1、雞馬立克氏病疫苗研究進展及病毒毒力進化態(tài)勢張立杰(北京市獸醫(yī)生物藥品廠，北京102209)摘要：雞馬立克氏病是一種常見的以淋巴組織增生為主要特征的高度接觸性傳染病。本文分析了馬立克氏病毒毒株進化精況，以及引起病毒毒力進化的原因，對馬立克氏病疫苗研制進展進行了概述。提出應從免疫方法、免疫佐劑、遺傳抵抗等方面入手，緩解病毒毒力增強的態(tài)勢，進而減少馬立克氏病的發(fā)生和傳播，降低該病結養(yǎng)禽業(yè)帶來的經(jīng)濟損失。-關鍵詞：馬立克氏病；疫苗；病毒毒力；控制作者簡介：張立杰，女，1969年生，生物技術專業(yè)博士，畢業(yè)于西北農(nóng)林科技大學。攻讀學位期間先后從事脂肪代謝、丞因芯片數(shù)據(jù)分析等研究，在加拿大蒙特利爾大學圣加斯

2、汀醫(yī)院完成博士論文研究內(nèi)容。現(xiàn)任北京市獸醫(yī)生物藥品廠研發(fā)部副部長，主要負責廠內(nèi)生產(chǎn)工藝改進、新品研發(fā)等工作，帶領研發(fā)團隊完成馬立克細胞苗工藝優(yōu)化、衣原體基因工程苗工藝優(yōu)化、程序降溫儀程序優(yōu)化等項目。馬立克氏病(Marek'sdisease,MD)是由皰疹病毒科、細胞結合性馬立克氏病病毒(Marek'sdiseasevirus,MDV)引起的一種高度接觸傳染性、淋巴組織增生性腫痛疾病。以患雞內(nèi)臟、外周神經(jīng)、性腺、皮膚及眼出現(xiàn)淋巴樣細胞浸潤和形成腫瘤為特征。該病是第一個能用疫苗預防的腫瘤性疾病，因此受到了醫(yī)學界、獸醫(yī)學界、病毒學界的廣泛關注。到目前為止，還沒有有效的方法來治療MD患

3、雞,仍通過疫苗預防控制該病的發(fā)生。近50年來，隨著養(yǎng)雞業(yè)的迅速發(fā)展，MDV的毒力不斷增強，對常規(guī)疫苗的抵抗力增加，甚至宿主范圍都有所擴大。大約每十幾年發(fā)生一次毒力躍遷，與常規(guī)疫苗的發(fā)展幾乎同步。疫苗的研發(fā)和使用在病毒毒力進化過程中是否起到推收a2009-10-30波助瀾的作用，如何采取措施緩解病毒毒力的增強？本文對毒力進化以及疫苗研發(fā)進展進行了分析和概述，提出了減緩毒力增強的途徑。1馬立克氏病病毒進化1.1病毒進化情況Marek在1907首次報道MD,當時主要發(fā)生在成年雞只，發(fā)病率和死亡率都很低。.隨后報道中顯示該病表現(xiàn)出神經(jīng)性癥狀，具有傳染性。1922年，該病在美國大面積蔓延，從過去很低的死

4、亡率上升到20%,剖檢中發(fā)現(xiàn)內(nèi)臟組織中具有淋巴腫瘤。1950年末，呈現(xiàn)出大面積暴發(fā)，在低日齡雞群中最先發(fā)病，死亡率達到30%或更高，伴有神經(jīng)損傷。1965年分離出區(qū)別于“基礎MD株(mMDV)”的“強MD株(vMDV)”，該毒株成為20世紀60年代最嚴重的毒株形式。1970年隨著疫苗使用，該病首次得以控制"。在美國，再一次毒力增強是在20世紀70年代末，暴發(fā)了一場無法解釋的免疫后雞群發(fā)病事件。Witter分離并且描述了引起免疫火雞皰疹病毒(HVT)后高發(fā)MD的MD毒株乳這次分離的毒株被四為是不同以往的病毒vMDVo為了控制該病，,制造了HVT和非致痛性MDV株的二聯(lián)苗。一直到80年代

