1、培養基質量控制作業指導書文件編號：WLCDC/ZD7651、目的：為加強我屮心檢驗科實驗室的工作管理，保證實 驗室的檢測質量，特制定此作業指導書；2、范圍：適用于實驗室微生物培養基使用前的質量驗收、 使用過程屮的質量控制。3、職責：3、1檢驗人員：按照本規程規對培養基使用前及使用過程屮 進行質量控制，確保培養基符合相關標準的要求。3、2科室負責人：負責指導、監督檢驗人員對培養基進行質 量控制。4、生產企業提供的材料培養基生產廠家隨產品應提供下列 文件：培養基、獨立成分、添加成分名稱；批號；使用前的pH； 儲藏信息和有效期；性能評價和所用測試菌株；技術數據清單； 質控證書/必要的安全、危害數據。

2、5、驗收實驗室收到培養基后，應填寫“培養基驗收檢查記 錄單”，檢查包裝及完整性，標識是否清晰等，驗收合格后按照“培養基編碼系統使用規程”對培養基進行編號。6、貯存及使用前質量確認6、1商品化培養基應嚴格按供應商提供的貯存條件、有效期 進行貯存。6、2驗收合格的培養基應建立“商品化干粉培養基目錄清 單”，使用前對容器密閉性進行復查。6、3開封的脫水培養基，每次使用前應對其質量進行檢查， 通過粉末的流動性、均勻性、結塊情況和色澤變化等判斷培養基 的質量變化。若發現培養基受潮或物理性狀發生明顯改變則不應 再使用。6、4制備好的成品培養基應建立“成品培養基目錄清單”， 每次使用前應檢查：顏色是否發生變

3、化?/是否蒸發/脫水?/是否有 微生物生長？等。如果發生上述異常情況，則不應再使用。7、制備好的成品培養基的質量控制新購的不同批次的商品 化培養基在使用前應進行培養基性能測試，符合要求后使用。成品培養培養基的質量控制應包括物理指標和微生物指標的 測試，根據測試結果及時填寫“實驗室制備培養基測試結果記錄 單”。7、1物理指標控制1）測試20C25C的PH值2）瓊脂層 厚度；色澤；透明度和（或）是否存在肉眼可見雜質；凝膠穩定 性、粘稠度和濕度。7、2微生物學指標控制可根據要求選用定量方法、半定量方 法或定性方法（詳見表1-表）對培養基性能進行測試，具體操作 方法詳見作業指導書“培養基性能測試指南”

4、。7、3微生物污染的控制從每批制備好的培養基屮選取至少一 個（或1%）平板或試管，置于37C或按特定標準屮規定的溫度培 養 18ho8、生長特性8、1生長率將適量測試菌株的工作培養物接種至固體、半固 體和液體培養基屮，每種培養基上菌株的生長率應達規定的最低 限值。1）定量方法生長率PR的計算：PR二NS/NO NS：從一個或 多個待測培養基平板上得到的菌落總數。N 0：從一個或多個規定 的參考培養基平板上獲得的菌落總數（該菌落總數應IOOcfu ） o要求：非選擇性培養基上目標菌的生長率最低應為0、7,該 類培養基應易于目標菌生長；選擇性培養基上目標菌的生長率最 低應為0、1；每平板（或每試管

5、）的接種水平為IoCFU IOOCFUO2）半定量方法半定量方法采用生態測量技術在平板上劃 線，平板板連續劃線區域得分的總和即為生長指數G, G值不應超 過標準規定的允許范圍。3）定性方法定性方法采用劃線法觀察。選擇性 將濃度為104CFUmL106CFUmL的非目標菌工作 菌株懸浮液接種至選擇培養基和參考培養基中，培養基的選擇性 應達到規定值。定量方法選擇因子SF： SF二DO Parker S生長率 370C24-48h 金黃色葡萄球菌 ATCC653825923 TSA 定量 PR20、5 黑色/灰色菌落，周圍為一混濁帶，其外有透明帶 選擇性370C48h 大腸桿菌ATCC25922/8

