1、第三章第三章 免疫細胞免疫細胞(xbo)(xbo)的分離及的分離及其表面標志檢測技術其表面標志檢測技術第一頁，共四十一頁。第一節 免疫細胞(xbo)的分離 一、 外周血單個核細胞分離 二、 淋巴細胞的分離 三、 T細胞和B細胞的分離 四、 T細胞亞群的分離第二頁，共四十一頁。第二節第二節 淋巴細胞標志及亞群分類淋巴細胞標志及亞群分類 一、一、 細胞表面細胞表面(biomin)(biomin)標志及亞群標志及亞群 二、二、 B B細胞表面標志細胞表面標志 三、三、 NKNK細胞表面標志細胞表面標志第三節第三節 其他的免疫細胞其他的免疫細胞第四節第四節 免疫細胞表面標志的檢測及應用免疫細胞表面標志

2、的檢測及應用 一、一、免疫細胞表面標志的檢測方法免疫細胞表面標志的檢測方法 二、二、 淋巴細胞表面標志檢測的臨床意義淋巴細胞表面標志檢測的臨床意義思考題小結(xioji) 第三頁，共四十一頁。第四頁，共四十一頁。第一節第一節 免疫細胞免疫細胞(xbo)(xbo)的分離的分離 外周血單個核細胞外周血單個核細胞(xbo)(xbo)分離分離 淋巴細胞的分離淋巴細胞的分離 T T細胞和細胞和B B細胞的分離細胞的分離 T T細胞亞群的分離細胞亞群的分離第五頁，共四十一頁。一、外周血單個核細胞一、外周血單個核細胞(xbo)(xbo)分離分離 外周血單個核細胞外周血單個核細胞(xbo)(xbo)（peri

3、pheralmononuclearcells,PMNC）包括淋巴細胞和單核細胞包括淋巴細胞和單核細胞（monocyte）。）。 Ficoll分離液法主要用于分離外周血中的單個核細胞，是分離液法主要用于分離外周血中的單個核細胞，是一種單次差速密度梯度離心的分離法。一種單次差速密度梯度離心的分離法。 第六頁，共四十一頁。細胞細胞(xbo)分離基本原理分離基本原理不同細胞密度不同細胞密度(md)(md)不同不同不同細胞表面生物學特性不同不同細胞表面生物學特性不同不同細胞表面分化抗原不同不同細胞表面分化抗原不同第七頁，共四十一頁。不同不同(b tn(b tn) )細胞密度不同細胞密度不同(b tn(b

4、 tn) )人的紅細胞密度(md)為1.093 粒細胞密度為1.092 單個核細胞（淋巴細胞和單核細胞）的密度為 第八頁，共四十一頁。不同細胞(xbo)密度不同第九頁，共四十一頁。用1.0770.001的分層液可將細胞(xbo)分離 第十頁，共四十一頁。密度梯度離心(lxn)(Ficoll)離心第十一頁，共四十一頁。二二、淋巴細胞分離、淋巴細胞分離(fnl)貼壁粘附法貼壁粘附法 吸附柱過濾法吸附柱過濾法 磁鐵吸引法磁鐵吸引法 Percoll Percoll 分離液法分離液法 （連續（連續(linx)(linx)密度梯度離心）密度梯度離心）（去單核細胞）第十二頁，共四十一頁。E E花環沉降花環沉

5、降(chnjing)(chnjing)法法 尼龍毛柱分離法尼龍毛柱分離法 三、三、T T細胞細胞(xbo)(xbo)和和B B細胞的分離細胞的分離第十三頁，共四十一頁。四、四、T T細胞細胞(xbo)(xbo)亞群的分離亞群的分離 親和板結合分離法親和板結合分離法 磁性磁性(cxng)(cxng)微球分離法微球分離法 熒光激活細胞分離儀分離法熒光激活細胞分離儀分離法 第十四頁，共四十一頁。熒光激活(jhu)細胞分離儀分離法第十五頁，共四十一頁。第十六頁，共四十一頁。磁珠大小可以(ky)選擇第十七頁，共四十一頁。大小免疫磁珠分離細胞(xbo)的特點比較 比較項目大磁珠小磁珠對細胞的影響對細胞造成