5、都再未發(fā)現(xiàn)免疫失敗的雞群。90年代，歐洲、澳大利亞、南美洲、亞洲相繼發(fā)生了在免疫二聯(lián)苗、CVI988后仍發(fā)病的情況，進而分離出了wMDV和w+MDV毒株，其病毒分類見表lowMDV和w+MDV,能夠引起高致死率,當感染非免疫雞，可引起高頻率的大腦淋巴損傷，在*4周出現(xiàn)持久的神經(jīng)癥狀。表1MDV病原分類筑點性名稱縮7；病原定義可提供保護的疫苗強毒力vMDVJM/102WHVT免疫的博需不能分離出該病毒"HVT域強莓力wMDVMd5HVT免技的雞郡用JM/1U2W可以引起糧姿，但是免疫rHVT/SB-1聯(lián)苗的雞郡用Md5感染小能分離出病甫貼HVT+SB1祖姐強勝力w+MDV648AHVT

6、/SB1狹得免發(fā)的鳴群Md5攻毒產(chǎn)生新毒.但是從CV1988免疫的雞群中用648A攻毒不能分離出病毒”CV1988我國也于1973年首次證實了MD的存在，每年因此病造成的損失達數(shù)T萬元甚至上億元。近年國內(nèi)學者也相繼發(fā)現(xiàn)了不同的毒株。韋平實驗室從已免CVI988/Rispens株疫苗但在生K后期(110日齡)發(fā)生較嚴重MD腫瘤的三黃雞中，分離到1株MDV-KYL040920),并開展了相關的鑒定工作。結果顯示，該分離株具有血清I型MDV的基因特征(meq和132-bpr基因)，可導致雞的急性腫瘤;三黃雞抗性品系的腫瘤發(fā)生率顯著低于普通品系，但在HVI免疫和未免疫雞之間無顯著差異。結果表明，YL0

7、40920是一個可突破HVT免疫并引起急性腫瘤的w或w+MDV毒株。1.2病毒進化的原因在養(yǎng)禽業(yè)發(fā)生變革的20世紀50年代，在溫和型(niMDV)毒株的基礎上出現(xiàn)了MDV強毒(vMDV)毒株；自70年代初期引入MD單價疫苗(HVT)后大約10年，出現(xiàn)MDV超強毒(wMDV)毒株；自引入雙價疫苗后10年，又出現(xiàn)MDV超糊強毒(w+MDV)毒株。其變化情況見圖1。對于病班進化的原因存在著諸多觀點，被公認的原因主要有以下幾個方面：1.2.1集約化養(yǎng)殖及飼養(yǎng)管理第二次世界大戰(zhàn)對蛋白質(zhì)需求的提高，加速了養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。養(yǎng)禽業(yè)由散養(yǎng)型變成了密集型飼養(yǎng)，表現(xiàn)為高飼養(yǎng)密度及商生長速度和產(chǎn)量的特征。在這種情況下,

8、MDV在易感宿主上持續(xù)作用，增強了毒力。另外，為了提高產(chǎn)量.加強了遺傳選育工作，但由于抵抗MD會降低產(chǎn)銷，因此沒有作為一個特征性進行選擇，使MDV毒力得到了進化。同時密集的養(yǎng)禽業(yè)農(nóng)場之間的引種，也促進了病每的墓延。.122疫苗免疫自20世紀70年代開始應用疫苗以來，MDV分離株毒力的增強與效力成規(guī)律增加的疫苗應用有看密切的關系。主要引起的原因是：過度免疫：現(xiàn)在任何一個MD都不能通過消毒來消除，可能是該病毒進化的主要契機。Gandon：。證實了部分壓制病毒的繁殖可能引起野毒病原體的進化。每一個雞體對于不同的病毒(野毒和疫苗毒)的傳遞和繁殖都是一個夏雜的生態(tài)系統(tǒng)，在免疫雞體中病毒很好地適應繁殖后，