6、739定性全部抑制特異性 370C24-48h表皮葡萄球菌ATCCI2228 定性 黑色/灰色 菌落，周圍為一混濁帶，其外無透明帶MYP S生長率300C24- 48h臘樣芽胞桿菌ATCClI778 TSA定量PR20、7具沉淀帶的粉 色菌落選擇性37C48h大腸桿菌ATCC25922 定性全部抑 制特異性37C48h枯草芽胞桿菌ATCC6633 定性一 不具沉淀帶的粉色菌落培養基用途培養條件測試菌株參 考培養基控制方法判定標準特征反應VRBG （結晶紫中性紅膽 鹽葡萄糖瓊脂）S生長率37C24h大腸桿菌ATCC25922/8739 TSA定量PR20、5帶有或不帶沉淀帶的粉紅色或紅色菌落鼠傷

7、 寒沙門菌ATCCl4028選擇性37C20h糞鏈球菌ATCC29212/19433 一定性全部抑制一一 VRBL （紫紅膽汁乳糖）S生長率 30oC20h大腸桿菌ATCC259228739 TSA定量PR20、5帶有或不 帶沉淀帶的淡紫色菌落選擇性30oC20h糞鏈球菌 ATCC29212/19433 定性全部抑制特異性30C20h銅 綠假單胞菌ATCC27853 定性無色至淺棕色菌落CT-SMAC （改良山梨醇麥康凱瓊脂）S生長率370C24h大腸桿菌0157： H7 ATCC4389443895 TSA 定量 PR20、5 透明菌落，表面 淡黃棕色，菌落直徑約Imm選擇性370C24h金

8、黃色葡萄球菌ATCC6538/25923定性全部抑制特異性37C24h大腸桿菌 ATCCll775/25922 定性粉色菌落BGBLB （煌綠乳糖膽 鹽肉湯）L生長率 30oC24-48h 大腸桿菌 ATCC259228739 TSA 半定量濁度2+,導管1/3產氣產氣并渾濁弗氏檸檬酸桿菌 ATCC25922/8739選擇性糞鏈球菌ATCC29212/19433定性不生長 EC L生長率440C2448h大腸桿菌ATCC25922 半 定量 濁度2+,導氣管1/3產氣 產氣并渾濁 選擇性440C2448h 銅綠假單胞菌ATCC27853b 定性不生長 ECMUG LS- MUG L生長率440

9、C2448h大腸桿菌ATCC25922 半定量 濁度2+,導氣管1/3產氣產氣并渾濁，產生熒光選擇性 440C2448h銅綠假單胞菌ATCC27853b 定性不生長 乳糖膽鹽發酵培養L生長率37C24h大腸桿菌ATCC25922 半定量導氣管1/3產氣產氣并變黃色選擇性370C24h鼠傷 寒沙門菌ATCCi4028 定性不產氣、仍為紫色LST （月 桂酸肉湯）L生長率370C24h大腸桿菌ATCC25922 半定 量導氣管1/3產氣一一選擇性370C24h福氏志賀氏菌 CMCC51572 定性表2計數用非選擇性培養基培養基用途培養條件測試菌株參考培養基控制方法判定標準 特征反應PCA （平板計

10、數瓊脂）S生長率30oC72h大腸桿菌 ATCC259228739 TSA定量PR20、7 金黃色葡萄球菌 ATCC6538枯草芽抱桿菌ATCC6633表3選擇性增菌培養基培養 基用途培養條件測試菌株控制方法判定標準特征反應EEL生長率370C24h大腸桿菌ATCC25922/8739半定量VRBG IOCFU粉紅至紅色菌落，有或沒有沉淀帶鼠傷寒沙門菌 ATCCl4028選擇性糞腸球菌ATCC29212全部抑制RVS L生長 率41、5C24h鼠傷寒沙門菌ATCCI4028半定量XLD或其他選擇 性培養基上10CFU 腸炎沙門氏菌ATCCI3076銅綠假單胞菌 ATCC27853 選擇性 41

11、、5C24h大腸桿菌ATCC25922半定量TSA 全抑制 糞鏈球菌ATCC29212 TSA 10CFU不同培養基上菌落特征不同（見標 準）+大腸桿菌ATCC25922 +銅綠假單胞菌ATCC27853b選擇性 370C24h大腸桿菌ATCC25922半定量TSA 10CFU不同培養基上菌落特征不同（見標 準）傷寒沙門菌CMCC50071選擇性37C24h大腸桿菌ATCC25922 TSA 10CFU不同 培養基上菌落特征不同（見標準）副溶血性弧菌CMCC20001選擇 性 370C24h 大腸桿菌 ATCC259228739 TSA IOCFU 福氏 志賀氏菌CMCC515727、5%氯化

