1、生物藥劑學與藥物動力學實驗講義生物藥劑學與藥物動力學實驗講義中藥藥劑學教研室編寫2006年12月1 / 20生物藥劑學與藥物動力學實驗講義生物藥劑學與藥物動力學實驗須知目錄實驗一片劑溶出度試驗4實驗二尿藥法測定水楊酸鈉片劑的生物利用度7實驗三撲熱息痛血管外給藥的藥物動力學研究10實驗四大鼠在體小腸吸收實驗13實驗五氨茶堿藥物動力學的研究153 / 20生物藥劑學與藥物動力學屬于藥物臨床應用學科的范疇，具有綜合性強、應用性強、創(chuàng)新性強等特點。生物藥劑學與藥物動力學實驗是教學的重要組成部分，是理論與實踐結(jié)合的主要方式之一。通過實驗課不僅能印證、鞏固和擴展教學內(nèi)容，還能訓練基本操作技能，培養(yǎng)良好的實

2、驗作風。為保證實驗課順利進行，并達到預期的目的，實驗中必須做到以下六個方面：1 .預習實驗內(nèi)容通過預習，明確實驗目的與要求，對實驗內(nèi)容做到心中有數(shù)，并能合理安排實驗順序與時間。要明確每個處方中藥物與輔料的用途。2 .遵守實驗紀律不遲到，不早退，不曠課，保持實驗肅靜，未經(jīng)許可，不得將實驗室物品帶離實驗室。3 .重視藥劑衛(wèi)生進入實驗室必須穿整潔的白工作服,先將工作臺面擦洗干凈再開始做實驗。實驗過程中應始終注意臺面、地而的整潔，各種廢棄物應投入指定位置，不能隨手亂丟，更不能棄入水槽內(nèi)。完成實驗后，應將容器、儀器清潔，擺放整齊，臺而擦凈，經(jīng)教師同意后方能離開。值日生負責整理公用器材，清掃實驗室，關好水

3、、電、門、窗。4 .細心操作、勤于思考稱量藥品、試劑時，要在稱量前（拿取時）、稱量時和稱量后（放回時）進行三次核對。稱量完畢應立即蓋好瓶塞，放回原處。對劇毒藥品更要仔細核對名稱與劑量.并準確稱取。實驗中要嚴格控制好實驗條件，認真操作每一道工序，以保證成品質(zhì)量。實驗成品應標明名稱、規(guī)格、配制者、配制時間，并交教師驗收。實驗中遇到問題應先獨立思考，再請教他人。在實驗中逐步形成整潔、細致、嚴謹、冷靜、善于觀察、善于思考、勤于動手的實驗風格。5 .正確使用儀器、注意安全使用儀器時要按使用方法正確操作，不熟悉操作方法時，應在教師指導下使用。各種儀器、容器使用時要注意輕拿、輕放，用中要清潔后放回規(guī)定位置。

4、6.寫好實驗報告實驗報告是考察學生分析總結(jié)實驗資料能力和寫作能力的重要方面，亦是評定實驗成績的重要依據(jù)。實驗報告的格式如下所示：【實驗目的及原理】寫出實驗目的及原理。【實驗操作】寫出具體實驗步驟和實驗條件。【實驗結(jié)果】記錄各采樣時間點及采樣的狀態(tài)，按要求對數(shù)據(jù)進行處理，并將全班數(shù)據(jù)進行綜合,求其平均值和標準差。【討論】闡述實驗原理、實驗收獲與教訓、建議等。【思考題】回答實驗思考題。每一實驗內(nèi)容逐一按以上順序書寫實驗報告。生物藥劑學與藥物動力學實驗講義實驗一片劑溶出度試驗一、實驗目的1,掌握片劑溶出度測定方法及數(shù)據(jù)處理方法;2,了解溶出度測定的重要意義及其應用。二、實驗提示片劑溶出度是指片劑主藥