9、將更容易進入環(huán)境感染另外的宿主'州,這一變化模式顯示免疫后的雞群更容易攜帶整合高毒力病毒，促進毒力進化。疫苗使用劑量及使用方法：細胞結合型MDV非常不穩(wěn)定，有試驗證明如果疫苗保護劑最不足會導致該病反復出現(xiàn)。在一個針對43個國家的調(diào)查結果中顯示，37%的獸醫(yī)在使用疫苗時使其溫度升高，50%獸醫(yī)將MD和其它疫苗混合注射""，這些免疫方法會降低疫苗的免疫效果。再者由于過多使用抗生素，同樣影響免疫效果，致使免疫失敗,增強病毒的耐受性。1.2.3其他原因造成毒力進化有專家認為毒力增強可能與免疫西群中MDV毒力基因的增強復制過程發(fā)生突變有關。但有研究顯示,MDV毒力變異不可能源

10、ti抗原漂移，而主要來自病毒與宿主的相互選擇中發(fā)生的突變，因而其致病株的血清型未發(fā)生變化。美國華盛頓大學的Kerr博士通過建立一種宿主(E.coli)與病原(T4噬菌體)互相作用的模型來研究病毒的生態(tài)學及其動力學。發(fā)現(xiàn)宿主菌的移動及相互間的接觸可對此產(chǎn)生深遠的影響。當毒力與其它特性如宿主間傳播或宿主內(nèi)競爭能力的變化相一致時，低水平的毒力可得到提高。病毒毒力進化是多方面作用的結果，很多實驗室都在做這方面的研究，但是一個限制因素是進化的病毒非常容易受多個因素影響，隨著研究技術的提高，其進化原因也將會得到更全面的揭示。2馬立克氏病疫苗研究使用進展2.1利用自然界毒株制備的疫苗2.1.1血清HI型疫苗

11、血清皿型疫苗主要是指火雞皰疹病毒(HVT)疫苗，其代表毒株Fc-126,是由美國學者Writter博士從火雞群中分離出來的1株無致瘤型毒株皿,對雞和火雞均不致病，在雞群內(nèi)不傳播。接種這種疫苗的雞體，細胞中的HVT能使機體產(chǎn)生抗體，具有干擾作用，它先于MDV侵入雞體細胞，能誘發(fā)阻止腫瘤形成的抗體，防止腫瘤的形成和發(fā)展，但不能中和MDV。目前HVT主要作為多價苗的一個組分用于生產(chǎn)。孩疫苗最主要的一個特征是可以通過超聲降解的方法從感染細胞上分離獲得非細胞結合性病毒，這個特征非常適合生產(chǎn)非細胞結合性HVT凍干苗。2.1.2火清口型疫苗血清n型病原毒株是從臨床正常的雞群中分離到的非致病性毒株，屬自然篩選

12、的弱毒疫苗。血清n型MDV都是天然非致病性的，廣泛分布于雞群中，這種疫苗毒可通過接觸傳播，感染后第5周產(chǎn)生很強的免疫力。這一血清型具有代表性的是SB-1株，是第一個被通過可以用于制備疫苗的毒株間。作為單苗使用保護力較低,與血清ID型制備成二價聯(lián)苗，顯示出比較好的保護率叫。1988年江蘇農(nóng)學院的黃仕霞等分離出的II型Z4弱毒株是國內(nèi)唯一的血清II型MD疫苗株，可與HVT疫苗合用，充分抵抗超強毒株。美國和其他一些國家有商品SB-1疫苗出售，目前應用的血清口型疫苗還有S224、301B/12。2.1.3血清I型疫苗第一個血清I型疫苗是1969年英國學者Churchill等用血清I型強毒株HPRS-1

