1、名詞解釋1細胞工程：利用細胞生物學和分子生物學方法以生物細胞或組織為研究對象，按照人們的意愿進行工程學操作，從而改變生物性狀，或產生新物種貨品系。2植物細胞全能性：每個植物細胞都具有該物種的全部遺傳信息，在適宜條件下具有發育成完整植株的能力。3外植體：把由活植物體上切取下來的進行培養的那部分組織或器官叫外植體4愈傷組織：通常指植物受到機械、動物或微生物等傷害后，創傷部位的細胞脫分化而不斷增殖形成松散排列、無特定結構和功能的非器官化組織。5脫分化：離體條件下，細胞脫離原狀態而回復到分生狀態，這一會變過程稱脫分化或去分化。6再分化：脫分化的細胞在特定條件誘導下，再次開始新的分化發育過程，最終形成各

2、種組織、器官或胚狀體等，稱再分化。7胚狀體：離體培養下沒有經過受精過程，但經過了胚胎發育過程所形成的胚的類似物，（不管培養的細胞是體細胞還是生殖細胞），統稱為體細胞或胚狀體。8人工種子：通過植物組織培養中所產生的體細胞胚或珠芽等包埋在“人工胚乳”和“人工種皮”里，制成的具有播種功能、類似天然種子的顆粒。9胚胎培養：是植物組織培養的一個主要領域。植物胚胎培養是指對植物的胚（種胚）及胚器官（如子房、胚珠）進行人工離體無菌培養，使其發育成幼苗的技術。10原生質體培養：將植物細胞游離成原生質體，在適宜培養條件下，使其再生細胞壁，進而分裂形成愈傷組織或胚狀體，最后發育形成完整植株。11體細胞雜交：原生質

3、體融合也叫做體細胞雜交，使分離出來的不同親本的原生質體，在人工控制條件下，相互融合成一體，形成雜種細胞，并進一步發育成雜種植株的技術。12單細胞培養：指從外植體、愈傷組織、群體細胞或者細胞團中分離得到單細胞，然后在一定條件下對其進行培養的過程。13平板培養法：將單個細胞與融化的瓊脂培養基均勻混合后平鋪一薄層在培養皿底上的培養法。14看護培養：指用一塊活躍生長的愈傷組織來看護單個細胞，并使其生長和增殖的方法。15動物細胞與組織培養：是從動物體內取出細胞或者組織，模擬體內的生理環境，在無菌、適溫和豐富的營養條件下，使離體細胞或者組織生存、生長并維持結構和功能的一門技術。是動物細胞工程的基礎。16接

4、觸性抑制：由細胞接觸而抑制細胞運動的現象稱為接觸抑制. 接觸抑制是體外培養中某些貼附型細胞生長特性之一.由于細胞之間有接觸抑制特性,一般的正常細胞并不互相重疊于其上而生長,而是呈單層細胞生長.但腫瘤細胞由于無接觸抑制而能夠繼續移動和增殖,導致細胞向三維空間擴展,使細胞堆積.因此,接觸抑制可作為區別正常細胞與癌細胞之一. 密度抑制：當細胞密度進一步增大，培養液中營養成分減少，代謝產物增多時，細胞因營養的枯竭和代謝物的影響，則發生密度抑制，導致細胞分裂停止的現象。 17有限細胞系：原代細胞經過一次傳代后，形成的細胞系。如果不能繼續傳代或傳代有限，稱為“有限細胞系” 無限細胞系：原代細胞經過一次傳代

5、后，形成的細胞系。如果可以連續傳代則稱為“連續細胞系”，細胞獲得不死性（持久增殖能力）。18飼養細胞：即滋養細胞，一層經過特殊處理的用做克隆細胞底物的細胞層。19干細胞：是一類具有自我更新和分化潛能的細胞。20胚胎工程：指以動植物胚胎為研究對象而產生的一系列技術操作，如胚胎移植、胚胎冷凍保存、胚胎分割、體外胚胎生產、動物克隆、性別控制及基因導入等。21：胚胎移植：指對優秀雌性動物進行超數排卵處理，在其發情配種后一定時間內從其生殖道取出早期胚胎，移植到同期發情的普通雌性動物生殖道的相應部位，讓其生產后代的技術。22：超數排卵：在動物發情周期的適當時期，用促性腺激素進行處理，誘發其卵巢上大量卵泡同

