1、風(fēng)濕性疾病的實(shí)驗(yàn)室診斷(diagnoses of rheumatic diseases)小 結(jié)1. 風(fēng)濕病的概念2. 自身抗體的概念3. 自身免疫性疾病與風(fēng)濕病的關(guān)系4. 部分自身免疫性疾病的抗體譜5. 自身抗體的實(shí)驗(yàn)室檢測及臨床意義1）抗核抗體4)RF7) ANCA2） Ds-DNA5)CCP3) ENA6)ACA一概念1. 風(fēng)濕（ Rheuma） : 是指關(guān)節(jié)、關(guān)節(jié)周圍軟組織、肌肉、骨骼出現(xiàn)的慢性疼痛。2.風(fēng)濕性疾病 ( rheumatic diseases): 是指一大類病因各不相同,但累及機(jī)體多個(gè)器官、關(guān)節(jié)及其周圍組織的疾病.3. 自身免疫性疾病：免疫損傷在風(fēng)濕性疾病的發(fā)病中占有重要位

2、置，許多風(fēng)濕性疾病，是因?yàn)槊庖弋惓Ｋ陆M織損傷。4.自身抗體（autoantibidies ）：是指抗自身組織器官、細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞表面和細(xì)胞外成分的免疫球蛋白一些自身免疫性風(fēng)濕病伴有特征性的自身抗體( 譜 )二自身抗體實(shí)驗(yàn)室診斷1. 抗核抗體 ( ANA)(1) 定義傳統(tǒng)定義：針對(duì)細(xì)胞核成分自身抗體的總稱.廣義定義：抗核抗體的靶抗原已不再局限于細(xì)胞核內(nèi)，而是擴(kuò)展到整個(gè)細(xì)胞，是針對(duì)細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的總稱。(2) 抗核抗體的分類(3) 抗核抗體的特性ANA 主要是 IgG 抗體 ;ANA 無器官特異性和種屬特異性；ANA 主要存在于血清中；(4) ANA 檢測的臨床意義i. ANA 可見于多種疾病

3、，特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締組織病的診斷、病情判斷和療效觀察的指標(biāo)。ii. 高滴度 ANA 提示有自身免疫性疾病可能。iii. ANA 檢測已成為臨床上診斷自身免疫病的一種重要的指標(biāo)2.ANA 檢測方法（ 1）初篩實(shí)驗(yàn)：1）間接免疫優(yōu)點(diǎn)：可同時(shí)檢測大量抗體，獲得較高的檢測效率；可檢測到一些至今未知的抗體。缺點(diǎn)：操作煩雜（現(xiàn)有全自動(dòng)設(shè)備，可解決問題）；需要有經(jīng)驗(yàn)的人員讀片。2) ELISA法測 ANA優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，有標(biāo)準(zhǔn)品，可定量；可觀察濃度變化，有助于臨床進(jìn)行病情及療效的觀察；缺點(diǎn)：包被靶抗原量有限，易漏檢。3) ELISA法與 IIF 法 ANA 檢測結(jié)果有時(shí)不一致 IIF 法陽性，

4、ELISA 法陰性原因：太多數(shù)IIF法采用HEp-2 細(xì)胞作為包被玻片的基質(zhì)，大約100 至 150 種自身抗原 IIF 法陰性， ELISA 法陽性原因：1. IIF法抗原含量豐富，抗原存在分布不均、含量過低；2. 不同處理方法對(duì)特定抗原有破壞，可能導(dǎo)致部分特異抗體的漏檢；3. ELISA 法方法靈敏度高；4. 干擾因素：溶血、嗜異性抗體等引起假陽性。4） 美國風(fēng)濕學(xué)會(huì)(ACR) 建議篩查實(shí)驗(yàn)：IIF-ANA 仍然為 ANA 檢測的金標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室在 ANA 報(bào)告當(dāng)中必須注明ANA 檢測方法（ 2）確認(rèn)實(shí)驗(yàn)1) 缺點(diǎn)一種確認(rèn)實(shí)驗(yàn)不能同時(shí)檢測所有特異性抗體自身免疫性疾病患者體內(nèi)存在的自身抗體種類多

