1、醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板第第4 4章章 細(xì)菌細(xì)菌(xjn)(xjn)藥物敏藥物敏感試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)感試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)王輝王輝 北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部第一頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板抗菌藥物(yow)敏感試驗(yàn)測(cè)定抗菌藥物(yow)在體外對(duì)病原微生物有無(wú)抑菌或殺菌作用的方法稱(chēng)為抗菌藥物(yow)敏感性試驗(yàn)（Antimicrobial Susceptibility Test），簡(jiǎn)稱(chēng)藥敏試驗(yàn)（AST）。第二頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板藥敏試驗(yàn)(shyn)的意義預(yù)測(cè)抗菌治療的效果；指導(dǎo)抗菌藥物的臨床應(yīng)用；發(fā)現(xiàn)或提

2、示細(xì)菌耐藥機(jī)制的存在，能幫助臨床醫(yī)生選擇合適的藥物，避免產(chǎn)生或加重細(xì)菌的耐藥；監(jiān)測(cè)細(xì)菌耐藥性，分析耐藥菌的變遷，掌握耐藥菌感染的流行病學(xué)，以控制(kngzh)和預(yù)防耐藥菌感染的發(fā)生和流行。 第三頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板藥敏試驗(yàn)(shyn)MIC：在與微生物生長(zhǎng)速率有關(guān)的特定時(shí)間(shjin)間隔內(nèi)，通常是1824小時(shí)，能夠抑制被測(cè)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度。對(duì)倍稀釋的優(yōu)點(diǎn)：操作容易敏感株的MIC呈正態(tài)分布區(qū)分異常(R)與敏感(S)的菌群第四頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板藥敏試驗(yàn)(shyn)折點(diǎn)的建立 1. MIC的分布的分布2. 藥代動(dòng)力

3、學(xué)和藥效學(xué)藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué) 定 MIC的折點(diǎn)3. 臨床療效和細(xì)菌臨床療效和細(xì)菌(xjn)清除率清除率4. 抑菌圈直徑的分布 定抑菌圈折點(diǎn)統(tǒng)計(jì)學(xué)的線(xiàn)性回歸計(jì)算錯(cuò)誤率：盡可能減少極重要誤差 (假敏感率)第五頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板MIC的分布(fnb)051015200.0080.0320.1250.52832128512第六頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)藥代動(dòng)力學(xué)：藥物吸收，分布，代謝，排泄藥效學(xué)：藥物對(duì)機(jī)體(jt)的作用時(shí)間依賴(lài)型（TMIC：-內(nèi)酰胺類(lèi)，大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)濃度依賴(lài)型（AUC/MIC比率：AGS, FQ這些

4、參數(shù)可用于計(jì)算具有最佳藥效的給藥方案第七頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板MIC與抑菌圈直徑(zhjng)的線(xiàn)性關(guān)系耐藥 中介(zhngji) 敏感RISLog2. MICD 1 d2 抑菌圈直徑(zhjng)（mm)第八頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板抑菌圈直徑(zhjng)與MIC的關(guān)系MIC (ug/ml)1 12 23 35 52 22 22 22 22 21 11 11 11 12 22 25 58 8111251 12 25 568小誤差中介中介3234耐藥耐藥重要誤差小誤差9敏感敏感小誤差極重要誤差小誤差2426283014182

5、0220.250.510121248256256163264128第九頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板不同國(guó)家的判定(pndng)折點(diǎn)可能不同原因：用藥劑量不同，服藥的間隔不同評(píng)價(jià)敏感時(shí)較保守更強(qiáng)調(diào)檢測(cè)出耐藥株（即特定(tdng)的耐藥群）技術(shù)因素：接種、培養(yǎng)基在我國(guó)主要遵循臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）制定的抗菌藥物選擇原則。 第十頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板敏感性分類(lèi)(fn li)(CLSI的定義)敏感（Susceptible）用常規(guī)用量治療