5、在體外協(xié)助適當裝置于適宜介質(zhì)中溶出的速度和程度。測定溶出度的依據(jù)是Noyes-Whitney的擴散理論，近年生物藥劑學的研究表明，難溶性藥物的片劑，崩解時限不能作為判斷難溶性藥物片劑吸收的指示，因為片劑崩解后的粉粒還不能直接被機體所吸收，溶解是吸收的主要過程，溶解度小于0.1Img/mL的藥物，其體內(nèi)吸收常受其溶出速度的影響，溶出速度除與藥物的晶型、粒經(jīng)大小有關外，還與制劑的生產(chǎn)工藝、輔料、儲存條件等有關。所以為了控制這些片劑的質(zhì)量，需測定血藥濃度或尿藥濃度，對于一些體外溶出度與體內(nèi)血藥濃度有相關性的藥物，則可測定其主藥成分的體外溶出度作為控制該片劑質(zhì)量的一項指標。本實驗以對乙酰氨基酚片為樣品

6、，測定對乙酰氨基酚的溶出度.原理：對乙酰氨基酚在溶出介質(zhì)中，在257nm波長處有最大吸收，因此可用紫外分光光度法進行測定，測定其在257nm的吸收度（A）,用標準曲線方程計算其對應濃度。三、實驗內(nèi)容1 .測出比較法的A值，用A-w表示，作對照品。取樣品10片，精密稱定，計算平均片重W,將稱定的片子研細，再精密稱取相當于W的量，加約600mL溶出介質(zhì)（稀鹽酸24mL加水至1000mL）,水浴（4050）中攪伴溶解,冷至室溫,移入1000mL容量瓶中，加入介質(zhì)至足量，搖勻，過濾，精密吸取濾液1mL置50mL容量瓶中，加入0.04%氫氧化鈉溶液稀釋至50mL,搖勻，照分光光度法（中國藥典2005年版

7、二部附錄IVA）,在257nm的波長處測定吸收度A值，用A-W表示。2 .對乙酰氨基酚片溶出度的測定A.儀器準備轉(zhuǎn)籃是用40目不銹鋼制成的圓筒，3.66cm,直徑2.5cm,頂部通過金屬棒連接于變速小馬達上。轉(zhuǎn)籃懸吊于盛有溶媒的容器中，距溶出杯底2.5cm,使用前安裝就緒，開動電機空轉(zhuǎn),檢查電路是否暢通，有無異常噪音，轉(zhuǎn)籃的轉(zhuǎn)動是否平穩(wěn)，加熱恒溫裝置及變速裝置是否正常，如一切符合要求，就可以開始測定樣品。B.測定方法取溶出介質(zhì)（稀鹽酸24mL加水至1000mL）1000mL,加熱至37,置溶出杯中，調(diào)行轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)/分，將精密稱定重量的藥片一片（W）放在轉(zhuǎn)籃內(nèi)，以溶出介質(zhì)接觸藥片時為零時

8、刻開始計時，然后按2、5、10、15、20、30分鐘定時取樣，取樣位置固定在轉(zhuǎn)籃上端液而中間、距離杯壁1cm處，每次取樣5mL,將樣品液過濾，吸取濾液1mL,余按實驗內(nèi)容1,測出比較法A值項下，自“置50mL容量瓶”始，依法測定規(guī)定時間藥片溶出的A值，以As表示。注：（1）對所用的溶出度測定儀，應預先檢查其是否運轉(zhuǎn)正常，并檢查溫度的控制，轉(zhuǎn)速等是否精確、升降轉(zhuǎn)籃是否靈活等。（2）溶出方法分轉(zhuǎn)籃法、槳法和小杯法三種。本實驗選用轉(zhuǎn)籃法，轉(zhuǎn)籃的尺寸和結(jié)構應符合藥典規(guī)定。（3）每次取出樣品液后，應同時補充相同體積的空白溶液。（4）根據(jù)藥典規(guī)定，應同時測定6片的溶出度，鑒于實驗時間限制，每實驗組僅要求完

