1、水產品中己烯雌酚快速檢測方法試驗分析    摘要對一種快速檢測水產品中己烯雌酚殘留量ELISA方法進行試驗分析,結果表明:在0.159.00ng/mL濃度范圍內,回歸方程y=-13.141Ln(x)+43.52,相關系數R2=0.994 8;相對平均偏差為3.0%11.6%;回收率為73%96%;樣品檢測下限為0.075ng/g;定量下限為0.25ng/g;操作過程簡單,檢測成本低,檢測時間短,因而該方法適用于大批量水產品中己烯雌酚殘留量快速檢測。 關鍵詞水產品;己烯雌酚;ELISA;快速檢測 中圖分類號 S912 文獻標識碼A文章編號 1007-573

2、9(2009)15-0347-01 己烯雌酚(Diethylstilbestrol,DES)是一種人工合成的雌性激素,應用于水產養殖中能夠促進蛋白質同化,提高飼料轉化率,同時促進魚蝦類生長。但因其在水產動物中代謝較慢且作用頑強,極小的殘留都會對人體生理功能產生影響,主要危害是擾亂人體激素平衡,并具有致癌性,現已被禁止應用于水產養殖中,規定水產品中不得檢出己烯雌酚1。為此,從2002年開始我國要求水產品中己烯雌酚殘留量的檢出限為0.6 g/kg,歐盟要求以2g/kg為陽性下限。目前,己烯雌酚常用的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC)和酶聯免疫法(ELISA),但是HPLC法2在檢出限上不能滿足要

3、求;ELISA法3是目前水產品中DES殘留檢測的標準方法,但也存在樣品處理過程復雜、檢測時間長、成本高等不足。為了尋求一種經濟、簡便、靈敏、特異性強的測定方法,筆者對一種快速檢測水產品中己烯雌酚殘留量的ELISA方法進行試驗分析,現將結果報告如下。 1材料與方法 1.1儀器與試劑 Lab system MK3型酶標儀、METTLER PB602-N電子天平、N- EVAP氮吹儀、LRH-150S恒溫培養箱、移液器(10L、20L、100L和1mL各1支)、多道移液器(50300L)。 美國Bioo MaxSignalTM己烯雌酚ELISA試劑盒、乙酸乙酯、正己烷、無水CaCl2。 1.2測定方

4、法 2結果與分析 2.1線性范圍 分別計算標準、質控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值:相對吸光度值(%)=(標準或樣品吸光度值/零標準吸光度值)×100;以相對吸光度值為縱坐標,標準濃度為橫坐標建立標準曲線(見圖1)。 2.2精密度和回收率 從標準曲線上讀取質控和樣品的濃度值,計算南美白對蝦和湖蟹樣品的精密度和回收率(見表1、表2)。 2.3檢測限 從圖1可知,0.159.00ng/mL濃度范圍內,標準曲線線性關系良好,因此根據標準曲線范圍內最低濃度0.15ng/mL,計算樣品檢測下限=0.15ng/mL×1mL×6mL/(4mL×3g)=0.075

5、ng/g;根據標準曲線范圍內次低濃度為0.5ng/mL,計算樣品定量下限=0.5ng/mL×1mL×6mL/(4mL×3g)=0.25ng/g。 2.42種方法檢測DES比較 2種方法檢測DES的成本、時間比較見表3。 3結論與討論 通過以上試驗可知,快速檢測水產品中己烯雌酚的方法在檢測限、定量范圍、精密度、回收率(73%96%>70%)等技術指標上都滿足標準3規定的要求;將其與德國r-biopharm己烯雌酚ELISA試劑盒相比,操作過程簡單,檢測成本低,檢測時間短,因而該方法非常適于大批量檢測水產品中己烯雌酚殘留含量。同時,在試驗中發現中華絨螯蟹樣品的回收率比南美白對蝦低,而在相同濃度下的相對平均偏差卻較高。這可能與中華絨螯蟹樣品脂肪含量相對較高,提取物經過2次凈化有關。 4參考文獻 1 中華人民共和國農業部.NY5070-2002 無公害食品、水產品中魚藥殘留限量S.北京:中國標準出版社,2002. 2 中華人民共和國衛生部.GB/T 5009.108-2003 畜禽肉中己烯雌酚的測定S.北京:中國標準出版社,2002. 3 中華人民共和國農業部.SC/T 3020-2004 水產品中己烯雌酚殘