6、有效常規(guī)用藥時(shí)達(dá)到的平均血藥濃度超過(guò)細(xì)菌的MIC 5倍以上。耐藥（Resistance）用常規(guī)用量治療不能抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)MIC高于藥物(yow)在血、體液中可能達(dá)到的濃度第十一頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板敏感性分類(lèi)(fn li)（2）中介 (Intermediate)MIC接近血、體液中藥物的濃度，治療(zhlio)反應(yīng)率低于敏感株藥物生理濃集部位有效 (尿-FQ)加大用藥劑量可能有效緩沖區(qū)：防止操作的系統(tǒng)誤差造成重大結(jié)果的判定錯(cuò)誤第十二頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板藥敏試驗(yàn)(shyn)的方法學(xué)半定量紙片擴(kuò)散(kusn)法 (抑菌圈直徑

7、)MIC法：稀釋法(肉湯、瓊脂)自動(dòng)化儀法抗生素連續(xù)梯度法 (Etest )流式細(xì)胞儀第十三頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板 將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測(cè)試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中水分溶解后不斷向紙片周?chē)鷶U(kuò)散(kusn)形成遞減的梯度濃度，在紙片周?chē)志鷿舛确秶鷥?nèi)測(cè)試菌的生長(zhǎng)被抑制，從而形成無(wú)菌生長(zhǎng)的透明圈即為抑菌圈。 抑菌圈的大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度，并與該藥對(duì)測(cè)試菌的MIC呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。 紙片擴(kuò)散(kusn)法（Kirby-Bauer法）第十四頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板紙片擴(kuò)散(kusn)法水解酪

8、蛋白（MH）培養(yǎng)基，pH7.27.4，做成瓊脂厚度4mm，直徑90mm的平板；挑取孵育16 24小時(shí)已分純菌落，置于生理鹽水管中，振蕩混勻后校正濃度(nngd)至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。 第十五頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板紙片擴(kuò)散(kusn)法用無(wú)菌棉拭子蘸取菌液，在試管內(nèi)壁旋轉(zhuǎn)擠去多余菌液；然后在MH瓊脂表面均勻涂布接種3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60度；最后沿平板內(nèi)緣涂抹1周；平板在室溫下干燥35min，用無(wú)菌鑷子(ni zi)或商品化的紙片分配器將含藥紙片緊貼于瓊脂表面，各紙片中心距離應(yīng)大于24mm，紙片距平板內(nèi)緣大于15mm。第十六頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其

9、耐藥表型檢測(cè)模板紙片擴(kuò)散(kusn)法35孵育1624小時(shí)(xiosh)量取抑菌圈直徑；根據(jù)抑菌環(huán)的直徑，按照CLSI標(biāo)準(zhǔn)判讀，報(bào)告敏感、中介、耐藥。第十七頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板18紙片擴(kuò)散(kusn)法影響因素MIC接種菌量細(xì)菌生長(zhǎng)率抗生素含量(hnling)、擴(kuò)散性平皿厚度溫度，預(yù)孵育時(shí)間第十八頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板19紙片擴(kuò)散(kusn)法標(biāo)準(zhǔn)化CLSI：美國(guó)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institute)每年修訂更改包括質(zhì)控新藥的判定標(biāo)準(zhǔn)特殊(tsh)耐藥

10、性的檢測(cè)第十九頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板20CLSI的法規(guī)(fgu)規(guī)定紙片含量、接種濃度、培養(yǎng)基、平皿厚度、判定標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)、質(zhì)控；規(guī)定常規(guī)測(cè)試報(bào)告的抗生素；不同的藥判定標(biāo)準(zhǔn)不同；不同的菌判定標(biāo)準(zhǔn)也不同。第二十頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板21常規(guī)測(cè)試并報(bào)告常規(guī)測(cè)試并報(bào)告(bogo)的藥物分組的藥物分組(1) 腸桿菌(gnjn)科 綠膿和非腸桿菌科一 級(jí) 氨芐西林 頭孢他啶，慶大霉素 頭孢唑林，慶大霉素替卡西林，哌拉西林二級(jí) 阿米卡星 阿米卡星 氨芐西林/舒巴坦 頭孢吡肟，頭孢哌酮 阿莫西林/克拉維酸氨曲南 頭孢呋肟，頭霉素

