1、題目微生物計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)驗(yàn)證方案文件編號(hào)SOP-YZ-6303制訂人制定日期年月曰版本號(hào)B審核人審核日期年月曰頁碼16/9批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期年月曰修改狀態(tài)0頒發(fā)部門質(zhì)量部生效日期年月曰分發(fā)份數(shù)分發(fā)部門質(zhì)量部1 .概述：培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。供試品微生物限度檢查中所使用的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行適用性檢查。2 .驗(yàn)證目的：本次驗(yàn)證的目的是確認(rèn)需氧菌總數(shù)、霉菌及酵母菌總數(shù)檢查用的胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基、胰酪大豆豚液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的質(zhì)量，以及其制備程序、保存條件等是否滿足微生物限度檢查用要求。3 .驗(yàn)證依

2、據(jù)：中國藥典2015年版四部“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法”、“9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則”。4 .驗(yàn)證項(xiàng)目：胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基、胰酪大豆豚液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查。5 .適用范圍：成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查。小組人員職務(wù)姓名簽字所在部門職務(wù)組長質(zhì)量部質(zhì)量總監(jiān)組員質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室QC主任組員質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室微生物QC6 .驗(yàn)證周期：除另有規(guī)定外，在實(shí)驗(yàn)室中，若采用已驗(yàn)證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗(yàn)可以只進(jìn)行一次。如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗(yàn)證，那么每一滅菌批培養(yǎng)基均要

3、進(jìn)行適用性檢查試驗(yàn)。7 .驗(yàn)證小組人員及職責(zé):7.1 驗(yàn)證小組人員題目微生物計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)驗(yàn)證方案頁碼17/9編號(hào)SOP-YZ-6303版本號(hào)B修改狀態(tài)07.2 驗(yàn)證人員職責(zé)及要求7.2.1 按驗(yàn)證方案及相關(guān)文件實(shí)施驗(yàn)證。7.2.2 認(rèn)真觀察并做好驗(yàn)證原始記錄。7.2.3 對(duì)實(shí)施驗(yàn)證的結(jié)果負(fù)責(zé)。7.3 驗(yàn)證中各部門的職責(zé)7.3.1 驗(yàn)證領(lǐng)導(dǎo)組職責(zé)7.3.1.1 制訂驗(yàn)證總計(jì)劃，負(fù)責(zé)全公司驗(yàn)證工作的管理。7.3.1.2 確定驗(yàn)證項(xiàng)目及驗(yàn)證項(xiàng)目負(fù)責(zé)人。7.3.1.3 負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的批準(zhǔn)工作。7.3.1.4 負(fù)責(zé)驗(yàn)證資料及結(jié)果的審核工作。7.3.1.5 負(fù)責(zé)驗(yàn)證報(bào)告的批準(zhǔn)工作。7.3.2 驗(yàn)證

4、項(xiàng)目小組職責(zé)7.3.2.1 負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的起草工作。7.3.2.2 參與驗(yàn)證方案的討論、確認(rèn)工作。7.3.2.3 負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的實(shí)施。7.3.2.4 負(fù)責(zé)驗(yàn)證結(jié)果的分析、統(tǒng)計(jì)、報(bào)告工作。7.3.2.5 參與驗(yàn)證結(jié)果的評(píng)價(jià)工作。7.3.3 質(zhì)量部職責(zé)7.3.3.1 負(fù)責(zé)公司驗(yàn)證日常管理工作。7.3.3.2 負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的審核工作。7.3.3.3 負(fù)責(zé)驗(yàn)證過程中儀器、儀表、計(jì)量器具的校驗(yàn)工作。7.3.3.4 負(fù)責(zé)檢驗(yàn)儀器及檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證。7.3.3.5 負(fù)責(zé)驗(yàn)證中各項(xiàng)檢測(cè)工作，提供驗(yàn)證的檢驗(yàn)記錄、檢驗(yàn)報(bào)告，對(duì)驗(yàn)證過程中的各項(xiàng)檢驗(yàn)工作負(fù)責(zé)。題目微生物計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)驗(yàn)證方案頁碼18/9編號(hào)SOP

