1、精選課件 最終滅菌注射劑質量控制最終滅菌注射劑質量控制 精選課件污染微生物的來源污染微生物的來源內源性的影響因素內源性的影響因素l空氣凈化系統空氣凈化系統l水水l工藝過程工藝過程l物料物料 外源性的影響因素外源性的影響因素l人員人員 精選課件芽孢是關鍵控制點芽孢是關鍵控制點G+G-微生物無處不在微生物無處不在氣源性微生物革蘭氏陽性菌較多它氣源性微生物革蘭氏陽性菌較多它們可形成芽孢，難以殺滅們可形成芽孢，難以殺滅因此，藥品生產需要因此，藥品生產需要HVAC水源性則革蘭氏陰性菌居多水源性則革蘭氏陰性菌居多不會生成孢子不會生成孢子但會形成細菌內毒素但會形成細菌內毒素精選課件一、什么是芽孢？當某些細菌

2、遇到不良生存環境條件時，為保護自身，在細胞內形成一外壁厚而堅硬的體眠體，該體眠體即稱芽孢（Spore）或孢子。由于其對不良環境的耐受性遠高于生長態細胞，常被用于挑戰滅菌工藝，以確認被滅菌物品無菌的可靠性。精選課件芽孢的特性主要產生于Gram+ 細菌的兩個屬l芽孢桿菌屬 Bacillusl梭菌屬 Clostridium能抵御各種惡劣環境，可存活上百萬年，因為它l有厚的皮層結構l僅含核酸及少量萌發必需物l含水量極低休眠體，內生孢子，不可再生（每個細胞只產生一個芽孢）；真菌孢子屬于分生孢子，不具上述特性。精選課件細菌芽胞（孢）的形成及其特性成熟芽孢孢子壁母細胞孢子壁的形成生長態細胞精選課件熱對活細胞

3、的作用q有一種可引發克雅氏綜合癥 (Creutzfekldt- Jakob）的普里昴 ( prion）病原體，在132下加 一小時才可完全殺滅（克雅氏綜合癥：俗稱人體瘋牛病）q需氧菌中的芽孢桿菌屬(Bacillus)和厭氧菌中的梭狀芽孢桿菌屬(Clostridium)，耐熱性較強q它們能產生內源性孢子/芽孢，或胞間休眠體，對熱、干燥及化學消毒劑的耐受性大大增強q這類芽孢的干熱滅菌溫度一般在100 170，濕熱滅菌的溫度則在80 129之間。精選課件從從“欣弗欣弗”事件談滅菌工藝事件談滅菌工藝欣弗事件的發生欣弗事件的發生l20062006年年7 7月月l安徽華源l克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液l不良

4、事件報告81例，涉及10個省份精選課件欣弗到底怎么了？欣弗到底怎么了？精選課件克林霉素磷酸酯注射劑產品的調查克林霉素磷酸酯注射劑產品的調查克林霉素磷酸酯氯化鈉注射克林霉素磷酸酯氯化鈉注射（100ml:0.6g100ml:0.6g）l采用半無菌工藝生產采用半無菌工藝生產l滅菌條件滅菌條件100100、7 7分鐘分鐘l貯存條件貯存條件陰涼陰涼l有效期有效期1 1年年l有些企業的處方中含有有些企業的處方中含有苯甲醇苯甲醇l穩定性考察穩定性考察有一批留樣的有關物質為有一批留樣的有關物質為7.9l有關物質有關物質總雜不得過總雜不得過8.0 單雜不得過單雜不得過5.0精選課件克林霉素磷酸酯注射劑產品的調查

5、克林霉素磷酸酯注射劑產品的調查克林霉素磷酸酯注射液克林霉素磷酸酯注射液（2ml:0.3g2ml:0.3g）l滅菌條件滅菌條件100100、3 31010分鐘分鐘l貯存條件貯存條件遮光、密閉保存遮光、密閉保存l有效期有效期2 2年年l處方中含有苯甲醇處方中含有苯甲醇l有關物質有關物質總雜不得過總雜不得過6.06.0（20042004年底改年底改為為8.08.0）單雜不得過單雜不得過4.04.0精選課件從上述調查從上述調查看國內滅菌注射劑生產的缺陷看國內滅菌注射劑生產的缺陷對滅菌的認識不正確對滅菌的認識不正確產品研發未考慮滅菌產品研發未考慮滅菌工藝的可行性工藝的可行性忽視工藝的可行性，忽視工藝的可

6、行性，盲目跟風報批盲目跟風報批注射劑用原料藥的雜注射劑用原料藥的雜質控制不嚴質控制不嚴忽視產品的安全性忽視產品的安全性精選課件中國醫藥報中國醫藥報 2007年年1月月4日日 A6版版精選課件無菌藥品常用滅菌工藝的比較無菌藥品常用滅菌工藝的比較類別類別Fo值值微生物存活概率微生物存活概率要點說明要點說明過度過度殺滅法殺滅法Fo1210-6熱穩定性產品熱穩定性產品以殺滅微生物作為實現無菌的手段以殺滅微生物作為實現無菌的手段殘存殘存概率法概率法8Fo710-3不能加熱的產品不能加熱的產品不能除去病毒、支原體等微生物不能除去病毒、支原體等微生物LRV=log reduction value 過濾對數下