11、環(huán)丙沙星，亞胺培南 頭孢噻肟，頭孢曲松 替卡西林/克拉維酸 環(huán)丙沙星，亞胺培南 妥布霉素，復(fù)方磺胺 替卡西林，哌拉西林 三級(jí) 氨曲南，頭孢他啶頭孢曲松 卡那霉素，奈替米星 氯霉素，奈替米星 妥布霉素 四環(huán)素，氯霉素 第二十一頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板22常規(guī)常規(guī)(chnggu)測(cè)試并報(bào)告的藥物分組測(cè)試并報(bào)告的藥物分組(2) 葡萄球菌(p to qi jn)腸球菌一級(jí) 苯唑西林，青霉素 青霉素，氨芐西林二級(jí) 紅霉素類(lèi)萬(wàn)古霉素 克林霉素，萬(wàn)古霉素三級(jí) 氯霉素慶大霉素第二十二頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板23常規(guī)常規(guī)(chnggu)測(cè)試并報(bào)

12、告的藥物分組測(cè)試并報(bào)告的藥物分組(3) 流感嗜血桿菌肺炎(fiyn)鏈球菌一級(jí) 氨芐西林，青霉素青霉素，紅霉素 復(fù)方磺胺 復(fù)方磺胺二級(jí) 頭孢呋肟，頭孢噻肟氧氟沙星，四環(huán)素 頭孢他啶，氯霉素 萬(wàn)古霉素三級(jí) 阿奇霉素，頭孢克羅氯霉素，利福平 環(huán)丙沙星，亞胺培南利福平，四環(huán)素第二十三頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板24預(yù)報(bào)(ybo)用藥(一) 測(cè)試藥菌名推測(cè)其他藥物的敏感性 苯唑西林葡萄球菌所有-內(nèi)酰胺類(lèi) 四環(huán)素所有（除葡多西環(huán)素，米諾環(huán)素 萄球菌和不 動(dòng)桿菌(gnjn)紅霉素G球菌羅紅霉素，克拉霉素， 阿奇霉素克林霉素所有林可霉素第二十四頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏

13、試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板25預(yù)報(bào)(ybo)用藥(二)測(cè)試藥菌名推測(cè)其他藥物的敏感性氨芐西林腸球菌青霉素青霉素G葡萄球菌氨芐西林，美洛西林 替卡西林頭孢噻吩腸桿菌(gnjn)科頭孢拉定，頭孢氨芐 頭孢克羅奈啶酸腸桿菌科所有氟喹諾酮類(lèi)萬(wàn)古霉素所有替考拉寧第二十五頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板以一定濃度的抗菌藥物與含有被試菌株的培養(yǎng)基進(jìn)行一系列不同倍數(shù)稀釋?zhuān)ㄍǔ殡p倍稀釋?zhuān)?，?jīng)培養(yǎng)后觀(guān)察(gunch)其最低抑菌濃度。 稀釋法中用瓊脂培養(yǎng)基者為瓊脂稀釋法，用肉湯培養(yǎng)基者為肉湯稀釋法。 藥敏試驗(yàn)(shyn)-稀釋法第二十六頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)

14、模板常用抗菌藥物容積(rngj)稀釋法步驟濃度（mg/mL）來(lái)源體積(mL)CAMHB(mL)最終濃度（mg/mL）15120儲(chǔ)存液195122512步驟1112563512步驟1131284512步驟11764564步驟41132664步驟41316764步驟417888步驟711498步驟7132108步驟7171111步驟10110.5121步驟10130.25131步驟10170.125第二十七頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板抗菌藥物的稀釋抗菌藥物的稀釋(xsh)和融解和融解第二十八頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板29肉湯稀釋(xsh

15、)法 4 8 16 32 64 128 256 ug/ml 混 混 清抗生素倍比稀釋(xsh)，種菌105CFU/ml ， 孵育35，1620h，判讀。第二十九頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板30肉湯稀釋(xsh)法調(diào)節(jié)離子(lz)濃度的MH肉湯宏量肉湯法（2ml, 13x100mm ）微量肉湯法 （ 0.1ml, 微量板） 自動(dòng)化儀優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確，可靠，可用于研究。缺點(diǎn)：勞動(dòng)強(qiáng)度大細(xì)菌生長(zhǎng)情況不可查第三十頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板31瓊脂(qingzh)稀釋法 濃度(nngd) 16 32 64 128 256 ug/ml 制備含對(duì)倍抗生

