1、標準菌株使用標準操作規程標準菌株使用標準操作規程1檢驗目的對實驗室的標準菌株進行合理的保存，并規范合理 的使用流程，保證菌株的性能穩定可靠。2范圍微生物實驗室保存的標準菌株。3職責微生物組工作人員正確執行本操作規程。4術語和定義4.1 標準菌株其特征進行了分類和描述，有明確的來源。ATCC(American Type Culture Collection )美國標準菌株 收藏中心。 4.2標準儲備菌株標準菌株經過一代轉接后獲得的同種菌株。4.3 工作菌株標準儲備菌株傳代后得到的同種菌株。4.4 標準培養物標準菌株、標準儲備菌株、工作菌株的統稱。4.5 質控菌株ATCCg佳，但當無法獲得時可以使

2、用 ATCC反化的菌株或我國國家菌種庫儲存的標準菌株。特殊情況，例如 定性試驗可用已知的菌種作為質控菌株。室間質評的菌 株即可。5保存程序5.1 標準菌株5.1.1 商業購買的ATC礪準菌株干粉，-80 C低溫保存, 可以2年以上。安甑真空包裝的，-80 C可長期穩定保存。 將標準菌株進行編號和登記。5.1.2 復蘇用1ml無菌的小牛血清或營養肉湯溶解。根據菌種的生 長特點，接種到新鮮培養基上選擇適宜的培養條件培養 18-24h。酵母菌要求3天，形成抱子的微生物宜保存抱 子。5.2 標準儲備菌株5.2.1 由復蘇后的ATC礪準菌株制備。復蘇后的標準菌 株要檢查其純度，必要時進行生化試驗檢查。刮

3、取培養 物上的菌體，用足量的菌懸浮于防凍培養基中。防凍液 可以是無菌脫纖維羊血、10旭油肉湯。儲存足夠量的標 準儲備菌株，可用1-2年。一年52周需要52支以上。5.2.2 甘油肉湯保存法成分有蛋白月東、牛肉浸出粉、氯化鈉、甘油、純化木。 相當于20%勺甘油。挑取5環菌落加入到1ml甘油肉湯中 混勻。苛養菌可以適當增加菌量。-80 C保存。除鏈球菌 和嗜血桿菌以外細菌均可使用。保存期限 1-5年。5.2.3 全血保存法成分為脫纖維羊血。挑取5環菌落加入到1ml甘油肉湯 中混勻。苛養菌可以適當增加菌量。-80 C保存。主要用 于保存鏈球菌、嗜血桿菌及厭氧菌。保存期限 1-5年。 5.2.4標準儲

4、備菌株進行編號和登記。5.3 工作標準菌株由標準儲備菌株傳代得到的菌株。標準儲備菌株對 多向下傳三代。過多的傳種會增加變異的機會。標準儲 備菌株根據菌種特點選擇適宜的培養基和培養條件進行 培養18-24h即工作標準菌株。儲存在2-8 C,可放四周。 個別營養要求高的為2周，例如肺炎鏈球菌和嗜血桿菌。 使用時應編號并登記。5.4 編號方法每個菌的保存管都要有唯一的編號，簽字筆標注，便于 查找和管理。來源數字意義購買 的標 準菌 株1501ATCC2592215 年第 1 株 ATCC2592：儲備 標準 菌株1501ATCC25922-3，由 1501ATCC2592裝代 而來的3號標準儲備菌

5、株5.5 記錄管理5.5.1 菌種應有嚴格的登記。每個編號都要有詳細的記錄 包括來源、傳代、保存方法、使用記錄、使用原因、高 壓滅菌記錄等。附表標準菌株記錄表標準儲備菌株 記錄表5.5.2 菌種保管應有專人負責，保存于專用冰箱中，雙人 雙鎖，確保菌種安全。保管人員變動時，必須嚴格交接 手續。5.5.3 各種菌種應按規定時間接種，注意菌種有無污染及 變異，如發現變異時，應及時更換5.5.4 一個使用周期結束后，標準菌株、儲備菌株、工作 菌株都要進行高壓滅菌處理，并做好記錄。6使用流程日質控周質控每周取出一支標準儲備每月取出一支標準儲備I；每周取出一支標準儲備J儲備1-iH-直接作為工作菌株使用，

6、第傳代培養物可以作為第以后的6天 每天都用傳 代培養物傳也可以用最 后一天的的 工作菌株作7天后傳代重新取一直 標準儲備菌作為“儲存標準菌株”進行每天傳代平板作為第二2進行純 度檢查 和生化 鑒定。可以再重復一 周，規則同上。 但一般來說工7質量控制7.1 觀察菌落的典型形態是否符合菌種。有沒有雜菌生長。7.2 用氧化酶、觸酶、上機等生化試驗，鑒定菌種有沒有 變化。7.3 如果有污染或懷疑有問題時，應準備新的首次傳代物 或者獲取新的標準菌株。8參考文獻序 號唯一性編號文獻名稱9.1ISBN978-7-117-19862-2/R 19863全國臨床檢驗操作規程第四 版9.2ISBN978-7-5478-1226-6/R - 395臨床微生物學診斷與圖解