9、成1片的測試。四、測定結(jié)果與數(shù)據(jù)處理1每片測定結(jié)果記錄5 / 20生物藥劑學與藥物動力學實驗講義No.123456取樣時間（min）2510152030AsAw累計溶出5Aw=溶出度的計算累計溶出=?2 .用普通坐標紙作圖求t5。以累計溶出百分比對溶出時間逐一描點，用圖估法擬合-平滑曲線，過累計溶出百分比50%處引一與t軸平行的直線，與溶出曲線相交于A,過A點向t軸引垂線交于5此h即為Iso,此值供方差分析用，3 .用威布爾分布概率求t50,td和m三個參數(shù)從上而所作溶出曲線所見，累計溶出百分比對相應時間各數(shù)據(jù)在一般直角坐標紙上作圖，并不成直線關系，但可將累計溶出百分比與時間的關系看作統(tǒng)計學上

10、的概率分布函數(shù)，用威布爾概率紙使之直線化，從圖上即可極為方便的找到t5。（溶解50%所需時間），ta（溶解63.2%所需時間）及m（斜率）三個參數(shù)，在威布爾概率紙作圖的基本步驟如下：A.以F尺代替累計溶出百分比,t尺為釋放時間，用原數(shù)據(jù)描點,若各點基本上呈直線分布，則可直接擬合一條直線，尤其注意照顧F在30%至70%范圍內(nèi)的點，使之優(yōu)先貼近該直線.B.若各點排布呈曲線狀，則沿曲線趨勢延伸，與t尺交點的數(shù)值作為。的初步估計值，以F對t再作圖，若所得各點的排列接近直線，則擬合成直線，若F對t-a作圖仍為一曲線，則可用類似的方法反復修改，直至作得一直線為止。C.在F對t（或F對t-。）所作圖上擬合一

11、直線，有X=1和Y釉的交點（稱m點）作該直線的平行線，該平行線和Y軸交點在Y尺上投影點的讀數(shù)即為m值（取絕對值工D.所擬合的直線與X軸的交點在t尺上投影點的讀數(shù)即為n=3/m的估計數(shù)，本實驗中稱為匕值（溶出63.2%所需時間）：與溶出50%的交點在t尺上的投影點的讀數(shù)即為150cE.用威布爾概率紙求出tso,td和m三個參數(shù)后，可利用方差分析，相關與回歸分析的數(shù)理統(tǒng)計法來評定同類產(chǎn)品不同批號或不同廠家的片劑質(zhì)量：另外，還可以評定同一產(chǎn)品體內(nèi)、體外的相關程度。4 .用溶出參數(shù)作方差分析將兩個批號共八片，按本實驗方法測得的累計溶出百分比共八組數(shù)據(jù)，經(jīng)威布爾概率紙作圖得八條參數(shù)方差來源自由度離差平方

12、和方差F值顯著性組間（50組內(nèi)合計組間td組內(nèi)合計組間m組內(nèi)合計直線，由圖中求出ts。，td和m值，將所得參數(shù)列表如下，供方差分析用。思考題:檢查固體制劑的溶出度有何意義?哪些種類的制劑需檢查溶出度？7 / 20實驗二尿藥法測定水楊酸鈉片劑的生物利用度一、實驗目的1 ,通過實驗掌握用尿藥速率法求算體內(nèi)藥動學參數(shù)；2 ,通過實驗掌握藥物的生物利用度的一般研究方法；3 ,通過測定求出水楊酸鈉的生物半衰期0二、實驗原理藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄等過程既有區(qū)別，又有聯(lián)系，具有一定相關性。藥物在體內(nèi)的速度過程變化規(guī)律及生物利用度等相關參數(shù)的提取，要通過實驗采用血藥濃度法、尿藥濃度法或唾液藥物濃度

13、法等方法獲得。在多數(shù)情況下，尿藥濃度高于血藥濃度，定量分析精密度好，測定方法較易建立，且取樣方便，可免除受試者多次抽血的痛苦。因此，在體內(nèi)藥物大部分以原型從尿中排出的條件下，通常可用尿藥法提取消除速度常數(shù)、生物半衰期等動力學參數(shù)。生物利用度反應藥物在體內(nèi)被吸收的速度和程度，它可分為相對生物利用度與絕對生物利用度。當藥物的口服制劑與靜脈注射劑相比較，可求算絕對生物利用度：與其他制劑相比較，可求算相對生物利用度。本實驗采用口服真溶液劑為參比，測定水楊酸鈉片劑的相對生物利用度。三、實驗方法L繪制水楊酸鈉標準曲線精密稱取干燥恒重的水楊酸鈉0.5g,置100mL容量瓶中，加蒸偏水溶解并稀釋至刻度，各精密