6、時發育并排卵的技術，簡稱超排。23固定化培養：將游離的細胞包埋或吸附在多糖或多聚化合物制備成的網狀支持物中或表面，培養液呈流動狀態進行無菌培養。選擇題、填空題1. 植物細胞工程是在植物組織培養基礎上發展的，建立在細胞學說、細胞全能性的基礎上。2. 細胞工程基本實驗室組成（制備室）（無菌操作室）（培養室）3. 細胞學觀察設備是（普通顯微鏡）（倒置顯微鏡），用于觀察細胞的生長的情況和有無污染用（倒置顯微鏡）4. 無菌操作的儀器設備有（超凈工作臺）（高壓蒸汽滅菌鍋）（過濾除菌裝置）（干熱滅菌烘箱）5. 無菌操作技術方法中常用的滅菌方法包括物理的（濕熱滅菌法），用于對一般培養基、玻璃器皿、橡膠制品等滅

7、菌；（過濾除菌），熱不穩定的動物細胞培養液滅菌方法；玻璃器皿的滅菌用（干熱滅菌）；接種室、超凈臺或接種箱內常用（紫外線滅菌）。化學消毒方法（熏蒸消毒）（藥劑噴霧消毒）；培養基滅菌用濕熱滅菌法和過濾除菌法6. 化學消毒法中常用的藥品：甲醛、高錳酸鉀、酒精、來蘇兒、次氯酸鈣、次氯酸鈉、過氧化氫、升汞7. 生長素中IBA、IAA、NAA、2,4-D誘導細胞的分裂和根的分化，IBA、IAA和IAA誘導生根，2,4-D誘導愈傷組織；細胞分裂素有6-BA、KT、ZT、2iP，促進細胞分裂和分化不定芽；赤霉素，抑制愈傷組織形成，促進芽的形成，常見的有GA3 8. 激素平衡假說：生長素/細胞分裂素高，誘導根的

8、生成，生長素/細胞分裂素低誘導芽的生成，生長素和細胞分裂素必須協調試用才能再生正常植株。9. 愈傷組織分為（胚性愈傷組織）（非胚性愈傷組織）10. 人工種子的結構：體細胞胚、人工胚乳、人工種皮11. 植物培養基成分：無機成分、有機營養成分、生長調節物質、培養材料的支持物12. 最常用的植物培養基是MS培養基，其母液的配制包括：大量元素的母液、微量元素的母液、鐵鹽的母液、有機母液、激素母液13. 離體快繁出現問題：污染、褐變、玻璃化14. 脫毒方法有物理方法、化學方法、生物學方法15. 莖尖脫毒（生物學方法）的原理：病毒在植物體內分布不均，莖尖處一般無病毒或很少。16. 莖尖越小，脫毒效果越好，

9、但成活率低，剝離技術要求也越高。17. 植物脫毒效果的檢測方法：視覺觀察法、指示植物鑒定、血清鑒定法、電子顯微鏡鑒定法、分子生物學檢測法18. 花藥花粉取材時期：一般是單核期,尤其是單核中、晚期(單核靠邊期)19. 通過花粉培養的植株都是單倍體植株；通過花藥培養的植株包括單倍體、二倍體、多倍體、非整倍體等的混合群體20. 被子植物胚乳的發育根據其發育初期是否形成細胞壁可分為核型胚乳、細胞型胚乳、招生目胚乳。胚乳發育成的植株一般是三倍體21. 胚培養分為成熟胚培養和有胚培養22. 未授粉胚珠誘導愈傷組織或胚狀體再生植株，形成單倍體植株已授粉胚珠-胚正常發育過程，形成種子未授粉子房：來自性細胞（卵

10、細胞、助細胞、極核、反足細胞）發育成單倍體植株；來自體細胞（珠被、子房壁）發育成二倍體植株；已授粉子房：來自合子或體細胞（珠被、子房壁）產生二倍體植株；若胚乳也能形成，可得到三倍體植株23. 原生質體體培養時最好取幼嫩葉片，分離方法有機械法和酶解法，常用的酶有纖維素酶和果膠酶24. 原生質體純化方法：沉降法、漂浮法、界面法；活力檢測方法：目測法、FDA法、伊凡藍法；原生質培養方法：液體淺層培養法、固體平板法、固液結合培養法；原生質體再生的三個階段：細胞壁再生、細胞分裂、植株再生25. 分離時加入滲透壓穩定劑的目的：保證原生質體完整性。原生質膜穩定劑為了提高原生質體膜的穩定性和活力26. 體細胞