7、降值一過濾對數下降值一般上游為般上游為107下游為下游為1，則，則LRV=7由于操作較多，最終產品達到的無菌保證水由于操作較多，最終產品達到的無菌保證水平遠低于除菌過濾的水平平遠低于除菌過濾的水平精選課件影響濕熱滅菌效果的因素影響濕熱滅菌效果的因素待滅菌產品中含有微生物的種類和數量待滅菌產品中含有微生物的種類和數量待滅菌產品的包裝形式待滅菌產品的包裝形式待滅菌產品的裝載方式和裝載數量待滅菌產品的裝載方式和裝載數量濕熱滅菌工藝條件濕熱滅菌工藝條件濕熱滅菌設備濕熱滅菌設備精選課件無菌保證水平無菌保證水平SAL無菌保證水平無菌保證水平（Sterility Assurance Sterility As

8、surance LevelLevel）l表示物品被滅菌后的無菌狀態表示物品被滅菌后的無菌狀態l按國際標準，濕熱滅菌法的無菌保證值不得低按國際標準，濕熱滅菌法的無菌保證值不得低于于10-6，即滅菌后微生物存活的概率不得大于，即滅菌后微生物存活的概率不得大于百萬分之一。百萬分之一。精選課件滅菌工藝驗證的必要性滅菌工藝驗證的必要性滅菌產品的無菌保證不能依賴于最終產品滅菌產品的無菌保證不能依賴于最終產品的無菌檢驗，而是取決于生產過程中采用的無菌檢驗，而是取決于生產過程中采用合格的滅菌工藝、嚴格的合格的滅菌工藝、嚴格的GMPGMP管理和良好管理和良好的無菌保證體系的無菌保證體系滅菌工藝的驗證是無菌保證的

9、必要條件滅菌工藝的驗證是無菌保證的必要條件滅菌工藝經過驗證后，方可正式用于生產滅菌工藝經過驗證后，方可正式用于生產精選課件國內企業滅菌工藝驗證常見缺陷國內企業滅菌工藝驗證常見缺陷無包裝規格無包裝規格無裝載方式無裝載方式未對每一種產品每一種包裝規格的每一種裝載方未對每一種產品每一種包裝規格的每一種裝載方式進行驗證式進行驗證采用留點溫度計監測溫度采用留點溫度計監測溫度無溫度探頭校準記錄無溫度探頭校準記錄驗證的滅菌工藝與實際工藝不一致驗證的滅菌工藝與實際工藝不一致未驗證最差滅菌條件未驗證最差滅菌條件設定的驗證合格標準達不到無菌保證水平（設定的驗證合格標準達不到無菌保證水平（SAL）10-6生物指示劑

10、使用不規范生物指示劑使用不規范精選課件滅菌工藝檢查要點滅菌工藝檢查要點生產環境和待滅菌產品中含有微生物的種類和數生產環境和待滅菌產品中含有微生物的種類和數量研究和監控量研究和監控待滅菌產品的包裝形式、裝載方式和裝載數量待滅菌產品的包裝形式、裝載方式和裝載數量滅菌工藝條件滅菌工藝條件滅菌設備滅菌設備l關鍵控制參數的控制和記錄儀表的校準關鍵控制參數的控制和記錄儀表的校準l設備維護和維修設備維護和維修滅菌的記錄滅菌的記錄滅菌工藝的驗證滅菌工藝的驗證l選用的生物指示劑選用的生物指示劑l熱分布試驗，找出最冷點位置熱分布試驗，找出最冷點位置無菌檢驗樣品的取樣無菌檢驗樣品的取樣精選課件無菌檢查無菌檢查精選課

11、件無菌檢查的局限性無菌檢查的局限性無菌的定義無菌的定義l理論上：無菌沒有任何活的微生物理論上：無菌沒有任何活的微生物l實際上：我們無法證明產品中沒有活微生物存在實際上：我們無法證明產品中沒有活微生物存在無法對整批產品進行無法對整批產品進行100%100%檢驗檢驗l無菌檢驗的結果只是一個基于無菌檢驗的結果只是一個基于“可能性可能性”的判斷的判斷無菌檢驗用培養基有其局限性無菌檢驗用培養基有其局限性l只進行細菌和真菌的檢驗只進行細菌和真菌的檢驗l對實驗結果的判定是基于對實驗結果的判定是基于“是否在培養基中生長是否在培養基中生長”l培養條件（如溫度和時間）是有限的培養條件（如溫度和時間）是有限的我們的