13、6經(jīng)過33代在雞腎細胞外傳代致弱，研制成第一代MDV商品化疫岱，稱為HPRS-16att。HPRS-16att能夠提供一定保護力，但很不理想，因而目前雖然市場上還有一些應用，但大部分均已經(jīng)用血清ID型HVT.HVT與其聯(lián)合制成的二價苗以及CVI988所替代。CVI988最早是荷蘭人Rispens從一群無臨床癥狀的雞群中分離而得的血清I型中等毒力毒株，由于其天然致病、致瘤趨向，經(jīng)Witter在火雞胚成纖維細胞上傳2。35代致弱后，除在易感雞群連續(xù)繼代培養(yǎng)仍有輕微致痛性外,對其它雞群則基本成失致瘤性和接觸性傳染力。后利用其制備的疫苗可以有效控制預防wMDV和w+MDVoCV1988疫苗目前已成為控

14、制MD主要疫苗之一。利用插入突變的方法來致弱血清I型毒株是一個很好的方法。第一個利用插入致弱的毒株JM/102W表現(xiàn)出網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病病毒的特性，通過插入一個逆轉(zhuǎn)錄K末端重復(LTR)到MDV基因組中端重復區(qū)，最終結合成RM1病毒株網(wǎng)，該毒株在體外具有非常好的繁殖功能并且無致瘤性，但是用該毒株制造的疫苗最主要的缺陷是引起淋巴器官萎縮。MD活疫苗（814株）其疫苗種毒是從多年未發(fā)生過MD的雞場分離，屬于血清I型，自然弱毒株。實驗室試驗證明該疫苗預防效力比HVT疫苗高28.5%,實際預防效力能使雞的死亡率由HVT預防的7%下降到2%,而且814株疫苗株的預防效力受母源抗體的影響不明顯，對有同種母源抗

15、體而無HVT抗體雞的預防效力平均為89%,而HVT的預防效力只有60.5%,該疫苗免疫后8天產(chǎn)生堅強的免疫保護力渺:。馬力等®的試驗數(shù)據(jù)也表明814株活疫苗與國外進口CVI988相比較，有較好的免疫保護效果。814活疫苗是我國第一個通過疫苗制造及檢驗規(guī)程的血清I型活疫苗，是我國具有獨立自主知識產(chǎn)權的技術。2.1.4多價疫苗1980年美國首先發(fā)生HVT疫苗免疫失敗的情況，接著其他國家出現(xiàn)類似事件。病毒分離也表明MDV毒力在HVT疫苗使用10年中發(fā)生變異和遞進。新的危機促使各國研究者做出新的嘗試。Schat等發(fā)現(xiàn)3種血清型的三聯(lián)疫苗對雞的保護力則更高，達到90%。于是，在HVT疫苗基礎上

16、出現(xiàn)了綜合各種血清型保護作用的二聯(lián)疫苗如SB1+HVT、301B/l+HVT、CVI988+HVT、Z4+HVT以及三聯(lián)疫苗如CVI988+SB1+HVT和814+SB1+HVT等。也有一些爭論認為血清I型分別與血清口型和血清m型制作的聯(lián)苗不具備協(xié)同作用，但是另有報道顯示HVT與戊二醛滅活血清I型聯(lián)合的二價苗從羽囊觀測可有效地提高保護率】。HVT和重組痘病毒表達的gB蛋白和.另外的血清I型糖蛋白聯(lián)合也可提高保護作用問。2.2 基因重組苗的研制傳統(tǒng)MD疫苗的使用客觀上大大降低了MD的發(fā)生和危害，但并不能對不斷發(fā)展的強毒株和超強毒株起到有效遏制作用。另外多聯(lián)苗使用可導致B淋巴細胞機能障礙，使雞免疫

17、力下降，再則是除HVT苗以外的其它MD苗均有嚴格的活細胞結合性，使疫苗的液氮保存運輸非常不便等等。因此，隨著分子生物學技術的發(fā)展和進步，利用基因重組工程研制MD疫苗成為一個熱點,并取得一些重要進展5乂。2-2.1以其它病毒為載體構建的疫苗由于MDVgB基因表達的糖蛋白gB是最重要的保護性抗原，所以基因重組疫苗的研究重點大都集中在利用其它載體表達gB糖蛋白。目前,MDV3種血清型gg的重組禽痘病毒（FPV）都已構建成功皿。重組疫苗雖都在體外試驗中表現(xiàn)出一定的保護性，但保護力都沒有超過或相當于常規(guī)疫苗的效價。其他很多結構及非結構性抗原（夙、gD、UL47、UL48及pp38），也被構建到禽痘病毒中