11、雜交能試驗緣雜交形成新物種的原因：能夠實現中間雜交并能獲得可育后代27. 原生質體融合方法：PEG法、電融合技術、無機鹽誘導融合、高pH-高Ca離子、PEG結合高鈣-高pH誘導法28. 單細胞分離的方法：機械法、酶解法29. 單細胞培養的方法有固體平板培養法、看護培養法、微室培養法。30. 最常用的單細胞培養方法是固體平板培養法，常以植板率來衡量培養效果。植板率：能長出細胞團的單細胞在接種單細胞中所占的比例。植板率=（每個平板形成的細胞團數）/(每個平板接種的細胞總數)31. 植物細胞大規模培養主要有懸浮培養和固定化培養32. 成批培養/分批培養：將一定量細胞或細胞團接種到一定容積的密閉容器中

12、進行培養。它是進行細胞生長和細胞分裂的生理生化研究常用的培養方法。特點：（1）除氣體交換外，培養系統不與外部進行物質交換。培養基體積固定；（2）必須適當攪拌；（3）培養過程中，細胞生長，其數目不斷發生變化，呈S增長；（4）當營養耗盡時，細胞停止分裂生長，完成培養過程，細胞和產物一次性收獲。但要進行下一批培養，則需要繼代轉移。 半連續培養：每隔一定時間倒出一定量的懸浮液，同時補充加入等量的新鮮培養液33. 植物細胞懸浮培養的生物反應器有機械攪拌式生物反應器、氣升式生物反應器34. 常用的超低溫保存方法可分為兩類，即冷凍誘導保護性脫水的超低溫保存和玻璃化處理的超低溫保存。超低溫保存植物種質資源的程

13、序包括培養材料的準備、預處理、降溫冰凍及保存、解凍處理、細胞活力和變異的評價、植株再生等幾個步聚。 傳統的降溫冷凍方法：快速冰凍法 、慢速冰凍法 、兩步法 、逐級冰凍法 解凍一般采用快速化凍方法，即將液氮保存后的材料在35°C40°C溫水浴中化凍35. 體外培養的動物細胞依據它們是否貼附在支持物表面生長而分為兩大類型，即：貼附型細胞和懸浮型細胞。 體外貼附型細胞形態大致可以分為：成纖維型細胞、上皮型細胞、游走型細胞、多形型細胞36. 培養細胞生命周期有三個階段：原代培養期、傳代期、衰退期37. 冷凍保存細胞應選擇原代培養及傳代培養早期的細胞。進行各種實驗的每一代中最好階段是

14、對數期38. 培養基和各種培養用液有平衡鹽溶液PBS、消化液。最常用的消化液有胰蛋白酶、EDTA39. 動物細胞培養基可分為天然培養基及合成培養基兩大類40. 大多數哺乳動物細胞的培養適宜溫度：37，最適pH為7.2-7.4之間41. 實驗室中動物細胞的培養方法有：懸滴培養法、培養瓶培養法、旋轉管培養法、灌注小室培養法、培養板培養法、克隆培養法（單細胞分離培養法）42. 細胞克隆（單細胞分離培養），即把一個單細胞從一個群體中分離出來單獨培養，使之重新繁衍成為一個新的細胞群體的培養技術。最常用的克隆培養法是稀釋鋪板法。43. 細胞轉化及惡性程度檢查一般利用軟瓊脂培養法檢測44. 細胞生長狀況 細

15、胞計數，血球計數板和電子細胞計數儀 生長曲線：（潛伏期，對數生長期，水平靜止期）由于細胞基數和生長進度不同，生長曲線不一致。 細胞分裂指數，分裂細胞占全部細胞的比例 細胞貼壁率=貼壁存活細胞/接種細胞*100% 細胞周期時間測定：用同位素標記，流式細胞儀測定細胞同期 細胞活力檢測：MTT45. 動植物細胞融合的方法：仙臺病毒法、PEG誘導融合法、電融合法46. 干細胞按分化潛能大小來分類：全能干細胞、多能干細胞、單能干細胞；根據來源來分：來源于胚胎-胚胎干細胞 、來源于成體-成體干細胞 47. ES/EG細胞的鑒定方法有：細胞的形態結構、核型分析、堿性磷酸酶（AKP）染色、SSEA免疫熒光標記

16、、OCT-4表達、分化能力檢測ES/EG細胞系的特性：無限增殖性、分化潛能性、種系傳遞性 簡答題1 簡述植物細胞工程的應用。答：植物離體繁殖和脫毒、花藥花粉培養及單倍體育種、原生質體的培養及體細胞雜交、次生代謝物的生產、種質資源離題保存、植物遺傳轉化2 無菌操作的注意事項有哪些？3 植物形態建成有哪些途徑？答：器官發生途徑 器官直接發生途徑：外植體à不定芽器官間接發生途徑：外植體à愈傷組織à不定芽胚狀體發生途徑 直接發生途徑：外植體à體細胞胚間接發生途徑：外植體à愈傷組織à胚狀體4 培養條件下的器官發生有哪些方式？影響其發生的因素有哪