5、不是所有相關(guān)純化抗原都能得到（確認(rèn)實(shí)驗(yàn)對(duì)抗原的要求很高，必須使用高質(zhì)量的純化抗原。由于一種抗原只能檢測一種抗體，多種抗體的檢測則需要多種單獨(dú)的抗原，而目前為止并不是所有相關(guān)純化抗原都能得到，因此應(yīng)用受到限制。）2)特異性抗核抗體檢測的臨床意義抗 Sm 抗體以患者姓名命名是SLE的標(biāo)志性抗體，陽性率為30.2%。在全部抗Sm 陽性的病例中，92.2%為 SLE。SLE病人由活動(dòng)期轉(zhuǎn)為緩解期后，ANA、抗 DNA 抗體效價(jià)可降低，但Sm 抗體依然存在。因此對(duì)早期、不典型的SLE或經(jīng)治療緩解后的回顧性診斷有一定意義。 SSA抗體SSA抗體主要見于原發(fā)性干燥綜合征（ SS），陽性率高達(dá) 60 75，合

6、并 SLE者為 30-50%，單純 SLE者為 8-10%，其他結(jié)締組織病極少陽性。 SSB抗體SSB抗體是 SS血清特異性抗體。在原發(fā)性SS陽性率達(dá)40。SSB抗體陽性幾乎總伴有抗SSA抗體陽性，其他自身免疫性疾病中如有抗SSB抗體，常伴有繼發(fā)性干燥綜合征。在其它結(jié)締組織病中，該兩種抗體同時(shí)出現(xiàn)，常提示繼發(fā)性干燥綜合征的存在。抗 SSB和抗 SSA抗體相伴出現(xiàn)，有單獨(dú)的SSA出現(xiàn)，但單獨(dú)的SSB出現(xiàn)的少。抗 nRNP（ nuclear RNP）：無疾病特異性混合性結(jié)締組織病(MCTD)：幾乎均為陽性，且滴度很高，對(duì)確立MCTD 的診斷很有幫助。MCTD 的抗RNP 陽性率 >95%。高

7、滴度的抗RNP，尤其在沒有其他自身抗體存在的情況下，一般認(rèn)為是混合性結(jié)締組織病（MCTD）的診斷標(biāo)志。其他結(jié)締組織病：抗RNP抗體在其他結(jié)締組織病陽性率較低且滴度低。系統(tǒng)性紅斑狼瘡 （ SLE）：抗 RNP抗體在SLE中的陽性率為40%左右，抗 RNP 抗體若與抗dsDNA 抗體、抗Sm 抗體同時(shí)存在，則發(fā)生狼瘡腎炎的可能性較大。Sm 與 RNP 是同一分子復(fù)合物中的不同抗原位點(diǎn)，兩種抗原具有相關(guān)性，因此血液中兩種抗體基本同時(shí)存在，單一陽性的情況很少。抗 Scl-70靶抗原： DNA-拓?fù)洚悩?gòu)酶1 的 C 端末區(qū)。 系統(tǒng)性硬皮病的標(biāo)志性抗體抗 Jo-1 抗體靶抗原：組氨酰tRNA 合成酶，一種

8、細(xì)胞漿磷酸蛋白。多發(fā)性肌炎 / 皮肌炎（ PM/DM) 的標(biāo)記性抗體陽性患者多數(shù)伴有間質(zhì)性肺部疾病和多關(guān)節(jié)炎及關(guān)節(jié)痛。與陰性患者相比，陽性患者發(fā)病年齡輕，病情進(jìn)展快，療效差，預(yù)后較差。Sm 、 RNP 、SSA 、SSB 、 Jo-1中不含 DNA ，稱可提取核抗原.、 Scl-70：是由許多小分子RNA與各自對(duì)應(yīng)的特定蛋白質(zhì)組成的核糖核蛋白顆粒，分子3)IIF-ANA 初篩會(huì)漏檢哪些ANAsIIF-ANA 篩查會(huì)導(dǎo)致各種 ANAs 漏檢以抗 Jo-1、 PM-Scl、 Scl-70漏檢最多， ACA的漏檢最少 ANA 陰性，病人有癥狀，進(jìn)一步檢測特異性的自身抗體4) 自身抗體的檢測流程ANA