12、工作環境及操作是在相對無菌的狀態我們的工作環境及操作是在相對無菌的狀態精選課件美國非腸道藥物學會注射劑無菌測試結果美國非腸道藥物學會注射劑無菌測試結果試驗目的：不合格的可能性試驗目的：不合格的可能性(%)試驗批量：試驗批量：60,000支支試驗方法：按美國藥典無菌測試方法試驗方法：按美國藥典無菌測試方法真實的不合格率真實的不合格率測試測試20支樣品支樣品不合格的可能性不合格的可能性測試測試40支樣品支樣品不合格的可能性不合格的可能性118.2%33.1%564.2%87.2%1596.1%99.8%3099.9%100.0%精選課件上述無菌測試結果的啟示上述無菌測試結果的啟示含有少量微生物污染

13、產含有少量微生物污染產品的批次也有可能品的批次也有可能“通通過過”無菌檢驗無菌檢驗一批產品的染菌率越低，一批產品的染菌率越低，根據無菌檢驗的結果來根據無菌檢驗的結果來判定整批產品的無菌，判定整批產品的無菌，其風險就越大其風險就越大精選課件如何用無菌檢驗來證明整批產品無菌如何用無菌檢驗來證明整批產品無菌要求有一個取樣計要求有一個取樣計劃來涵蓋整個批號劃來涵蓋整個批號有足夠的取樣量和有足夠的取樣量和檢驗量檢驗量選擇適用的培養基選擇適用的培養基采用經驗證的無菌采用經驗證的無菌檢驗方法檢驗方法良好的環境監控良好的環境監控精選課件檢驗標準制定依據檢驗標準制定依據2003驗證指南驗證指南 QC-751E注

14、射劑藥液過濾前含菌量測定注射劑藥液過濾前含菌量測定M-00 061A 注射劑滅菌前藥液污染水注射劑滅菌前藥液污染水平及耐熱性檢查平及耐熱性檢查精選課件大容量注射劑舉例大容量注射劑舉例滅菌前藥液的含微生物的計算過程：滅菌前藥液的含微生物的計算過程：根據根據2003版藥品上產驗證指南版藥品上產驗證指南 lgP=lgN-F0/D121P:滅菌后產品內微生物存活概率滅菌后產品內微生物存活概率 N:滅菌前藥液的含耐熱孢子的量滅菌前藥液的含耐熱孢子的量 D121:微生物耐熱參數，系指一定溫度下將微生物殺微生物耐熱參數，系指一定溫度下將微生物殺滅滅90%或使之下降一個對數單位所需的時間（分）或使之下降一個對

15、數單位所需的時間（分）lgN = lgP+F0/D121= lgP+FT/DT(N值與值與FT成成正比，與正比，與DT成反比成反比)該產品（葡萄糖）采用該產品（葡萄糖）采用115滅菌滅菌32min,產品滅菌的產品滅菌的F08,為更嚴格的控制滅菌前產品的生物負載，為更嚴格的控制滅菌前產品的生物負載，F0取取8計算。計算。精選課件大容量注射劑舉例大容量注射劑舉例DT與生產環境，以及過濾截留得到的微生與生產環境，以及過濾截留得到的微生物有關，需要確認污染微生物的耐熱性，物有關，需要確認污染微生物的耐熱性，在未檢測到耐熱微生物時，在未檢測到耐熱微生物時，DT通常按通常按1計算。為更嚴格的控制滅菌前產品

16、的生物計算。為更嚴格的控制滅菌前產品的生物負載，負載， 取取DT 為為1計算。計算。lgN =lg10-6 +8/1 N=100CFU/袋（產品規格為袋（產品規格為250ml）N=40CFU/100ml精選課件檢測重點檢測重點污染水平污染水平微生物耐熱性微生物耐熱性精選課件取樣取樣 滅菌前藥液直接取樣，每個樣品取樣大滅菌前藥液直接取樣，每個樣品取樣大容量注射劑（兩個最小包裝，最少各容量注射劑（兩個最小包裝，最少各 100mL）。小容量注射劑兩份，最少）。小容量注射劑兩份，最少各各100mL。滅菌后取樣大容量注射劑各約滅菌后取樣大容量注射劑各約50mL。精選課件檢測方法檢測方法污染水平檢查污染水平檢查l先用滅菌的含先用滅菌的含5吐溫吐溫80的的pH7.0氯氯化鈉蛋白胨潤濕化鈉蛋白胨潤濕0.45m濾膜，然后過濾膜，然后過濾濾100mL滅菌前藥液，有抑菌性的藥滅菌前藥液，有抑菌性的藥液需用已驗證量的緩沖液沖洗濾膜，以液需用已驗證量的緩沖液沖洗濾膜，以消除藥液的抑菌性），再以無菌方式將消除藥液的抑菌性），再以無菌方式將濾膜菌面朝上貼于準備好的胰酪胨大豆濾膜菌面朝上貼于準備好的胰酪胨大豆瓊脂培養基（瓊脂培養基（TSA）上，同時做）上，同時做1個陰個陰性對照。胰酪胨大豆瓊脂培養基在性對照。胰酪胨大豆瓊脂培養