1、湖南省疾病預防控制中心湖南省疾病預防控制中心地址：長沙市芙蓉中路一段450號1201室（410005）電話南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科江江 洋洋遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科HIV抗體檢測的意義 HIV感染的診斷、疾病進展的監(jiān)測、抗病毒療效觀察和耐藥性監(jiān)測中至關重要。 HIV檢測不同于其它病原微生物檢測，要求十分嚴格，任何錯誤的診斷，包括假陽性或假陰性，都會對被檢者產生十分重要的影響。 遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控

2、制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科試劑試劑包被抗原或抗包被抗原或抗體類型及來源體類型及來源窗口期窗口期方法方法檢測抗體檢測抗體描述描述第一代HIV-1型抗原 (病毒裂解產物)30-60天間接法lgG假陽性較多，血清要高度稀釋，靈敏度低，僅能檢測HIV-1第二代HIV（1+2型）抗原（基因重組或合成多肽）28-35天間接法lgG靈敏度和特異性優(yōu)于第一代，但只能檢測HIV-lgG第三代HIV（1+2型）抗原（基因重組）14-25天雙抗夾心法LgG+lgM可檢測HIV不同的抗體亞類（lgG、lgM、 lgA等）靈敏度、特異性均較高第四代HIV（1+2型）抗原（基因重組+抗-

3、p24抗體）10-18天雙抗原夾心法和雙抗體夾心法LgG+lgM+Ag檢測HIV（1+2型）抗體和p24抗原，明顯縮短窗口期，進一步降低輸血的殘余危險度遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科試劑評估遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋

4、病防治科遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科 第四代HIV診斷試劑是一種HIV-1/HIV-2抗體與HIV-1 O亞群抗體及p24抗原的聯(lián)合檢測方法，增加了p24抗原檢測，在對第四代試劑的研究中發(fā)現(xiàn)p24抗原滴度降低時，血清陽轉過程中S/CO值卻并未降低，也沒有發(fā)現(xiàn)第四代試劑檢測陰性而第三代試劑檢測為陽性的樣本。 第四代試劑由于可同時檢測抗原和抗體，因而獻血員篩查時，建議用第四代試劑進行檢測，以盡量提高輸血的安全性。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋

5、病防治科酶聯(lián)試驗酶聯(lián)試驗一一 實驗前期準備工作實驗前期準備工作實驗操作實驗操作實驗記錄實驗記錄檢測報告檢測報告遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科實驗前期準備工作實驗前期準備工作 目的：是為臨床提供準確可靠的實驗診斷依據(jù)。 我們?yōu)榱吮ＷC實驗數(shù)據(jù)的可靠性，在檢驗醫(yī)學中必須堅持全面質量控制（ TQC total quality control ）. 對影響臨床檢驗結果可靠性的各方面因素及各個環(huán)節(jié)進行質量控制, 全過程質量控制包括實驗前、實驗中、和實驗后三個階段的質量控制。在實驗誤差中實驗前誤差占70%，因而實驗前質量保證對

6、減少實驗誤差顯得尤其重要。 遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科試劑準備試劑準備 ELISA測定中試劑的準備最為關鍵的是，測定中試劑的準備最為關鍵的是，在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來在室溫下放置來在室溫下放置30分鐘以上后，再進行測分鐘以上后，再進行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應步驟中，能使反應微孔內的溫度能較快應步驟中，能使反應微孔內的溫度能較快地達到所要求

7、的高度，以滿足測定要求。地達到所要求的高度，以滿足測定要求。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科 在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用，而在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題，其直接的后果是對一些弱陽不夠的問題，其直接的后果是對一些弱陽性標本的檢測出現(xiàn)假陰性。性標本的檢測出現(xiàn)假陰性。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科樣品登記 實驗室可根據(jù)自己的情況來選擇樣品登記，樣

8、品登記主要使用樣品登記本；有條件的實驗室使用樣品登記軟件，不僅可以做樣品的記錄還可以用來發(fā)放檢測報告。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科HIV抗體檢測實驗抗體檢測實驗 對于我們常用的對于我們常用的ELISA實驗大致可以分為以下幾實驗大致可以分為以下幾個步驟：個步驟：1、加樣、加樣2、溫育、溫育3、加酶標抗體、加酶標抗體4、加底物液顯色、加底物液顯色 5、終止反應、終止反應6、結果判定、結果判定 遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科加血清樣品的