9、 篩查實(shí)驗(yàn)與特異實(shí)驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行，提高檢出率！ DsDNA抗 dsDNA 抗體是 SLE患者的特征性標(biāo)志抗體，是SLE重要診斷標(biāo)準(zhǔn)之一，診斷的特異性可達(dá)95% 100%。檢測方法主要有間接免疫熒光法：特異性高ELISA法：可定量，結(jié)果可溯源至WHO（TRINITY）；濃度與病情的活動(dòng)性呈正相關(guān)；由于方法學(xué)原因有時(shí)有假陽性。抗 dsDNA 抗體定量檢測不僅能準(zhǔn)確反應(yīng)患者檢測結(jié)果偏離正常值的程度，而且抗體水平變化與病情活動(dòng)相關(guān)。病情活動(dòng)、加劇時(shí)，抗體陽性且水平升高，反之，降低甚至消失。在 ELISA方法中，采用生物提取的 dsDNA 作為實(shí)驗(yàn)基質(zhì)，在制備過程中， DNA 的內(nèi)部結(jié)構(gòu)位點(diǎn)可能少部分人為暴

10、露，從而會(huì)因抗 ssDNA抗體的存在產(chǎn)生偶然性非特異性反應(yīng)，從而造成假陽性反應(yīng)。綠蠅短膜蟲為抗原基質(zhì)檢測抗 dsDNA 抗體類風(fēng)濕因子(RF)抗人IgG 分子Fc 片段上抗原決定簇的特異性抗體, 分為IgM、 G、 A、E 型 .RF 在 RA 中的陽性率為70%80，是診斷RA的重要標(biāo)準(zhǔn)之一RF 并非 RA獨(dú)有的特異性抗體，對(duì) RA 的診斷不具特異性.RF（）不等于一定就是RF 含量與病情的活動(dòng)性和嚴(yán)重性成正比，持續(xù)高滴度的RF 常提示 RA病情活動(dòng) .RA， RF（）也不能排除不是RA CCP抗體1.瓜氨酸是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）血清抗聚角蛋白微絲蛋白相關(guān)抗體的主要抗原決定簇2.對(duì) RA 診

11、斷具有高度特異性（98%）3.可在 RA 早期出現(xiàn) ,靈敏度約60%，與 RF聯(lián)合檢測靈敏度可提高至70%-80%4.預(yù)測早期關(guān)節(jié)炎的發(fā)生（提前35）5.RA關(guān)節(jié)侵蝕破壞的早期識(shí)別及預(yù)測6.新 RA 診斷指標(biāo)中 ,CCP抗體已列為RA診斷指標(biāo)之一 .抗心磷脂抗體(ACA)1.是針對(duì)一組含磷脂結(jié)構(gòu)抗原物質(zhì)的自身抗體.2.見于 10%15%的 SLE,33%49%的 RA,是了解疾病進(jìn)展及是否伴發(fā)APS的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo) .2.ACA 陽性的患者發(fā)生血栓性疾病的危險(xiǎn)性增高3.ACA 陽性婦女易發(fā)復(fù)發(fā)生自然流產(chǎn).抗中心粒細(xì)胞胞漿抗體(ANCA)ANCA 是一組以人中性粒細(xì)胞胞質(zhì)成分為靶抗原,與臨床多種小血

12、管炎性疾病密切相關(guān)的自身抗體。靶抗原： 中性蛋白酶 3（PR3），髓過氧化物酶（ MPO），殺菌 / 通透性增高蛋白（ BPI），絲氨酸蛋白酶，人白細(xì)胞彈性蛋白酶（ HLE），乳鐵蛋白（ LF），組織蛋白酶 G， 葡萄糖醛酸酶，溶菌酶。是系統(tǒng)性血管炎的標(biāo)志性抗體5) 自身抗體檢測原則臨床需求決定檢測模式：診斷需求，報(bào)告時(shí)間，經(jīng)濟(jì)水平?jīng)Q定初篩確認(rèn)是否同時(shí)做無 AID 臨床表現(xiàn)的患者：篩查實(shí)驗(yàn)有 AID 臨床表現(xiàn)的患者：篩查實(shí)驗(yàn)和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)缺一不可同一醫(yī)院采用相同方法及相同品牌的試劑盒檢測同一種抗體（建議）建立檢驗(yàn)與臨床溝通平臺(tái)書是我們時(shí)代的生命 別林斯基書籍是巨大的力量 列寧書是人類進(jìn)步的階梯 高爾基書籍是人類知識(shí)的總統(tǒng) 莎士比亞書籍是人類思想的寶庫 烏申斯基書籍 舉世之寶 梭羅好的書籍是最貴重的珍寶 別林斯基書是唯一不死的