12、鈉肉湯L生長率370C24h金黃色葡萄球菌 ATCC6538半定量B-P平板或其他培養基上10CFU不同培養基上 菌落特征不同（見標準）表4非選擇性增菌培養基培養基用途 培養條件測試菌株控制方法判定標準特征反應BHI生長率 370C24h金黃色葡萄球菌ATCC6538定性濁度12 蛋白月東 鹽L稀釋20250C45min大腸桿菌ATCC25922定量+/-50%菌 落數/至（+/-50%原始菌落數一一金黃色葡萄球菌ATCC25923表 4非選擇性增菌培養基（續）培養基用途培養條件測試菌株 控制方法判定標準特征反應乳糖蛋白月東肉湯L生長率 370C24h大腸桿菌ATCC25922 定性導氣管1/

13、3產氣選擇性 370C24h鼠傷寒沙門菌ATCCI4028 定性 SCDLP液體培 養基L生長率370C24h銅綠假單胞菌ATCC27853定性濁度 12大腸桿菌ATCC25922金黃色葡萄球菌ATCC6538液體沙氏培養基L生長率26C5天白色念珠菌CMCC98001定性 濁 度12 真菌培養基L生長率260C5天白色念珠菌 CMCC98001定性濁度12 表5選擇性分離培養基培養基 用途培養條件測試菌株控制方法判定標準特征反應亞硫酸 酸鉗瓊脂（BS） S生長率370C48h鼠傷寒沙門菌ATCCI4028 定性良好生長（2）菌落呈黑色，有金屬光澤 福氏志賀氏菌CMCC51572菌落呈棕 色選

14、擇性大腸桿菌ATCC25922/8739全部或部分抑制（01） 無典型菌落 糞鏈球菌ATCC29212/19433全部抑制（O） XLD S 生長率37C24h鼠傷寒沙門菌ATCCI4028定性 良好生長（2）菌落呈黑色福氏志賀氏菌CMCC51573菌落呈無色選擇性大 腸桿菌ATCC25922/8739全部或部分抑制（01）無典型菌落糞 鏈球菌ATCC29212/19433全部抑制（0）血瓊脂平板S生長率 370C2448h金黃色葡萄球菌ATCC6538/25923定性良好生長（3 溶血,透明溶血環 糞鏈球菌ATCC29212定性 良好生長溶血， 草綠色溶血環TCBS S生長率370C2448

15、h霍亂弧菌 CMCCI6109定性良好生長菌落較大，呈黃色副溶血性弧菌 CMCC20001定性良好生長菌落較大，呈綠色4號瓊脂S生長 率370C2448h霍亂弧菌CMCCI6109定性 良好生長 菌落較大、 扁平透明、濕潤、中心帶有黑色 非01群霍亂弧菌CMCCI7045定 性良好生長菌落較大、扁平透明、濕潤、中心帶有黑色選擇性 370C24h大腸桿菌ATCC25922/8739定性全部或部分抑制（0 1）一一表5選擇性分離培養基（續）培養基用途培養條件 測試菌株控制方法判定標準特征反應伊紅美蘭瓊脂S生長 率37C24h大腸桿菌ATCC25922/8739定性良好生長菌落紫黑 色帶金屬光澤鼠傷

16、寒沙門菌ATCCI4028定性良好生長菌落灰白 色半透明福氏志賀氏菌CMCC51573定性 良好生長 菌落灰白色半 透明TSI （三糖鐵瓊脂）S生長率370C24-48h大腸桿菌ATCC25922/8739定性 良 好生長斜面及底層均變黃，產氣，硫化氫陽性 普通變形桿菌CMCC49001定性良好生長斜面及底層均變黃，產氣，硫化氫陽 性福氏志賀氏菌CMCC51573定性良好生長底層變黃，斜面變 紅，不產氣，硫化氫陰性 鼠傷寒沙門菌ATCCl4028定性 良好生 長底層變黃，斜面變紅，產氣，硫化氫陽性表6非選擇性分離 培養基培養基用途培養條件測試菌株控制方法判定標準特 征反應 營養瓊脂S生長率370C24h大腸桿菌ATCC25922定性 良好生長(2)鼠傷寒沙門菌ATCCI4028c小腸耶爾森氏菌ATCC237159、記錄