9、注意事項加血清樣品的注意事項加樣品的速度：加樣品的速度：加樣太快，無法保證微量加樣的準確加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性，要慢吸輕放性和均一性，要慢吸輕放加樣品的位置：加樣品的位置：加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導致非加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導致非特異吸附特異吸附不允許濺出和產生不允許濺出和產生氣泡：氣泡：濺出會對鄰近孔產生污染，出現(xiàn)氣泡濺出會對鄰近孔產生污染，出現(xiàn)氣泡則反應液界面會有差異，影響酶標儀則反應液界面會有差異，影響酶標儀讀數(shù)結果讀數(shù)結果加樣移液器不能混加樣移液器不能混合使用：合使用：不可用加血液樣品的移液器和加試劑不可用加血液樣品的移液器和加試劑用的移液器混用：用的移液器混

10、用：加入的樣品量要精加入的樣品量要精準：準：選擇合格廠家生產的移液器，查看產選擇合格廠家生產的移液器，查看產品校準證書記錄，認可的實驗室每半品校準證書記錄，認可的實驗室每半年都要做自校準記錄年都要做自校準記錄遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科移液器的使用移液器的使用 垂直加樣垂直加樣 吸頭尖端需浸入液面吸頭尖端需浸入液面3mm以下以下 慢吸慢放，控制好彈簧的伸縮速度慢吸慢放，控制好彈簧的伸縮速度 放液時吸頭尖端靠在容器內壁放液時吸頭尖端靠在容器內壁2/3遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾

11、滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科移液器的使用移液器的使用 反向吸液：反向吸液： 適用于粘稠液體和易揮發(fā)的液體適用于粘稠液體和易揮發(fā)的液體 多吸入的液體可以補償吸頭內部的表面吸多吸入的液體可以補償吸頭內部的表面吸附，因此定量實驗都采用此方法附，因此定量實驗都采用此方法遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科移液器的維護和保養(yǎng)移液器的維護和保養(yǎng) 每次實驗完畢后可用每次實驗完畢后可用75%的酒精棉球來擦的酒精棉球來擦拭，然后用雙蒸水將移液器下半部分拆卸拭，然后用雙蒸水將移液器下半部分拆卸清洗、最后置于紫外線照射下

12、進行表面消清洗、最后置于紫外線照射下進行表面消毒、晾干以備下次使用。毒、晾干以備下次使用。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科洗滌洗滌 洗滌的方式分為機洗和手洗，現(xiàn)在實驗室洗滌的方式分為機洗和手洗，現(xiàn)在實驗室由于都配備了洗板機已基本取代了手工操由于都配備了洗板機已基本取代了手工操作，作， 機洗采用浸泡式機洗采用浸泡式 常用于自動洗滌儀器常用于自動洗滌儀器實驗中，浸泡時間約為實驗中，浸泡時間約為30-60秒秒 ，洗板條件，洗板條件按試劑盒說明設定。按試劑盒說明設定。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中

13、心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科洗滌洗滌 其次，目前的商品其次，目前的商品ELISA試劑盒中的洗板試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時所用的蒸餾水或去稀釋配制，因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質量，且不可使用污染過的離子水應保證質量，且不可使用污染過的水源或自來水。水源或自來水。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科 洗滌在洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟，但卻過程中雖不是一個反應步驟，但卻也決定著實驗的成敗。也決

14、定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到就是靠洗滌來達到分離游離和結合酶標記物的目的。通過洗滌以清分離游離和結合酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載質，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。可以說在體的干擾物質。可以說在ELISA操作中，洗滌是操作中，洗滌是最主要的關鍵技術，應引起操作者的高度重視，最主要的關鍵技術，應引起操作者的高度重視，操作者應嚴格按照試劑盒廠家要求來洗滌操作者應嚴格按照試劑盒廠家要求來洗滌遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控

15、制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科溫育溫育 溫育是溫育是ELISA測定中影響測定成敗最為關測定中影響測定成敗最為關鍵的一個因素。鍵的一個因素。ELISA作為一種固相的免作為一種固相的免疫測定，抗原抗體的結合反應在固相上進疫測定，抗原抗體的結合反應在固相上進行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結合，必須在一定的特異抗體或抗原完全結合，必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。溫育所需時溫度條件下反應一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。間相對較短。遏制艾