14、吸取此溶液L5、2.5、3.5.4.5.5.5mL分別置50mL容4瓶中,加蒸儲水稀釋至刻度,搖勻,得濃度分別為。15、0.25.035、0.45x0.55mg/mL的標準溶液.取干燥潔凈的帶塞玻璃試管5支，分別精密吸取以上各溶液的水楊酸鈉標準溶液1mL于試管中,再分別加入Fe（NO3）3試管5nL混合均勻，用72-100型分光光度計于540nm波長處測定吸收度，將測得數(shù)據(jù)進行回歸分析，得吸收度對標準溶液濃度的回歸方程，即為標準直線。參比液以蒸儲水1mL代替標準液。2.測定生物利用度A.實驗方法I. 選擇受試者的條件II. 對受試者的要求a）服藥前48小時開始，不吃任何含水楊酸鹽類食物。b）小

15、便應按規(guī)定收集完全，不得損失，并保持尿樣不污染。在收集尿樣期間內(nèi)不作劇烈運動。c）早晨收集空白尿，空腹時口服水楊酸鈉片0.6g,對照組口服相當于0.6g的水楊酸鈉真溶液.d）按以下時間喝水和收集尿樣，并記錄排尿量：服藥當天：7：30喝水150mL7：55小便（收空白尿）8：00用250mL溫開水吞服0.3g/片的水楊酸鈉片兩片8：30收集尿樣9：00收集尿樣10：00收集尿樣喝水200mL12：00收集尿樣喝水150mL14：00收集尿樣喝水100mL生物藥劑學與藥物動力學實驗講義16：00收集尿樣喝水100mL18：00收集尿樣20：00收集尿樣喝水100mL22：00收集尿樣第二天8：00

16、收集尿樣22：00收集尿樣每次收集尿樣的時間必須小便一次，在上一次收集尿樣后所排出的小便，均要收集完全，作為下一個時間尿樣，每次收尿容器必須洗凈，用蒸鏘水清洗，瀝干備用。III .受試者服用樣品的安排本實驗僅作兩種劑型，同一受試者二次服藥之間應間隔4天以上.IV .測定方法每次尿樣測量體積后，精密吸取1mL于干燥潔凈的試管中，加Fe（NO3）3試管5mL,按“繪制標準曲線”項下進行測定，參比液用空白尿1mL替代含藥尿樣，如顯色時發(fā)現(xiàn)色澤太深，則根據(jù)情況將尿樣稀釋后取樣測定（如果氣候炎熱，須將空白尿及尿樣置冰箱中保存，以防長霉發(fā)酵，影響結(jié)果的準確性,）B.數(shù)據(jù)處理I. 將所測各時間尿樣的吸收度代

17、入標準直線，計算出該尿樣濃度（mg/n】L）再乘以尿量（如尿樣稀釋則需乘上稀釋倍數(shù)），計算出各時間的尿藥排泄量。II. 以lgZx/Zt對相鄰兩時間的中點時間（t中）作尿藥排泄速度曲線。x:各時間的尿藥排泄量.t：相鄰兩次集尿時間的間隔時間.作圖：HL根據(jù)作出的尿藥排泄曲線求出水楊酸鈉片劑和其溶液的動力學參數(shù).斜率（b）=（Y2-Y）/（X2-Xi）或?qū)⑶€后部直線部分進行回歸分析,求出直線斜率b消除速度常數(shù):k=2.303Xb劑型消除速度常數(shù)k半衰期（小時）總排泄量（mg）片劑真溶液生物半衰期：l】/2=0.693/kIV.生物利用度：以真溶液為參比，求片劑的相對生物利用度生物利用度（）=?