5、-YZ-6303版本號(hào)B修改狀態(tài)07.3.3.6 負(fù)責(zé)對(duì)驗(yàn)證人員的培訓(xùn)、考核工作7.3.3.7 負(fù)責(zé)驗(yàn)證資料和報(bào)告的審核工作。7.3.3.8 負(fù)責(zé)驗(yàn)證文件回收、歸檔管理工作8 .合格標(biāo)準(zhǔn)：8.1 被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致；8.2 被檢液體培養(yǎng)基管與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好。9 .驗(yàn)證實(shí)施條件9.1 驗(yàn)證方案培訓(xùn)：在驗(yàn)證實(shí)施前，應(yīng)對(duì)參與驗(yàn)證的人員進(jìn)行驗(yàn)證方案以及與驗(yàn)證相關(guān)的文件進(jìn)行培訓(xùn)，確保相關(guān)人員掌握了驗(yàn)證的相關(guān)要求與知識(shí)。9.2 微生物限度檢測(cè)室：檢驗(yàn)所使用的檢測(cè)室應(yīng)經(jīng)過HVA僚統(tǒng)確認(rèn)

6、，并符合要求。9.3 檢驗(yàn)用水：驗(yàn)證過程使用的純化水其制備系統(tǒng)應(yīng)經(jīng)過確認(rèn)并符合要求，純化水質(zhì)量應(yīng)經(jīng)過檢驗(yàn)并符合中國藥典2015年版二部的要求。9.4 檢驗(yàn)儀器設(shè)備：驗(yàn)證涉及的檢驗(yàn)儀器（設(shè)備）與檢驗(yàn)方法，應(yīng)經(jīng)過技術(shù)監(jiān)督局校驗(yàn)合格或者公司確認(rèn)/驗(yàn)證合格。9.5 驗(yàn)證菌種：驗(yàn)證所使用的菌種，其種類與傳代次數(shù)應(yīng)符合中國藥典的相關(guān)要求。菌種情況見附件2:菌種確認(rèn)。10 .驗(yàn)證過程10.1 菌液制備10.1.1 取經(jīng)30-35C培養(yǎng)18-24h的銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌的新鮮培養(yǎng)物1ml加入9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍遞增稀釋至10-6-10-8,約為0100cfu/ml的菌懸

7、液備用。10.1.2 取經(jīng)20-25C培養(yǎng)2-3天的白色念珠菌、黑曲霉的液體培養(yǎng)物1ml,加入題目微生物計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)驗(yàn)證方案頁碼19/9編號(hào)SOP-YZ-6303版本號(hào)B修改狀態(tài)09m10.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍遞增稀釋至10-5-10-8,約為0100cfu/ml的菌懸液備用。10.2 實(shí)驗(yàn)操作10.2.1 胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基：取11個(gè)無菌平皿，分別接種上述銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接種1ml菌液（接種量0100cfu），另1平皿不接種菌作為空白對(duì)照，傾注對(duì)照胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固后于3035c倒置培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過

8、3天（白色念珠菌、黑曲霉培養(yǎng)時(shí)間不超過5天）,計(jì)數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。10.2.2 胰酪大豆豚液體培養(yǎng)基：新鮮配制10ml/支的對(duì)照胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基7支，121C滅菌15min,備用。取6支，分別接種上述銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌各2支，每支接種1ml菌液（接種量0100cfu）,另1支不接種菌作為空白對(duì)照；被檢培養(yǎng)基同法操作。置3035c培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過3天，分別觀察結(jié)果。10.2.3 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：取5個(gè)無菌平皿，分別接種上述白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接種1ml菌液（接種量0100cfu）,另1平皿不接種菌作為空白對(duì)照，傾注對(duì)照沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混

9、勻，凝固后于2025c倒置培養(yǎng)培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過5天，計(jì)數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。10.3 .檢查結(jié)果：見附件5:計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果11 .異常情況與偏差處理：當(dāng)出現(xiàn)偏差時(shí)，應(yīng)按偏差處理管理規(guī)程進(jìn)行處理。12 .驗(yàn)證結(jié)果評(píng)定、結(jié)論與建議驗(yàn)證小組組長負(fù)責(zé)收集各項(xiàng)驗(yàn)證、試驗(yàn)記錄，根據(jù)驗(yàn)證、試驗(yàn)結(jié)果對(duì)驗(yàn)證效果進(jìn)行綜合評(píng)審，起草驗(yàn)證報(bào)告、做出驗(yàn)證結(jié)論。對(duì)驗(yàn)證結(jié)果的評(píng)審應(yīng)包括以下內(nèi)容：12.1 驗(yàn)證試驗(yàn)是否有遺漏？12.2 驗(yàn)證實(shí)施過程中對(duì)驗(yàn)證方案有無修改？修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過批題目微生物計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)驗(yàn)證方案頁碼20/9編號(hào)SOP-YZ-6303版本號(hào)B修改狀態(tài)0準(zhǔn)？12.3 驗(yàn)證