16、滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科溫育溫育 通常目前國內通常目前國內ELISA商品試劑盒的反應溫商品試劑盒的反應溫育時間為育時間為37 30分鐘分鐘1小時，進口小時，進口ELISA試劑盒則通常為試劑盒則通常為37 12小時才能有較完小時才能有較完全的結合，低于試劑盒所要求的時間，就全的結合，低于試劑盒所要求的時間，就可能會影響測定的下限。因此，關于溫育，可能會影響測定的下限。因此，關于溫育，要保證在設定的溫度下有足夠的反應時間要保證在設定的溫度下有足夠的反應時間 。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心

17、性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科顯色顯色 ELISA試劑的顯色液在使用前制備，制備好的顯試劑的顯色液在使用前制備，制備好的顯色液要在色液要在30分鐘內使用，并且要避光保存，如果分鐘內使用，并且要避光保存，如果有沒用完的顯色液切不可重復使用有沒用完的顯色液切不可重復使用 遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科比色比色 加入顯色劑以后應先用潔凈的吸水紙拭干板底附加入顯色劑以后應先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體，然后將板正確放入酶標比色儀的比色著的液體，然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中，架中，比色結

18、果以光密度（比色結果以光密度（oplical densityoplical density，ODOD）表達，表達， 臨界值（臨界值（cut off cut off ） 根據(jù)試劑盒說明書根據(jù)試劑盒說明書設定計算公式。設定計算公式。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科酶標比色儀酶標比色儀 酶標比色儀簡稱酶標儀，通常指專用于測讀酶標比色儀簡稱酶標儀，通常指專用于測讀ELISA結果吸光度的光度計，許多試劑公司配套結果吸光度的光度計，許多試劑公司配套供應酶標儀。供應酶標儀。 酶標儀的主要特點有：測讀速度、讀數(shù)的準確性、酶標儀的主

19、要特點有：測讀速度、讀數(shù)的準確性、重復性、精確度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的重復性、精確度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標儀的讀數(shù)一般可精確到酶標儀的讀數(shù)一般可精確到0.001，準確性為，準確性為1%遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科 酶標儀不應安置在陽光或強光照射下，操作時室酶標儀不應安置在陽光或強光照射下，操作時室溫宜在溫宜在1530，使用前先預熱儀器，使用前先預熱儀器15-30分鐘，分鐘，測讀結果更穩(wěn)定，可根據(jù)試劑盒說明書的要求進測讀結果更穩(wěn)定，可根據(jù)試劑盒說明書的要求進行選擇合適的波長進行測定行選擇合適的波長

20、進行測定遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科 單波長測定就是選擇一個測定波長單波長測定就是選擇一個測定波長,直接測定樣本直接測定樣本的吸光度的吸光度 雙波長測量是采用兩個不同的波長雙波長測量是采用兩個不同的波長,即測定波長即測定波長(又叫主波長又叫主波長)和參比波長和參比波長(又叫次波長又叫次波長)同時測定樣同時測定樣品的吸光度品的吸光度,以消除一些外在影響因素以消除一些外在影響因素,提高測定結提高測定結果的精密度和準確度果的精密度和準確度遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省

21、疾病預防控制中心性病艾滋病防治科實驗有效性實驗有效性 比色時應嚴格按照試劑盒說明書進行操作，比色時應嚴格按照試劑盒說明書進行操作，每次比色都要設置實驗有效性才可進行測每次比色都要設置實驗有效性才可進行測定，對不符合有效性的實驗進行重復檢測！定，對不符合有效性的實驗進行重復檢測！（實驗有效性設置見廠家試劑盒說明書實驗有效性設置見廠家試劑盒說明書）遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科結果判讀結果判讀 陽性判定值（陽性判定值（cut-off ）一般為陰性對照均值加上）一般為陰性對照均值加上一個特定的常數(shù)，以此作為判斷結果陽性

22、或陰性一個特定的常數(shù)，以此作為判斷結果陽性或陰性的標準。的標準。 用此法判斷結果要求實驗條件十分恒定，試劑的用此法判斷結果要求實驗條件十分恒定，試劑的制備必須標準化，陽性和陰性的對照品應符合一制備必須標準化，陽性和陰性的對照品應符合一定的規(guī)格，須配用精密的儀器，并嚴格按規(guī)定操定的規(guī)格，須配用精密的儀器，并嚴格按規(guī)定操作。作。 陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標本的實驗檢測而得到的。過對大量標本的實驗檢測而得到的。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科血清標本的保