16、素濃度梯度的平板，制備菌懸液，點(diǎn)種菌，104/每個(gè)點(diǎn)，孵育(f y)，判讀結(jié)果第三十一頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板32瓊脂(qingzh)稀釋法優(yōu)點(diǎn)：金標(biāo)準(zhǔn) 精確可靠(kko)可同時(shí)測(cè)定多株菌（40株）細(xì)菌生長(zhǎng)情況可查缺點(diǎn)： 測(cè)多個(gè)藥時(shí)勞動(dòng)強(qiáng)度大制備平皿費(fèi)時(shí)費(fèi)力第三十二頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板E test 法nE試條是一條5mm50mm的無(wú)孔試劑載體，一面固定有一系列預(yù)先制備的，濃度呈連續(xù)指數(shù)增長(zhǎng)稀釋抗菌藥物，另一面有讀數(shù)和判別的刻度；n抗菌藥物的梯度可覆蓋有20個(gè)MIC對(duì)倍稀釋濃度的寬度范圍；n將E試條放在細(xì)菌接種過(guò)的瓊脂平板上

17、，經(jīng)孵育過(guò)夜，圍繞試條明顯可見(jiàn)橢圓形抑菌圈，圈的邊緣(binyun)與試條交點(diǎn)的刻度濃度即為抗菌藥物抑制細(xì)菌的最小抑菌濃度。 第三十三頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板34E test 法 細(xì)菌(xjn)生長(zhǎng)區(qū)E test 塑料(slio)條橢圓形細(xì)菌生長(zhǎng)(shngzhng)抑制區(qū)256128 8016判讀抑菌濃度（MIC ug/ml)第三十四頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板E test 法菌液制備(zhbi)及接種均同紙片擴(kuò)散法。90mm平板上可放E試驗(yàn)試條1 2條，140mm平板最多可放6條。 孵育溫度及時(shí)間同紙片擴(kuò)散法。 第三十五頁(yè)，共八

18、十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板36E test 法優(yōu)點(diǎn)連續(xù)濃度梯度，與瓊脂(qingzh)稀釋法相關(guān)性好影響因素少，穩(wěn)定性高操作簡(jiǎn)單，省時(shí)缺點(diǎn)：昂貴用途：快生長(zhǎng)菌，苛養(yǎng)菌，厭氧菌，酵母菌， 分枝桿菌第三十六頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板37評(píng)價(jià)(pngji)藥物體外抗菌活性的指標(biāo)MIC50, MIC90, MIC 均值， MIC 范圍(fnwi)，R，I，SMIC50/ MIC90：MIC從小到大排列，位于第50 / 90百分位菌株的MIC值單純比較MIC50，MIC90是片面的，還要同時(shí)看平均MIC及MIC范圍同時(shí)結(jié)合R，I，S，(不同藥物血濃

19、度不同，安全范圍不同)第三十七頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板細(xì)菌(xjn)耐藥機(jī)制 細(xì)菌耐藥機(jī)制主要有四種：產(chǎn)生一種或多種水解酶、鈍化酶和修飾酶；抗生素作用的靶位改變，包括青霉素結(jié)合蛋白位點(diǎn)、DNA解旋酶、DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶的改變等；細(xì)菌膜的通透性下降，包括細(xì)菌生物被膜的形成和通道蛋白丟失(dis)；細(xì)菌主動(dòng)外排系統(tǒng)的過(guò)度表達(dá)。在上述耐藥機(jī)制中，第一、二種耐藥機(jī)制具有專(zhuān)一性，第三、四種耐藥機(jī)制不具有專(zhuān)一性。第三十八頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板-內(nèi)酰胺酶 內(nèi)酰胺酶是一類(lèi)(y li)水解青霉素、頭孢菌素類(lèi)抗生素的滅活酶；該酶位于革蘭陽(yáng)性球菌菌

20、體外，革蘭陰性桿菌間質(zhì)中； 檢測(cè)方法有微生物培養(yǎng)法、碘淀粉法、頭孢硝噻吩紙片法。其中頭孢硝噻吩紙片法因?yàn)楹?jiǎn)單、方便、快速，應(yīng)用于臨床檢測(cè)。第三十九頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板 葡萄球菌(p to qi jn)屬 青霉素 方法敏感中介耐藥MIC0.12 mg/ml-0.25 mg/ml紙片擴(kuò)散法29 mm-28 mm第四十頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板誘導(dǎo)(yudo)-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)如果青霉素的藥敏結(jié)果出現(xiàn)以下情況(qngkung)，需要做誘導(dǎo)-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè) ：MIC 0.12 g/ml Zone diameter 29 mm 第四十一