18、V,尿藥法數(shù)據(jù)記錄姓名：性別：產(chǎn)品廠家及批號：藥量：服藥時間：序號尿間小>集時1時口服水楊酸鈉真溶液口服水楊酸鈉片尿量<mL)件數(shù)一膘.吸收度平均濃度(mg/mL)排泄量(mg)尿量(mL)稀倍吸收度平均濃度(mg/mL)排泄量(nig)1020.53142546678810912101411241238累計累計序號集尿時間(h)中點時間(t中)間隔時間(1)真溶液片劑排泄量(X)平均尿藥速度(2X/t)Lg(AX/t)排泄量(X)平均尿藥速度(4X/DLg(AX/t)010.50.250.5210.750.5321.51443256526872710928121129141321

19、024191011383114思考題：血藥濃度法與尿藥法測定藥物動力學參數(shù)各有何特點?11 / 20生物藥劑學與藥物動力學實驗講義實驗三撲熱息痛血管外給藥的藥物動力學研究一、實驗目的1 .通過本實驗，掌握生物樣品分析方法的基本要求。2 .掌握撲熱息痛的血藥濃度測定方法及有關參數(shù)的計算。二、實驗原理撲熱息痛與亞硝酸發(fā)生親電取代反應，生成2-亞硝基一4一乙酰氨基苯酚，用氨基磺酸鐵除去過量的亞硝酸，在堿性條件下，2-亞硝基一4一乙酰氨基苯酚于430nm波長處有最大吸收。三、實驗內(nèi)容L標準曲線精密稱取撲熱息痛lOOmg,以95%乙醉3mL溶解加適量水，轉(zhuǎn)移于100mL容量瓶中，加水至刻度，充分搖勻，得

20、撲熱息痛儲備液(Img/mL),精密吸取儲備液2.5mL準確稀釋至10mL,得250ug/mL的標準液。分別精密吸取250ug/mL的標準液0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8mL于離心管中，分別加水使成2mL,各加家兔血漿1.5mL,搖勻，再加入2mLi0%三氯醋酸，充分混合再離心20分鐘(3000rpni)°吸取上清液4mL于25mL帶塞刻度試管中，加入ln】L6N鹽酸，lmL20%NaNO2溶液，搖勻，放置5分鐘，使反應完全。慢慢加入2mLi5%叁基磺酸，振搖至無氣泡產(chǎn)生，流水冷卻，加入2.5mL2O%NaOH搖勻，用2cm比色杯于430nm波長處測定吸收度。用蒸儲水

21、2mL代替標準液同法處理，作空白對照。標準液(mL)030.60.91.21.5l.S濃度(mg/mL)50100150200250300A(3次)A求出回歸方程標準曲線(回歸方程)2 .回收率試驗分別精密吸取250“g/mL的標準液0.3、0.9、1.8mL于離心管中各三份，分別加水使成2mL,各加家兔血漿L5mL,搖勻,以下操作同標準曲線項下“加入2mLi0%三氯醋酸,充分混合“起,依法操作，測定吸光度，代入回歸方程求其濃度，并與加入時濃度相比求出回收率.初始濃度(ug/mL)吸光度測得濃度(ug/mL)回收率(%)回收率均值RSD(%)21.4364.29128.583 精密度試驗精密吸

22、取250ug/n】L的標準液0.3、0.9、1.8mL于離心管中各6份，分別加水使成2mL,各加家兔血漿L5mL,搖勻,以下操作同標準曲線項下“加入2mLi0%三氯醋酸,充分混合“起,依法操作,測定吸光度，求其日內(nèi)精密度。初始濃度（ug/mL）吸光度吸光度均值RSD(%)21.4364.29128.584 .樣品穩(wěn)定性考察將上述標準曲線項下的“0.9mL”樣品處理好后于0.5h、lh、2h、3h、4h測定吸收度，考察處理后樣品室溫放置時的穩(wěn)定性。時間（h）（）0.51234吸光度均值RSD(%)5.樣品測定取家兔5只（雌兔不得懷孕），每只體重2.5kg3kg,給藥前先從耳靜脈取血3mL留作對照