23、存血清標本的保存 血清標本如果是以無菌操作分離（使用滅菌后的槍頭和凍存管），則可以在28下保存一周，如果為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時間保存，應在-40以下。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科標本的采集工作標本的采集工作 使用一次性真空采血管（一管一針），按照采血管規(guī)格采使用一次性真空采血管（一管一針），按照采血管規(guī)格采集，通常采血量以采血管規(guī)格集，通常采血量以采血管規(guī)格6080%為宜，但要保證為宜，但要保證擁有足夠的標本量用于擁有足夠的標本量用于ELISA實驗檢測。實驗檢測。 真空采血管大致分為：真空采血管

24、大致分為： 1肝素納肝素納 2肝素理肝素理 3促凝管促凝管 4血沉管血沉管 5 PT管管 6血常規(guī)管血常規(guī)管 7分離膠促凝劑分離膠促凝劑 8EDTA-K2，K3，Na2 遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科血清凍存管血清凍存管 往上級確證單位送檢時請轉管 選擇適合的離心凍存管和凍存盒保存血清標本，血清凍存管規(guī)格要求： 1、2ML 2、帶螺口 3、帶內密封圈遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科血清標本的分離血清標本的分離 標本離心前一般會自行凝集

25、，通常放置于室溫（2225）3060 min 可自發(fā)完全凝集； 使用離心機時應注意平衡和避免液體飛濺，必須等離心機停止工作后才可打開蓋板以免發(fā)生意外。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科溶血溶血 紅細胞破裂，血紅蛋白逸出導致紅細胞溶解，簡紅細胞破裂，血紅蛋白逸出導致紅細胞溶解，簡稱稱溶血溶血。 可由多種理化因素和毒素引起。可由多種理化因素和毒素引起。 在體外，如低滲溶液、機械性強力的振蕩、突然在體外，如低滲溶液、機械性強力的振蕩、突然低溫都可引發(fā)。低溫都可引發(fā)。 血紅蛋白中含有血紅素基團，有類似過氧化物的血紅蛋白中含有

26、血紅素基團，有類似過氧化物的活性，因此在以標記酶的活性，因此在以標記酶的ELISAELISA測定中，如果血清測定中，如果血清標本中血紅蛋白濃度較高，從而與后面加入的底標本中血紅蛋白濃度較高，從而與后面加入的底物反應顯色，容易造成物反應顯色，容易造成假陽性假陽性反應。反應。 建議樣品采集建議樣品采集2 2小時左右分離出血清小時左右分離出血清遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科血清標本的保存需要注意的問題血清標本的保存需要注意的問題 標本要有詳細的標識以備查詢（包括樣品受理號、標本要有詳細的標識以備查詢（包括樣品受理號、患

27、者姓名）患者姓名） 冰箱和超低溫冰箱的溫度記錄表冰箱和超低溫冰箱的溫度記錄表 使用冷凍標簽紙?zhí)顚憳悠窐俗R使用冷凍標簽紙?zhí)顚憳悠窐俗R遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科血清標本保存血清標本保存 一、樣本的采集及血清分離中要注意盡量一、樣本的采集及血清分離中要注意盡量 避免細菌污染，長時間存放的標本會導致避免細菌污染，長時間存放的標本會導致一些細菌的生長，其所分泌的一些酶可能一些細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產生分解作用；例如會對抗原抗體等蛋白產生分解作用；例如一些細菌的內源性酶，會對測定方法產生一些細

28、菌的內源性酶，會對測定方法產生非特異性干擾。所以在不再進行重復實驗非特異性干擾。所以在不再進行重復實驗時應把標本放置于冷凍保存。時應把標本放置于冷凍保存。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科 二、冰凍保存的血清標本須注意避免因停二、冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用，從而引起假陰性結果。子產生破壞作用，從而引起假陰性結果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進此外，凍

29、融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可。行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科 三、標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的三、標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢混濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢測。測。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科ELISA試驗受諸多因素影響試驗受諸多因素影響 其中試劑盒的質量以及操作者的水平將直其中試劑盒的質量以及操作者的水平將直接影響到這一過

