；第二類物質是化學發光反應中的催化劑，增敏劑或抑制劑;第三類是偶合反應中反應物，

5、催化劑，增敏劑等。這三類物質還可以通過標記方式來測定人們感興區的其他物質。這就夸大了化學發光分析的應用范圍。12例如，在上述化學發光反應中，如果物質B保持恒定，而物質A變化且為一級或假一及反應，則此式表明化學發光強度與A的濃度成正比。時 間化學發光強度( )( )/CLCLCLCLAIIt dtdA tdt dtC 13。 化學發光分析測定的物質對象可分為三類：第一類物質是化學發光反應中的的反應物；第二類物質是化學發光反應中的催化劑，增敏劑或抑制劑;第三類是偶合反應中反應物，催化劑，增敏劑等。這三類物質還可以通過標記方式來測定人們感興區的其他物質。這就夸大了化學發光分析的應用范圍。14化學發光

6、試劑化學發光試劑 1魯米諾（魯米諾（luminol）,異魯米異魯米(isoluminol)和和他們的衍生物他們的衍生物 魯米諾（3氨基鄰苯甲酰肼,1）,異魯米諾（2）及其衍生物（如氨基丁基乙基鄰苯甲酰肼，ABENH,3） 在發光分析中被使用。 在二甲基亞砜中，魯米諾的量子產率不超過5%，在水溶液中是1%1.5%。魯米諾在堿性條件下能被許多氧化劑（例如H2O2,O2,ClO-等）氧化而發出藍色的廣，發光反應的量子產率介于0.010.05之間是一個研究最早，最多，應用最廣泛的發光試劑。 15 魯米諾（魯米諾（luminol） 異魯米諾異魯米諾(isoluminol) NH2NHONHOH2NNHO

7、NHO16 魯米諾的發光機理見下圖，NH2NHONHONH2NHNHOOOOH-N2NH2OOOOH*NH2OOOOH+光17魯米諾于H2O2的反應是一個自身化學發光反應。18v 過氧草酸鹽（peroxalate）（酯）包括一大類物質，他們自身并不發光，其化學發光均為敏化華學范廣，化學發光反應是芳香草酸值得過氧化氫氧化作用，芳香草酸鹽和H2O2芳香草酸鹽和H2O2反應形成高能量的中間物。v 與魯米諾相比，過氧草酸鹽化學反應的發光效率更高，可達到27%，且在較寬的酸度范圍內(PH410)都能發光。v 過草酸發光體西可用于測定的物質有：（1）待測物質本身是熒光劑，可作為能量接受體和發光體;(2)待測物質曹禺某一反應可產生H2O2等氧化劑而間接被測定；（3）待測物質可被淹聲稱熒光物質?？梢?，過氧草酸鹽類化學發光法英的分析應用還賴于新熒光衍生劑的開發。19 1無機物的分析 2.有機物及藥物的分析 3生物體內活性氧的