10、記錄是否完整？12.4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求？偏差及對(duì)偏差的說明是否合理？是否需要進(jìn)一步補(bǔ)充試驗(yàn)？13 .附件13.1 附件1:驗(yàn)證實(shí)施條件確認(rèn)13.2 附件2:培養(yǎng)基確認(rèn)13.3 附件3:菌種確認(rèn)13.4 附件4:菌液濃度確定13.5 附件5:計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果13.6 附件6:驗(yàn)證結(jié)果審批表附件1:設(shè)施設(shè)備驗(yàn)證確認(rèn)設(shè)施設(shè)備名稱驗(yàn)證報(bào)告編號(hào)驗(yàn)證結(jié)果實(shí)驗(yàn)室HVAC系統(tǒng)純化水系統(tǒng)LDZX-40A型立式自控電熱壓力PSH-500A型生化培養(yǎng)箱303AS-2型電熱恒溫隔水式培養(yǎng)SW-CJ-1C型雙人凈化工作臺(tái)確認(rèn)結(jié)論:確認(rèn)人:確認(rèn)日期:題目微生物計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)驗(yàn)證方案頁碼21/

11、9編號(hào)SOP-YZ-6303版本號(hào)B修改狀態(tài)0附件2:培養(yǎng)基確認(rèn)fe笠廣生名布卜來源批號(hào)功效期至胰酪大豆月東瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基沙氏葡.萄糖瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆月東瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基胰酪大豆月東液體對(duì)照培養(yǎng)基沙氏葡.萄糖瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基確認(rèn)結(jié)論:確認(rèn)人：確認(rèn)日期:附件3:菌種確認(rèn),白笠廣丕名布卜來源批號(hào)枯草芽抱桿菌CMCC(B)63501銅綠假單胞菌CMCC(B)10104金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003白色念珠菌CMCC(F)98001黑曲霉CMCC(F)98003確認(rèn)結(jié)論:確認(rèn)人：確認(rèn)日期:題目微生物計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)驗(yàn)證方案頁碼22/9編號(hào)SOP-YZ-6303版本號(hào)B修改狀

12、態(tài)0結(jié)論：根據(jù)要求,附件4:菌液濃度確定10-310-410-510-610-7Inminminminminm銅綠假單胞菌皿1皿2金黃色葡萄球菌皿1皿2大腸埃希菌皿1皿2枯草芽抱桿菌皿1皿2白色念珠菌皿1皿2白色念珠菌（沙氏）皿1皿2黑曲霉皿1皿2黑曲霉（沙氏）皿1皿2銅綠假單胞菌：枯草芽抱桿菌黑曲霉（胰酪）稀釋金黃色葡萄球菌：稀釋白色念珠菌（胰酪）:稀釋黑曲霉（沙氏）：稀釋:稀釋稀釋大腸埃希菌：稀釋白色念珠菌（沙氏）：稀釋檢驗(yàn)人檢驗(yàn)時(shí)間年月日-年月日復(fù)核人復(fù)核時(shí)間年月曰菌數(shù)要控制在每1ml中含菌數(shù)在0100cfu,因此，我們確定菌液制備:題目微生物計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)驗(yàn)證方案頁碼23/9編號(hào)

13、SOP-YZ-6303版本號(hào)B修改狀態(tài)0附件5:計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果/口加小驗(yàn)證菌株皿號(hào)被機(jī)足生cfu/ml對(duì)照玷加生cfu/ml比值0.5-2圍洛形態(tài)大小生長情況胰酪大豆月東瓊脂培加丕(3035C,W3天)*白色念珠菌、黑曲霉w5天銅綠假單胞菌12平均金原/色葡萄球12平均枯草芽胞桿菌12平均白色念珠菌12平均黑曲霉12平均空白1胰酪大豆月東液體培加丕(3035C,W3天)銅綠假單胞菌12金更色葡萄球12枯草芽胞桿菌12空白1一沙氏葡萄糖瓊脂培加丕(232町72用白色念珠菌12平均黑曲霉12平均空白1檢驗(yàn)人檢驗(yàn)時(shí)間年月日-年月曰復(fù)核人復(fù)核時(shí)間年月曰文件湖北*藥業(yè)有限公司微生物計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)驗(yàn)證方案頁碼24/9SOP-Y