1、精選優質文檔-傾情為你奉上中性粒細胞堿性磷酸酶在血液病診斷中的應用廖亞仙 浙江衢化醫院檢驗科 摘要:目的探討中性粒細胞堿性磷酸酶(NAP) 染色在血液系統疾病患者診斷與鑒別診斷中的應用意義。方法抽取219例臨床確診的血液病患者和60 名正常健康人(男38例,女22例) 靜脈血,制備血涂片。所有血涂片依改良Gomori 氏法進行ALP 細胞免疫組織化學染色,顯微鏡油鏡觀察100個中性粒細胞,以陽性率和積分記錄結果。結果急性淋巴細胞白血病(ALL) 、再生障礙性貧血(AA) 、多發性骨髓瘤(MM) 、骨髓增殖性疾病MPD患者的NAP 陽性率和積分則明顯高于正常對照組(P <0.05) ,急性

2、髓細胞白血病(AML) 、慢性粒細胞白血病(CML)患者的NAP 陽性率和積分均明顯低于正常對照組(P <0.05)；骨髓增生異常綜合癥(MDS) 者與正常對照組比較則差異無統計學意義(P >0.05)。結論根據NAP 活性的特性在很多血液疾病中都可以把其作為診斷及鑒別診斷的判斷指標。關鍵詞:堿性磷酸酶;中性粒細胞堿性磷酸酶染色;血液病;診斷中性粒細胞堿性磷酸酶( neutrophilic alkalinephosphatase,N A P) 是中性粒細胞的標志酶, 因檢測方法簡便、快速, 在血液系統疾病診斷尤其在類白血病反應與惡性血液病鑒別中有重要的臨床應用價值。為研究N A P

3、 活性對各血液病的診斷、鑒別診斷及療效觀察中的價值, 我們總結了219例血液系統疾病患者NAP 活性觀察,進行對比分析,以探討其在血液系統疾病診斷和鑒別診斷中的應用意義。1 對象和方法1.1臨床資料本組219例血液病均來源于我院血液科20022008年經骨髓涂片細胞學分析、病理檢查及有關實驗室檢查并結合臨床參照文獻1確診病例, 其中男114 例,女105例。病種: 急性髓細胞白血病(AML) 61 例,急性淋巴細胞白血病(ALL)37 例, 再生障礙性貧血(AA) 32 例, 多發性骨髓瘤(MM) 32 例。慢性粒細胞白血病(CML) 23 例,骨髓增殖性疾病(MPD) 19 例, 骨髓增生異

4、常綜合癥(MDS) 15 例,健康人群60例為對照組,其中男38 例,女22 例。患者和健康人群均采集靜脈血制備血涂片2 張。1.2 試劑及儀器1.2.1 試劑NAP 陽性率及積分采用Kaplow 偶氮耦聯法檢測。Kaplow 偶氮偶聯法: 固定液: 25 %甲醛乙醇溶液; 丙二醇緩沖液:0. 05 mmol/ L 2 - 氨基- 2 - 甲基- 1 ,3 -丙二醇溶液(pH9. 75)；基質孵育液(pH9. 4 - 9. 6 新鮮配制) :- 磷酸萘酚鈉20mg 溶于緩沖液20ml , 再加入堅牢藍RR20mg；蘇木素復染液。1.2.2 實驗方法及結果判斷抽取患者及健康體檢者靜脈抗凝血2 m

5、 l, 制成血片。將新鮮血片固定5 s, 水沖待干后, 用底物液37 下作用15 m in, 水沖待干后用蘇木精復染及0.5 % 氨水返藍后即可。N A P 陽性顆粒為紅色。用油鏡觀察100 個中性粒細胞, 根據其胞質內N A P 顆粒的多少從(-) ,(+) ,(+) ,(+) ,(+) 進行分類計數,并記錄陽性率及積分。1.3 細胞染色采用改良Gomori氏法: 將血涂片用新鮮配制的95%乙醇固定10min ,蒸餾水輕洗,待干;基質液按上述方法配好后(以精密PH 試紙測pH 9. 49. 6) 放37 恒溫水浴箱30min ,再將固定好的血片置基質中溫浴5h 以上;取出后在蒸餾水中輕洗,自