21、頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板誘導(dǎo)(yudo)-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)第四十二頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板超廣譜(un p)-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）ESBLs是指由質(zhì)粒介導(dǎo)的能水解青霉素類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)和單環(huán)內(nèi)酰胺類(lèi)氨曲南的一類(lèi)酶；ESBLs不能水解頭霉素類(lèi)和碳青霉烯類(lèi)藥物，能被克拉維酸、舒巴坦和他唑巴坦等內(nèi)酰胺酶抑制劑所抑制；ESBLs主要見(jiàn)于(jiny)大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌，此外也見(jiàn)于(jiny)腸桿菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬、沙雷菌屬等其他腸桿菌科細(xì)菌、不動(dòng)桿菌、銅綠假單胞菌。第四十三頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型

22、檢測(cè)模板超廣譜(un p)-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）紙片法，出現(xiàn)以下一種情況即可懷疑該菌株產(chǎn)生(chnshng)ESBL （篩選陽(yáng)性）：頭孢泊肟17mm頭孢他啶22mm頭孢噻肟27mm頭孢曲松25mm氨曲南 27mm第四十四頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板超廣譜(un p)-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）紙片法（表型確認(rèn)試驗(yàn)）頭孢他啶和頭孢他啶/克拉(kl)維酸、頭孢噻肟和頭孢噻肟/克拉維酸。任一復(fù)方制劑的抑菌圈直徑與相應(yīng)單藥抑菌圈直徑相差5mm時(shí)，即可判斷該菌產(chǎn)ESBL。 第四十五頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板超廣譜(un p)-內(nèi)酰胺酶（ESBL

23、s）稀釋(xsh)法，出現(xiàn)以下一種情況即可懷疑該菌株產(chǎn)生ESBL：頭孢他啶或頭孢噻肟或頭孢曲松或氨曲南MIC2mg /mL或頭孢泊肟MIC8mg /mL 第四十六頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板超廣譜(un p)-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）稀釋法（表型確認(rèn)(qurn)試驗(yàn)）頭孢他啶和頭孢他啶/克拉維酸、頭孢噻肟和頭孢噻肟/克拉維酸。任何一組酶抑制劑復(fù)方制劑的MIC值比相應(yīng)單藥的MIC降低3個(gè)稀釋度者即可判定該菌為產(chǎn)ESBL菌株。 第四十七頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板AmpC酶的特征(tzhng)AmpC酶是在革蘭陰性菌中發(fā)現(xiàn)的由染色體或質(zhì)粒介

24、導(dǎo)的水解頭孢菌素的型內(nèi)酰胺酶，可分為誘導(dǎo)酶和非誘導(dǎo)酶。與ESBLs不同(b tn)的是，AmpC酶對(duì)三代頭孢菌素耐藥但對(duì)四代頭孢菌素敏感且不被酶抑制劑克拉維酸所抑制，但其酶活性可被氯唑西林和硼酸抑制。 第四十八頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板AmpC酶的檢測(cè)(jin c)方法頭孢西丁三維試驗(yàn)是檢測(cè)AmpC酶的經(jīng)典方法；除此之外，還有以硼酸化合物為抑制劑檢測(cè)肺炎克雷伯菌和大腸(dchng)埃希菌的AmpC酶、AmpC Disk、頭孢西丁瓊脂基礎(chǔ)法等。 第四十九頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板碳青霉烯酶碳青霉烯酶可以定義為具有水解碳青霉烯類(lèi)抗生素

25、活性的-內(nèi)酰胺酶，主要分布于-內(nèi)酰胺酶A、B、D類(lèi)中。根據(jù)水解機(jī)制中作用位點(diǎn)的不同可以將碳青霉烯酶分為兩大類(lèi)：一類(lèi)稱(chēng)為金屬碳青霉烯酶，這類(lèi)酶以金屬鋅離子為活性作用位點(diǎn)，可以被EDTA抑制，屬于(shy)B類(lèi)-內(nèi)酰胺酶；另一類(lèi)以絲氨酸（Ser）為酶的活性作用位點(diǎn)，可以被酶抑制劑克拉維酸和他唑巴坦所抑制，屬于A、D類(lèi)-內(nèi)酰胺酶。 第五十頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板碳青霉烯酶A類(lèi)酶B類(lèi)酶D類(lèi)酶染色體編碼(bin m)：SME NMC IMI質(zhì)粒編碼(bin m)：KPC GES質(zhì)粒編碼(bin m) OXA-23 OXA-24 OXA-51 OXA-58 OXA-55