18、。陳志琳等首次以FPV中國株為載體，構建表達MDVg/基因的重組病毒，為研制gl2FPV疫苗奠定了基礎，并得到表達，但不能產(chǎn)生理想的保護效果。在桿狀病毒表達系統(tǒng)中,及夙基因也已成功地在昆蟲細胞中得到表達。將表達的成和gC分別免疫或混合免疫雞后發(fā)現(xiàn),gB可輕度降低死亡率及減少MDV發(fā)病率，而則無保護性。由于"保護力有限且需多次免疫，同時還要使用佐劑，所以此亞單位疫苗作為真正的疫苗廣泛應用并未現(xiàn)實。以HVT為載體的MDV重組疫苗也進行了研究。此載體可插入多個外源基因，具有多重保護的潛力。Ross等使用HVT做載體，在7X基因區(qū)插入gB構建基因工程苗，雖然TK基因的破壞使HVT在細胞內(nèi)繁殖

19、能力降低,但這種低效價重組病毒比其野毒株的免疫效果好。Morgan等隊將雞新城疫病毒（NDV）的融合蛋白（F）基因和血凝素神經(jīng)賽酸昔酶（HN）基因分別插入HVT非必需基因s】0,構建重組體，它們能在細胞培養(yǎng)物上和雞體內(nèi)穩(wěn)定而充足的感染，抵抗NDV和MDV的雙重攻擊。Reddy等構建了表達MDV的gC和gB抗原的HVT重組疫苗,輸卵管免疫接種結果保護rSPF雞全身性ND和RBIBo此外，還建立了表達雞傳染性法氏囊病ig（IBDV）的VP2抗原HVT重組苗，在HVT的gl和UL13位點插入IBDV的VP2抗原產(chǎn)生重組疫苗，接種后防止，雞法氏囊的萎縮。HVT多聯(lián)重組苗的構建成功不僅可以抗MD,同時還

20、能對NDJBD等產(chǎn)生保護網(wǎng),具有廣泛的開發(fā)前景。2.2.2基因缺失疫苗人為地剔除MDV的致病性（致瘤性）基因從而構建基因工程缺失疫苗，在CEF上傳代后可使之失去致瘤性是基因缺失苗的主要研發(fā)思路。Cantello等用大腸埃希菌的LaZ基因取代MDVs2基因，通過藍白斑選擇篩選重:組的s2缺失毒株。Sakaguch等也報道了用同樣的方法構建了PK基因和基因缺失的毒株，這兩個毒株雖然能在單層細胞上繁殖，但失去了在體內(nèi)的轉(zhuǎn)化活性和致瘤潛力oPaceUc等將構建插入突變株，這些突變株在細胞I：生長速度低，感染的雞早期溶細胞感染、死亡率、腫瘤發(fā)生率和水平傳播均降低，但保留致痛性。雖然某些基因缺失可使病毒的

21、毒力降低，但并不能使MDV致瘤性完全喪失，而且基因缺失的同時使病毒在細胞內(nèi)復制的能力下降，甚至達不到目前常規(guī)疫苗的保護水平，所以這種疫苗作為商業(yè)化應用，還要做進一步研究。2.2.3核酸疫苗核酸疫苗也是將來MDV疫苗研制的一個重要方向。研究的原理是將編碼免疫原的基因插入真核表達質(zhì)粒中，質(zhì)粒在細常中復制，提取并純化質(zhì)粒后，再采用一定方法給動物接種。當質(zhì)粒在法主細胞中表達，表達產(chǎn)物可激發(fā)機體產(chǎn)生免疫應答。李建偉等將含MDV&B基因的pUC19質(zhì)粒直接注射1口齡的雞體中，80%的雞能抵抗強毒的攻擊oTischcr等皿將血清1型MDV克隆到BAC（細菌人工染色體）上免疫雞，發(fā)現(xiàn)DNA疫苗可以對雞