17、些？答案見作業本5 什么叫胚狀體？體細胞胚的發生有哪些特點？答案p526 植物離體快繁定義及意義答：植物離體快繁是通過離體培養，將來自優良植株的莖尖、腋芽、鱗片、葉片等器官、組織或細胞進行無菌培養，經過不斷切割和重復培養，使增殖并再生形成完整植株，以期在短期內以更快的速度獲得遺傳性均一的大量個體。 意義：a.快速繁殖新品種，使優良品種迅速使用b.節約耕地，提高農產品的商品率c生產無病毒種苗，防止品種退化d便于運輸7 離體無性快繁一般可分為那幾個階段？簡述其操作的一般程序。答案見作業本（無菌培養物的建立：健康植物上選健壯的枝梢à去葉片用自來水沖洗à 75%酒精1分鐘à

18、;次氯酸鈉5-10分鐘à培養à再生）8 花藥培養和花粉培養的區別是什么?答案見作業本9 單倍體植株與它的二倍體相比較有什么特點？答：a.體細胞染色體數減半b生長發育弱，體形小、各器官明顯減小c.雌雄配子嚴重敗育，有的甚至不能進入有性世代10幼胚的發育方式有哪些？答：胚性發育： 幼胚接種到培養基上以后，仍然按照在活體內的發育方式發育，最后形成成熟胚(有時甚至可能類似種子)，然后再按種子萌發途徑出苗形成完整植株，這種途徑發育的幼胚一般一個幼胚將來就是一個植株。早熟萌發： 幼胚接種后，離體胚不繼續胚性生長，而是在培養基上迅速萌發成幼苗，通常稱之為早熟萌發。愈傷組織：在許多情況下，

19、幼胚在離體培養中首先發生細胞增殖，形成愈傷組織。幼胚培養的關鍵技術是什么？（或是注意事項）答：a.取材時，取球形胚至魚雷形胚階段的胚胎b幼胚剝離時，要注意保濕，無菌且操作要迅速，要連胚柄一同取出c剝離出來的幼胚要立刻接種到培養基進行培養11植物體細胞雜交的意義：答：a實現遠緣雜交，形成新的物種b.創造細胞質雜種c.培養作物新種質和新品種12在植物細胞培養中如何提高植物次生代謝產物的產量？答案見作業本13比較天然培養基和合成培養基的優缺點。答：（1）天然培養基 其優點是營養成分豐富、含各種生長因子、激素，培養效果好； 缺點是成分復雜、來源受限，個體差異大、批次間差異大。 （2）合成培養基 優點：

20、它能給細胞提供一個近似于體內的生存環境，化學成分明確，組分穩定，同時又便于控制和標準化。這些是天然培養基無法比擬的。 缺點：不能促進細胞增殖生長；須加入胎牛血清、小牛血清等。14講述原代培養和傳代培養的主要的過程。答案見作業本15胚胎移植的基本程序：供體和受體的選擇、供體的超數排卵、受體的同期發情處理、胚胎回收、胚胎檢查及質量鑒定、胚胎移植16ES細胞的生物學特性有哪些？答：ES細胞來自正常的胚胎，具有完整的二倍體核型。ES細胞的形態學表現為體積小、核大、胞質少、有1或2個核仁，細胞與細胞緊密地聚集在一起，細胞間界限不清，呈集落型生長，形似鳥巢，集落邊緣清晰，折光性強。ES細胞可以表達早期胚胎細胞特異表達的基因。ES細胞具有無限增殖的能力。ES細胞具有廣泛的體內分化能力。ES細胞具有廣泛的體外分化能力。ES細胞具有種系傳遞功能。ES細胞可在體外培養、克隆、凍存及進行遺傳操作。 論述題簡述雜交瘤生產單克隆抗體的原理及主要技術過程。答：（1）原理1.骨髓瘤細胞在體外培養能大量無限增殖，但不能分泌特異性抗體；而抗原免疫的B淋巴細胞能產生特異性抗體，但在體外不能無限增殖。將免疫B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合后形成的雜交瘤細胞，繼承了兩個親代細胞的特性，即具有骨髓瘤細胞能無限制增殖的特性，又具有免疫B細胞合成和分泌特