26、OXA-48 OXA-50 OXA-60 OXA-62金屬酶，位于GMEs上，包括VIM，IMP，GIM，SPM，SIM等可以被酶抑制劑抑制可以被EDTA抑制第五十一頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板碳青霉烯酶表型檢測(cè)(jin c)方法-改良改良hodge試驗(yàn)試驗(yàn)ATCC25922，0.5麥?zhǔn)希?:10稀釋涂MH平板平皿中心貼10g 厄他培南或亞胺培南紙片 10l環(huán)挑取3 5個(gè)菌落從平板中心紙片邊緣(binyun)向平板邊緣(binyun)劃線(xiàn) 被測(cè)菌株與大腸埃希菌ATCC25922 抑菌環(huán)交匯處大腸埃希菌生長(zhǎng)增強(qiáng)，即產(chǎn)碳青霉烯酶。 第五十二頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)

27、菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板改良改良hodge試驗(yàn)的結(jié)果試驗(yàn)的結(jié)果(ji gu)判讀判讀第五十三頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板金屬酶表型檢測(cè)(jin c)方法：EDTA協(xié)同試驗(yàn)用0.5麥?zhǔn)蠁挝坏拇郎y(cè)菌懸液涂布M H 平板。 貼IMP (10g)紙片距其1cm 處貼EDTA紙片（0.5mol/L 4l）。35 過(guò)夜培養(yǎng)。亞胺培南抑菌圈在靠近(kojn)加EDTA紙片側(cè)明顯擴(kuò)大者為產(chǎn)金屬酶菌株。 亞胺培南EDTA10mm第五十四頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）攜帶SCCmec基因盒。SCCmec基因盒中的

28、MecA基因編碼修飾的青霉素結(jié)合蛋白PBP2a，這種蛋白對(duì)甲氧西林和其他的-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素親和力下降(xijing)，從而導(dǎo)致對(duì)這些抗生素的耐藥。 SCCmec主要由mec復(fù)合物和ccr復(fù)合物兩部分組成。根據(jù)不同mec復(fù)合物和ccr復(fù)合物的組合，可以將SCCmec分成不同的型別，目前已發(fā)現(xiàn)8種SCCmec型。耐甲氧西林(x ln)葡萄球菌第五十五頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板SCCmec基因(jyn)盒第五十六頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板耐甲氧西林(x ln)葡萄球菌的檢測(cè)MRSA的檢測(cè)方法有頭孢西丁紙片擴(kuò)散法、苯唑西林瓊脂稀釋法、乳膠

29、凝膠試驗(yàn)檢測(cè)PBP2a、mecA基因測(cè)定及MRSA顯色培養(yǎng)基。頭孢西丁紙片法、苯唑西林瓊脂稀釋法是目前檢測(cè)耐甲氧西林葡萄球菌最常用篩選方法。對(duì)于金黃色葡萄球菌，MRSA的檢測(cè)可以使用(shyng)苯唑西林紙片，但對(duì)于凝固酶陰性葡萄球菌則不能使用(shyng)苯唑西林紙片。 第五十七頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板甲氧西林(x ln)耐藥的葡萄球菌（MRS） MRS檢測(cè)藥物紙片法稀釋法金黃色葡萄球菌1mg 苯唑西林路鄧葡萄球菌1mg 苯唑西林金黃色葡萄球菌和路鄧葡萄球菌30mg 頭孢西丁除路鄧以外的凝固酶陰性葡萄球菌1mg 苯唑西林30mg 頭孢西丁第五十八頁(yè)，共八十一

30、頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板凝固酶陰性(ynxng)葡萄球菌中苯唑西林MIC結(jié)果的報(bào)告策略*第五十九頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板克林霉素誘導(dǎo)(yudo)耐藥試驗(yàn) 第六十頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板克林霉素誘導(dǎo)(yudo)耐藥葡萄球菌紅霉素*耐藥的金葡菌或凝固酶陰性葡萄球菌(p to qi jn)可對(duì)克林霉素結(jié)構(gòu)性或誘導(dǎo)性耐藥或僅對(duì)紅霉素耐藥。 *或其他大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)第六十一頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板紅霉素/克林霉素耐藥葡萄球菌(p to qi jn)耐藥機(jī)制第六十二頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題