22、產(chǎn)生保護作用，但其免疫保護力并不比傳統(tǒng)的疫苗高。核酸疫苗存在整合到宿主基因組引起宿主原癌基因活化和腫瘤抑制基因失活的危險，也存在刺激產(chǎn)生抗DNA抗體和持續(xù)表達外源基因可產(chǎn)生的不良后果，同時肌肉注射產(chǎn)生免疫力需要大量抗原或使用基因槍，成本很高，因此對家禽疾病控制來說,核酸疫佑的應用還需要:進一步研究。3控制MDV毒力進化的措施疫苗使用在MD防控方面發(fā)揮了顯著的作用，但是不能忽視其在推進毒力進化過程中所扮演的角色，因此積極地采取應對措施閔，才能有效控制MDV毒力進化。3.1利用免疫佐劑和免疫增強劑對于胚胎或1日齡的錐雞只要接種MDV兒小時后就會感染，如果在疫苗使用中配備一些免疫增強劑，如細胞因子或

23、者佐劑，就可以增強體內(nèi)免疫應答,促進早期母體免疫系統(tǒng)的作用。乙酰化甘露聚糖是從蘆薈中提取的一種多糖.自1992年已經(jīng)通過認證可以作為馬立克氏病疫苗的佐劑使用，但是目前使用的還比較少。一些研究者也作了一些試驗證明細胞因子可以增加細胞免疫應答，比如Djeraba等"研究表明禽粒單核細胞生長因子可以增強馬立克疫苗保護效力.Tarpey使用皰疹病毒刺激白細胞介素-2的表達可以增加免疫應答，但是并不能提高強毒力的攻擊保護。免疫佐劑的深入研究，將會有更多的促進疫苗保護和效力的佐劑引入馬立克氏病疫苗免疫中來。3.2 二次免疫二次免疫在商業(yè)雞群中已經(jīng)使用了很多年，在歐盟和一些發(fā)展國家都成為一個常規(guī)方

24、法，但是在美國并沒有被采用。這可能是之前有一些試驗表明二次免疫并不能帶來更好的保護效果。Ball在雞21日齡時采用二次免疫并沒有達到預期的效果。但是最近Witter等設計了二次免疫試驗，并且觀測到一些結果。實驗數(shù)據(jù)顯示，在第一次使用低效力疫苗，二次免疫之后,可能產(chǎn)生雙倍的免疫效力，但是這些需要進一步證實。如果這種作用確實，二次免疫將是一個提高疫苗作用的有效途徑。3.3 交互使用疫苗MDV毒力增強與疫苗免疫不當有一定的關系，制定有效的免疫程序從而控制病毒毒力增強是正常有用的。在連續(xù)的不同批雞分別選用不同的疫苗，可能分散病毒變化的壓力，降低由于免疫選擇給病毒帶來的變異壓力，并且提高免疫效力。為了實

25、現(xiàn)這一策略，就需要有2個或2個以I.同等效力的疫苗株供選用。但到目前為止，還只有CVI988效力最好，如何選擇還需要更多的試驗證明。另外交互疫苗的使用方法不適用于蛋雞和種雞。3.4飼養(yǎng)管理早期感染在降低MD疫苗效力方面起重要作用c降低商品雞早期感染的最好做法就是給剛孵化的雛雞提供無殘留灰塵和羽毛碎屑的環(huán)境。對雞群需要實行“金進全出”措施來降低從其它雞傳播病毒的可能性。在美國，種雞群基本上能滿足以上要求，在蛋雞場也已執(zhí)行了嚴格的生物安全措施和徹底的清掃，但又趨向于不同年齡混養(yǎng)，這為MD傳播埋下了隱患。在商品代肉雛雞場,必須采取徹底措施來消除前批雞留下的傳染性物質(zhì)，如果為了專家論壇降低成本，放松管