6、機械壓力，影響其生物學活性，不利于分離后培養。對細胞溫和，不影響分離細胞的后續培養。對流式細胞儀的影響阻塞流式細胞儀的噴嘴，影響散射光。可直接上流式細胞儀檢測，不影響散射光。分離條件要求技術簡單，分離可在試管中完成。需要很強的磁場來分離細胞。 收率得率高。得率不高。純度純度低。純度高。分離時間分離速度快。分離速度慢。分離成本成本低。需要很強的磁場來分離細胞，需要一次性的分離柱，不能在普通試管進行。第十八頁，共四十一頁。第十九頁，共四十一頁。第二十頁，共四十一頁。免疫(miny)磁珠法細胞分選過程第二十一頁，共四十一頁。免疫磁珠細胞分選裝置第二十二頁，共四十一頁。全自動細胞(xbo)分選系統第二

7、十三頁，共四十一頁。流式細胞分析儀第二十四頁，共四十一頁。第二節第二節 淋巴細胞標志淋巴細胞標志(biozh)(biozh)及亞群分類及亞群分類 常用常用(chn(chn yn yn) )于鑒定和檢測淋巴細胞表面于鑒定和檢測淋巴細胞表面標志是簇分化抗原（標志是簇分化抗原（Cluster of Cluster of differentiationdifferentiation，CDCD）。）。 第二十五頁，共四十一頁。細胞表面細胞表面(biomin)(biomin)分化抗原（分化抗原（CDCD抗原抗原）適用于T、B細胞的分離(fnl)已知CD抗原細胞亞群的分離未知CD抗原細胞亞群的分離（陰性分選

8、）第二十六頁，共四十一頁。一、一、T T細胞細胞(xbo)(xbo)表面標志及其亞群表面標志及其亞群 CD3+CD4+CD8-輔助性輔助性T細胞細胞(xbo)（helpTcell,Th） CD3+CD4-CD8+細胞毒性細胞毒性T細胞細胞（cytotoxicTcell,TcorCTL） CD4+CD25+調節性調節性T細胞細胞（regulatoryTcell,TrorTreg）第二十七頁，共四十一頁。二、二、B B細胞表面細胞表面(biomin)(biomin)標志標志 SmIgSmIg、FcFc受體、補體受體、受體、補體受體、EBEB病毒受體，部分病毒受體，部分CDCD分分子是子是B B細胞

9、的重要表面標志，其中以細胞的重要表面標志，其中以SmIgSmIg為為B B細胞所特細胞所特有，是鑒定有，是鑒定(jindng)(jindng)B B細胞可靠的指標。細胞可靠的指標。 CD19/CD5CD19/CD5分子：可將分子：可將B B細胞區分為細胞區分為B1B1細胞和細胞和B2B2細胞，細胞，B1B1細胞為細胞為CD19CD19和和CD5CD5雙陽性，而雙陽性，而B2B2細胞僅為細胞僅為CD19CD19陽性，陽性，B2B2細胞為通常所指的細胞為通常所指的B B細胞細胞。 第二十八頁，共四十一頁。三、三、NKNK細胞細胞(xbo)(xbo)表面標志表面標志 人類人類NK細胞表面標志主要以細

10、胞表面標志主要以CD16、CD56來認定，臨床來認定，臨床(lnchun)上將上將CD3-CD56+CD16+淋巴細胞認定為淋巴細胞認定為NK細胞。細胞。第二十九頁，共四十一頁。T細胞(xbo)及NK細胞第三十頁，共四十一頁。第三節第三節 其他其他(qt)(qt)的免疫細胞的免疫細胞抗原提呈類細胞抗原提呈類細胞(xbo)表面標志表面標志第三十一頁，共四十一頁。第四節第四節 免疫細胞表面免疫細胞表面(biomin)(biomin)標志的檢測及標志的檢測及應用應用免疫細胞表面免疫細胞表面(biomin)(biomin)標志的檢測方法標志的檢測方法 淋巴細胞表面標志檢測的臨床意義淋巴細胞表面標志檢測