23、。然后按200mg/kg的劑量，肌注給藥（給藥前禁食12小時）。給藥后按第3、5、10、15、25、30、40、60、100、140、180分鐘，定時從兔耳靜脈取血3mL,用干燥并帶有適量肝素鈉的離心管集血,輕輕搖勻，離心10分鐘（3000rpm）,吸取血漿于干燥試管中，置冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｈ〕鰺o藥血漿與各時刻的含藥血漿，室溫解凍后進行測定：吸取1.5mL血漿，置刻度離心管中，加水2mL,混勻，以下操作同標準曲線項下“加入2mLi0%三氯醋酸，充分混合“起，依法測定吸收度，代入標準曲線，計算出該時刻的血藥濃度，以無藥血漿按同法處理作對照。6.結(jié)果記錄兔子體重：給藥劑量：測定記錄：編號123456

24、7S91011T(min)35101525304060100140180AAC(ug/mL)IgCT(min)C(yg/mL)尾段直線相外推線濃度的對數(shù)(IgCQ外推線濃度(CQ殘數(shù)濃度(ug/mL)Ch=C外棒-C殘數(shù)濃度的對數(shù)lgC«c尾段直線相斜率=K=殘數(shù)斜率=1<=四、數(shù)據(jù)處理1 .以血藥濃度(ug/mL)為縱坐標，時間為橫坐標，作吸收曲線圖(血藥濃度一時間曲線)。2 .以血藥濃度(ug/mL)的對數(shù)對時間作血藥濃度一時間的半對數(shù)圖，從圖中求出消除速度常數(shù)K,再用殘數(shù)法求出吸收速度常數(shù)ka。3 .提取參數(shù)(h/25收、多/2制除、3、Cp)A.吸收半衰期：t1/2唳收

25、=0693/kaB.消除半衰期：ti/2滔近=0.693/KC.血藥濃度-時間曲線下的總面積(AUCO-8)D.達峰時間(tp)根據(jù)ka及K求出達峰時間tptp=(lnka-lnK)/(ka-K)=2.3O3X(lgka-lgK)/(ka-K)拋物線擬合法用拋物線C=p+Qt_+Rt2的峰段代替藥時曲線的峰段，選取實驗數(shù)據(jù)中最大濃度C(I)左右三點，瓜GmGi+iJ代入'則有：C(i/尸P+Qti.i=RE.Ci=P+Qti=Rt2iC(i+1)=P+Q-ti4.=R42i+i解上述方程組，求得P、Q、R的值拋物線的峰丟按橫坐標(峰時)為tp=-Q/2RE.峰濃度CpCp=A(e-Kl

26、p-e-Kalp)A-截距(可以從lgCt圖中求得)實驗結(jié)果：思考題：血藥濃度法求算藥物動力學參數(shù)的原理？血藥濃度法測定藥物動力學參數(shù)的要求？13/20生物藥劑學與藥物動力學實驗講義實驗四大鼠在體小腸吸收實驗一、實驗目的1 .掌握大鼠在體小腸吸收的實驗方法。2 .掌握計算藥物的吸收速度常數(shù)（Ka）,以及每小時吸收率的計算方法。二、實驗原理大多數(shù)藥物以被動擴散方式從生物膜的高濃度側(cè)通過膜向低濃度側(cè)轉(zhuǎn)運。被動擴散可用Fick第一定律來描述。該定律指出，擴散速度（dC/dt）正比于膜兩惻的濃度差（：），因此有：-=KaC=Ka（C-Ch）（1）式中。是消化道中的藥物濃度，是血液中藥物濃度，Ka是吸收

27、速度常數(shù)，其值大小取決于藥物的擴散常數(shù)、吸收膜的厚度與面積以及藥物對膜的穿透性。胃腸道吸收的生物學過程包括這樣一個系統(tǒng)，即藥物從胃腸道屏障的一側(cè)向另一側(cè)擴散。因為進入血液的藥物很快分布到全身，故與吸收部位比較，血中藥物濃度維持在很低的水平。幾乎在所有口服給藥的情況下，對于胃腸道來說,血液的作用猶如“水槽工并且在整個吸收相保持很大的濃度梯度，C»Cb,則七C,于是（1）式可以簡化為：=KaC（2）dt此為一級速度方程式的標準形式。胃腸道按一級動力學從消化液中吸收大多數(shù)藥物.用消化液中藥物量的變化）dXa/dt）表示吸收速度，則：一獨=K“Xdt將（3）式積分，并在方程兩側(cè)同取對數(shù)。In