31、-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板誘導(dǎo)性克林霉素耐藥（誘導(dǎo)性克林霉素耐藥（erm介導(dǎo)）介導(dǎo)）葡萄球菌(p to qi jn)-“D試驗(yàn)”患者不會(huì)對(duì)克林霉素有反應(yīng)(fnyng)-報(bào)告克林霉素耐藥無(wú)克林霉素誘導(dǎo)無(wú)克林霉素誘導(dǎo)(yudo)（msrA介導(dǎo)）介導(dǎo)）真的克林霉素敏感真的克林霉素敏感-報(bào)告克林霉素敏感報(bào)告克林霉素敏感“D”第六十三頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板葡萄球菌誘導(dǎo)性克林霉素耐藥的MIC檢測(cè)(jin c)方法第六十四頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板對(duì)于紅霉素耐藥，克林霉素敏感(mngn)的葡萄球菌，需檢測(cè)誘導(dǎo)性克林霉素耐藥注意試驗(yàn)(

32、shyn)適用于金葡菌和凝固酶陰性葡萄球菌(苯唑西林敏感和耐藥株)；對(duì)于CoNS，該試驗(yàn)不必常規(guī)開(kāi)展因?yàn)榭肆置顾睾苌儆糜谥委熌堂戈幮云咸亚蚓?；大多?shù)醫(yī)院相關(guān)MRSA是克林霉素耐藥的；大多數(shù)社區(qū)相關(guān)MRSA是克林霉素敏感的(msrA 基因型)；克林霉素可以口服給藥。第六十五頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板萬(wàn)古霉素中介(zhngji)耐藥的金黃色葡萄球菌（VISA）第六十六頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板血瓊脂上48小時(shí)(xiosh)生長(zhǎng)第六十七頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板當(dāng)有以下當(dāng)有以下(yxi)一個(gè)或多個(gè)情況時(shí)

33、菌株可疑為一個(gè)或多個(gè)情況時(shí)菌株可疑為VISA -內(nèi)酰胺類(lèi)藥物的內(nèi)酰胺類(lèi)藥物的MIC降低降低達(dá)托霉素達(dá)托霉素MIC升高升高菌落形態(tài)不典型（一些為微小菌落）菌落形態(tài)不典型（一些為微小菌落）肉湯中生長(zhǎng)遲緩肉湯中生長(zhǎng)遲緩(chhun)（如血培養(yǎng)）（如血培養(yǎng)）凝固酶反應(yīng)微弱凝固酶反應(yīng)微弱/延遲延遲經(jīng)過(guò)幾次次代經(jīng)過(guò)幾次次代培養(yǎng)后：培養(yǎng)后：菌落回復(fù)為典型形態(tài)菌落回復(fù)為典型形態(tài)萬(wàn)古霉素萬(wàn)古霉素MIC降低并且菌株變?yōu)槿f(wàn)古霉素敏感降低并且菌株變?yōu)槿f(wàn)古霉素敏感第六十八頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板萬(wàn)古霉素耐藥的金黃色葡萄球菌(p to qi jn)（VRSA）第六十九頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)

34、專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板vanA從VRE轉(zhuǎn)至金葡菌第七十頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板紙片擴(kuò)散紙片擴(kuò)散(kusn)法折點(diǎn)法折點(diǎn)葡萄球菌葡萄球菌-萬(wàn)古霉素萬(wàn)古霉素 第七十一頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板腸球菌腸球菌(qijn)高水平氨基糖苷類(lèi)耐藥篩查高水平氨基糖苷類(lèi)耐藥篩查紙片擴(kuò)散(kusn)法120 g 慶大霉素; 300 g 鏈霉素 10 mm = 無(wú)高水平氨基糖苷類(lèi)耐藥MIC篩查慶大霉素: 500 g/ml 鏈霉素: 1000 g/ml (肉湯) 2000 g/ml (瓊脂)第七十二頁(yè)，共八十一頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)模板腸球菌氨基糖苷(tnggn)類(lèi)修飾酶 鏈霉素 慶大霉素 妥布霉素 阿米卡星/丁胺卡那6-AAD + - - -3APH - - - +2”A