30、程的成功與否。因此在完接影響到這一過程的成功與否。因此在完全按照試劑盒要求的前提下，均一，穩(wěn)定全按照試劑盒要求的前提下，均一，穩(wěn)定的操作過程和試驗條件是獲得最佳試驗結的操作過程和試驗條件是獲得最佳試驗結果的必要條件。果的必要條件。 遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科外部質控外部質控 HIV抗體檢測實驗每次實驗都要設置一孔外抗體檢測實驗每次實驗都要設置一孔外部對照。制備方法部對照。制備方法: 按一年使用量配置，取按一年使用量配置，取HIV抗體陰性血清和陽性血清，抗體陰性血清和陽性血清，56 30分分鐘滅活，鐘滅活，30

31、00轉轉/分離心分離心15分鐘，經梯度稀分鐘，經梯度稀釋后用釋后用0.2um濾膜過濾除菌。濾膜過濾除菌。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科質控質控 外部對照質控血清是為了監(jiān)控檢測的重復外部對照質控血清是為了監(jiān)控檢測的重復性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而由實驗室設置的一套對照血清，包括強陽由實驗室設置的一套對照血清，包括強陽性、弱陽性和陰性對照血清。也可以只設性、弱陽性和陰性對照血清。也可以只設置一個弱陽性對照，以該試劑盒臨界值置一個弱陽性對照，以該試劑盒臨界值（Cut off）

32、的）的23倍為宜。倍為宜。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科質控質控 可以根據(jù)實驗室自身情況采用商用質控品或自制可以根據(jù)實驗室自身情況采用商用質控品或自制質控品，以下情況必須要做質量控制：質控品，以下情況必須要做質量控制： 更換試劑批號；更換試劑批號； 更換檢測人員；更換檢測人員； 更換包裝；更換包裝； 更換廠家；更換廠家；遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科ELISA實驗的自身防護實驗的自身防護 HIV-ELISA實驗盡量使用一次性塑膠實驗

33、器材，實驗盡量使用一次性塑膠實驗器材，由于玻璃器皿容易造成劃傷，建議不要使用。由于玻璃器皿容易造成劃傷，建議不要使用。 加樣及分離標本時應在生物安全柜內操作，如沒加樣及分離標本時應在生物安全柜內操作，如沒有配備生物安全柜的實驗室，實驗人員操作時可有配備生物安全柜的實驗室，實驗人員操作時可以帶口罩和防護眼鏡進行個人防護。以帶口罩和防護眼鏡進行個人防護。 實驗做完應及時將標本和實驗耗材做高壓消毒處實驗做完應及時將標本和實驗耗材做高壓消毒處理。理。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科收樣登記表收樣登記表 規(guī)范的樣品登記應記錄

34、詳細，包括樣品的個人信息，病史，以往檢測結果的記錄等。 HIV血清抗體檢測的樣品登記主要包括： 送檢單位、患者姓名、性別、年齡、職業(yè)、人群類別、身份證號、家庭地址、收樣日期、收樣人姓名以及標本狀態(tài)和檢測的結果 樣品登記本(表)遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科信息采集的重要性信息采集的重要性 每一份做每一份做HIV檢測的標本，檢測的結果涉及到病檢測的標本，檢測的結果涉及到病人的后續(xù)治療，包括流行病學追蹤、免

35、疫功能檢人的后續(xù)治療，包括流行病學追蹤、免疫功能檢測和抗病毒治療，做好樣品登記工作可以避免患測和抗病毒治療，做好樣品登記工作可以避免患者延誤治療。者延誤治療。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科規(guī)范的實驗記錄規(guī)范的實驗記錄 每次做完實驗一定要做好實驗的記錄，對每次做完實驗一定要做好實驗的記錄，對來樣的登記要詳細規(guī)范來樣的登記要詳細規(guī)范,實驗記錄盡量使用實驗記錄盡量使用A4紙保存紙保存,有條件的實驗室也可保存電子檔有條件的實驗室也可保存電子檔案以便于查詢案以便于查詢,對于篩查實驗室所使用的記對于篩查實驗室所使用的記錄表格包括樣品登記，試驗原始記錄，樣錄表格包括樣品登記，試驗原始記錄，樣品送檢單，以及篩查報告等都要妥善保存。品送檢單，以及篩查報告等都要妥善保存。儀器試用記錄和消毒滅菌記錄要填寫完整。儀器試用記錄和消毒滅菌記錄要填寫完整。 遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預防控制中心性病艾滋病