28、Xu=InX（0）-Kat（4）式中Xa為消化液中藥物量，Xa（O）為零時刻消化液中藥物量，Ka為藥物吸收速度常數(shù)。以InXa對t作圖得一條直線，其斜率為藥物在小腸中的吸收速度常數(shù)（Ka）。三、實驗內(nèi)容1 .實驗操作（1） 取85ml供試液（100mlKrobsRinger試液含SD2mg,酚紅2mg）加入循環(huán)裝置中。（2）將實驗前禁食一夜，體重200g左右的雄性大鼠，稱重，腹腔注射戊巴比妥鈉（劑量為100g體重注射0.4ml）,麻醉后并加以固定。（3） 沿腹中線打開腹腔。自十二指腸上部及回腸下部各剪開一個小口，各插入直徑為0.5cm的玻璃管，用線扎緊，并用37的生理鹽水將小腸內(nèi)容物沖洗干凈，

29、然后將大鼠串聯(lián)到循環(huán)裝置中O（4） 開動蠕動泵，以5nW分的流速循環(huán)10分鐘后流速調(diào)至2.5nW分。（5）自燒瓶中取樣1.5ml（Imk0.5ml各一份）為和酚紅零時間樣品,并補加2ml酚紅溶液（每亳升Krobs-Ringer試液含酚紅20ug）,其后每15分鐘取樣（1ml、0.5ml各一份），同時補加酚紅溶液2mL由于酚紅不被小腸吸收，用以測定水被小腸吸收的量，2.定量方法（1）磺胺嗑噬的定量取樣品1ml,加入lmol/L5ml.加入0.1%NaNO21mL搖勻，放置3分鐘，加入0.5%氨基磺酸氨1ml,搖勻,放置3分鐘。加入0.1%蔡乙二胺2ml,搖勻,放置20分鐘.在波長555nm處測定

30、吸收度。參比溶液的配制：取1ml供試液按磺胺嗑蛇的定量方法不加荼乙二胺顯色劑°2） ）酚紅定量取酚紅溶液0.5ml,加入0.2mol/LNaOH5ml,搖勻,在波長555nm處測定吸收度。參比溶液：0.2mol/LNaOH溶液。3） 標準曲線的制備（1）酚紅的標準曲線精密稱取酚紅lOOmg,置1000ml容量瓶內(nèi)，加1%Na2cCh溶液溶解并稀釋至刻度，制成100ug/ml的儲備液。取1,2,3,4,5,6ml的儲備液于10ml容量瓶中，加蒸鏘水至刻度。自上述各溶液中吸取0.5mL按酚紅的定量方法測定吸收度，并繪制標準曲線。（2）磺胺暗噬標準曲線精密稱取磺胺嗑咤標準品10mg置100

31、ml容量瓶中，以蒸鐳水溶解并稀釋至刻度，使成100ug/ml的儲備液。取儲備液適量，稀釋成20100ug/ml的溶液，分別吸取2,4,6,8,10ml于10ml容量瓶中，加蒸儲水至刻度。從上述溶液中吸取1ml按磺胺喀吃定量方法測定吸收度，并繪制標準曲線,四、數(shù)據(jù)處理1. 將實驗數(shù)據(jù)按表1中公式進行計算。表1大鼠在體小腸吸收量的計算式取樣時間（h）SD吸收度SD濃度酚紅吸收度酚紅濃度供試液體積剩余藥量循環(huán)前AoCoAoCoV（尸85mlPo=85xCo0AjClAtCl1G0.25a2c2A2c2v_（K-1.5）C1+4。2c；一12=CM+1.5ZG0.5AsC3A3C3_（V2-1.5）C2+403Q6=GK+i.5（G+g）InAnCnAnCn+4。G一|2=CM+1.5ZG2以剩余藥量的對數(shù)對時間作圖，求出吸收速度常數(shù)Ka和每小時吸收率（）。每小時吸收率（）=（零時間剩余藥量一60分鐘剩余藥量）/零時間剩余藥量x100%思考題：用小腸剩余藥量測定吸收速率常數(shù)的原理？17 / 20實驗五氨茶堿藥物動力學的研究一、實驗