26、理，有可能得不償失，引起更嚴重疾病流行。因此，加強管理，最大限度地延緩早期感染，可有效提高各種疫苗的效力。通過控制病毒感染擴散，緩解MDV毒力增強。3.5遺傳抵抗在使用疫苗以前，遺傳抵抗是控制MD的唯一方法。由于疫苗的引入，有關遺傳抵抗的研究逐漸減少。但是隨著基因組序列的完成，將打開控制禽病的另一大門。MDV與許多人的腫瘤病毒一樣，盡管可感染所有的個體，但僅導致其中遺傳易感的個體發(fā)生腫瘤。1933年起，與MD發(fā)生相關的宿主基因型及其應用得到關注和研究，1968年Cole首先將這種遺傳抗性大概分為MHC和非MHC兩大類。隨著生物技術的不斷提高，通過DNA測序鑒定特異的SNPs、mRNA和niiR

27、NA的轉(zhuǎn)錄組學以及蛋白組學的技術，鑒別遺傳控制MD抗性差異.為闡明MD易感與抗性的分子機制提供素材。美國、日本、加拿大等學者對不同的MD抗性和易感機體內(nèi)的特定抗原編碼基因進行比較，對淋巴樣腫瘤細胞中腫瘤抑制蛋白家族的某個成員進行檢測，得出了諸多有價值的研究成果。遺傳抵抗力只能緩慢提高，而且能夠達到的程度也是有限的。但遺傳抵抗力對輔助疫苗免疫是非常有價值的，選擇遺傳抵抗力的雞群就能夠更好地預防來自毒力逐漸增強的野毒株的攻擊。隨著更多研究的深入，遺傳抵抗將會使這種選擇過程變得更加方便、成本更加低廉。4結語作為養(yǎng)禽業(yè)一種重要疾病，MD持久的威脅始終是預防獸醫(yī)學的一個研究焦點。在長達50年的MD疫苗研

28、究應用中，取得了諸多成功，MD疫苗作為第一個應用于抗腫瘤方面的疫苗.，不僅有力地控制了疫病的發(fā)生，降低養(yǎng)禽業(yè)的損失，而日.推動了胚胎免疫技術的發(fā)展。但是在這個過程中，我們必須意識到簡單的依體疫佑控制疾病的發(fā)展只能是一個暫時的解決方法，未曾從根本上阻止病毒的感染和傳播.尤其疫苗的使用推動了病原毒力不斷增強，更增加了疫苗研制的難度。因此在研發(fā)疫苗的進展中，我們必須要重視病毒毒力的進化態(tài)勢，通過采取更多有效手段，阻止病毒毒力增強，正確把握疫苗的有限功效。參考文獻：1 ChurchillAE,PayneLN,ChubbRC.ImmunizationagainstMarek'sdiveaseus

29、ingaliveattenuatedvirusjj.Nature,1969,221:744-747.2 WitterRL,SharmaJM.OflenbeckerL.Turkeyherpesvirusinfectioninchickens:inductionoflymphoproliferativelesionsandcharacterizationofvaccinalimmunityagainstMarek'sdiseasejj.AvianDis,1976,20:676-692.3 EidsonCS.Page1<K,KlevenSH.EffectivenessofceUfree

30、orcell-associatedturkeyherpesvirusvaccineagainstMarek'sdiseaseinchickensasinfluencedbymaternalantibody,vaccinedose,andtimeofexposuretoMarek'sdiseasevirusJ.AvianDis,1978,22；583-597.4 WitterRL,SharmaJM,Fa<UyAM.PathogenicityofvariantMarek*sdiseasevjmsisolantsinvaccinatedandunvaccinatedchickensUJAvianDis.1980.4：210-232.5 SevoianM.ChamberlainDM.CounterFT.ExperimentalreproductionoftheneuralandvisceralfbmwJ.VetMed,1