6、然干燥后放入20g/ L 硝酸鈷中5min ;蒸餾水輕洗,自然干燥后放入20g/ L 硫化銨5min ;流水沖洗,干燥后置5g/ L 伊紅復染5min ,自來水沖洗,待干燥后鏡檢。1.4 統計學處理采用EpiData3.0軟件建立數據庫，并運用SPSS10.0 統計軟件數據分析。計量資料以x ±s 表示,組間的兩兩比較采用Wilcoxon秩和檢驗分析。2 結果2.1 正常健康人群NAP 陽性率和積分的測定本組正常健康人群中男性NAP 陽性率為28.6% ,積分為39.5 ;女性NAP 陽性率為28.0 % ,積分為38.9。經統計分析正常健康人群中中性粒細胞堿性磷酸酶染色陽性率和積分

7、的值呈偏態分布,對正常健康人群中男性和女性NAP 陽性率和積分結果進行比較,經Wilcoxon秩和檢驗發現，兩組陽性率(P >0.05) 和積分差異均無統計學意義(P>0.05) 。2.2 各型血液系統疾病的NAP 陽性率和積分與正常對照組之間的比較用Wilcoxon秩和檢驗，其中，急性淋巴細胞白血病(ALL) 、再生障礙性貧血(AA) 、多發性骨髓瘤(MM) 、骨髓增殖性疾病MPD患者的NAP 陽性率和積分則明顯高于正常對照組(P< 0.05)，其中以AA的NAP積分均值高于其他各組疾病 ；急性髓細胞白血病(AML) 、慢性粒細胞白血病(CML)患者的NAP 陽性率和積分均

8、明顯低于正常對照組(P<0.05)；骨髓增生異常綜合癥(MDS) 者與正常對照組比較則差異無統計學意義(P>0.05) 。各型血液疾病的NAP陽性率和積分見表1。表1 各型血液系統疾病的NAP 陽性率和積分與對照組的比較病種例數NAP 陽性率( %) NAP 積分AML*6119 ±1126.3 ±15.8ALL*3743 ±2791.3 ±41.2AA* 32 45 ±3794.8±49.9MM* 32 45±2393.4 ±48.9CML* 236.9±126.3±18.0MPD

9、(除外CML)* 19 44±29115.1±79.1MDS 1529 ±2943.1±29.8正常對照組6028 ±1339.0 ±20.1與正常對照組比較,*表示P<0. 05 。3 討論血細胞減少可由造血系統疾病或非造血系統疾病引起, 造血系統引起的血細胞減少常見于AA、AL、MDS、MH、MA、PNH、脾亢等。這類疾病在臨床表現和血液學改變上有許多相似之處, 容易混淆, 疾病初期不易診斷, 極易誤診。本組資料顯示, 在219例血液病患者中, 急性淋巴細胞白血病(ALL) 、再生障礙性貧血(AA) 、多發性骨髓瘤(MM)

10、、骨髓增殖性疾病MPD患者的NAP 陽性率和積分則明顯高于正常對照組；急性髓細胞白血病(AML) 、慢性粒細胞白血病(CML)患者的NAP 陽性率和積分均明顯低于正常對照組。NAP 是中性粒細胞的標志酶,主要存在于成熟中性粒細胞內,是其胞質特殊顆粒釋放的一種在堿性條件(pH9.39.6) 能催化各種醇和酚的單磷酸酯水解的非特異性水解酶。NAP 活力可反映成熟粒細胞的成熟程度和功能,當中性粒細胞活化后,NAP 陽性率及積分升高2 。在本組219例血液病患者中,再生障礙性貧血(AA) 32 例，AA 的NA P積分均值高于其他各組疾病與對照組。AA可因中性粒細胞顆粒增加, 細胞返祖, 常伴有感染及

11、激素治療等因素的影響, 使NA P 活性持續增高。經過觀察,AA 在緩時NA P 積分有下降趨勢, 但很難恢復正常。不論是早期AA 和局灶性非典型AA ,NA P活性都呈顯著增加, 因此NAP積分值持續增高, 可視為AA 的重要早期診斷標準。有研究表明， AA 患者不管早期、晚期、典型、不典型以及治療前后，其NAP 酶活性均處于極高峰點狀態的特異性和敏感性表現，這是其他任何貧血都無法相比的。因此，NAP 可作AA 重要的特異的敏感的診斷指標3,4。綜上所述,NAP 活性觀察對血液系統疾病的診斷與鑒別診斷有非常重要的意義。參考文獻:1 張之南, 沈悌.血液病診斷及療效標準M .第2 版.北京: 科學出版社,