11、的臨床意義第三十二頁，共四十一頁。一、免疫細胞一、免疫細胞(xbo)表面標志的檢測表面標志的檢測抗體致敏細胞抗體致敏細胞(xbo)(xbo)花環法花環法 免疫細胞化學法免疫細胞化學法 免疫熒光法免疫熒光法 流式細胞分析法流式細胞分析法 第三十三頁，共四十一頁。二、淋巴細胞表面標志二、淋巴細胞表面標志(biozh)(biozh)檢測的臨床檢測的臨床意義意義 淋巴細胞表面標志檢測是評價免疫功能的重淋巴細胞表面標志檢測是評價免疫功能的重要要(zhngyo)(zhngyo)指標。指標。 對對CD4+CD4+和和CD8+TCD8+T細胞的測定，有助于免疫細胞的測定，有助于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和移

12、植排斥缺陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反應的監測。反應的監測。 第三十四頁，共四十一頁。臨床(lnchun)常見疾病中的T淋巴細胞的變化第三十五頁，共四十一頁。思考題思考題1.1.免疫細胞都包括哪些細胞？為什么要將其分離免疫細胞都包括哪些細胞？為什么要將其分離(fnl)(fnl)純純化？化？2.2.淋巴細胞有哪幾類細胞？能用形態學的方法加以淋巴細胞有哪幾類細胞？能用形態學的方法加以區別嗎？區別嗎？3.3.將細胞分離的原理有哪些？各有什么特點？將細胞分離的原理有哪些？各有什么特點？4.4.形態學相同的一類細胞為什么還要分亞群？形態學相同的一類細胞為什么還要分亞群？5.T5.T細胞和細胞和B B

13、細胞進一步區分亞群的依據是什么？細胞進一步區分亞群的依據是什么？第三十六頁，共四十一頁。6.6.什么是細胞表面標志？其作用是什么？什么是細胞表面標志？其作用是什么？7.7.細胞表面標志的檢測方法有哪些？細胞表面標志的檢測方法有哪些？8.8.利用細胞表面標志（利用細胞表面標志（CDCD抗原）分離細胞的方法有哪抗原）分離細胞的方法有哪幾種？幾種？9.T9.T細胞、細胞、B B細胞、細胞、NKNK細胞、單核細胞的主要細胞、單核細胞的主要(zhyo)(zhyo)生生物標志是什么？物標志是什么？10.10.淋巴細胞表面標志檢測的臨床意義是什么？淋巴細胞表面標志檢測的臨床意義是什么？第三十七頁，共四十一頁

14、。小小 結結 淋巴細胞并不是功能單一的群體，但其在光學淋巴細胞并不是功能單一的群體，但其在光學顯微鏡下的形態基本是一樣的，因此要對其進顯微鏡下的形態基本是一樣的，因此要對其進行進一步的分類和觀察就不能采用形態學的方行進一步的分類和觀察就不能采用形態學的方法法(fngf)(fngf)，而要依靠對其表面標志的檢測。常，而要依靠對其表面標志的檢測。常用于鑒定和檢測計數淋巴細胞的表面標志是用于鑒定和檢測計數淋巴細胞的表面標志是CDCD抗原。抗原。第三十八頁，共四十一頁。 進一步區分淋巴細胞亞群可使某一類淋巴細胞進一步區分淋巴細胞亞群可使某一類淋巴細胞的功能趨向一致和單一。但目前看來，還很少的功能趨向一

15、致和單一。但目前看來，還很少有只通過一個有只通過一個CDCD抗原就能將某一類淋巴細胞亞抗原就能將某一類淋巴細胞亞群指示出來的群指示出來的CDCD抗原，抗原，CDCD抗原指示出來的淋抗原指示出來的淋巴細胞亞群多數都是相對巴細胞亞群多數都是相對(xingdu)(xingdu)特異。特異。第三十九頁，共四十一頁。根據根據T T細胞的免疫效應功能細胞的免疫效應功能(gngnng)(gngnng)和表面和表面CDCD分分子表達至少可以分為：輔助性子表達至少可以分為：輔助性T T細胞、細胞毒細胞、細胞毒性性T T細胞和調節性細胞和調節性T T細胞；細胞；SmIgSmIg為為B B細胞所特細胞所特有，是鑒定有，是鑒定B B細胞可靠的指標，以細胞可靠的指標，以CD5CD5和和CD19CD19為標志可將為標志可將B B細胞分為細胞分為B1B1和和B2B2兩個亞群；目前兩個亞群；目前多以多以CD3-CD3-、CD16+CD16+、CD56+ CD56+ 作為作為NKNK細胞的典型細胞的典型標志。標志。第四十頁，共四十一頁。內容(