1、探討大豆苷元對神經母細胞瘤細胞增殖的抑制作用    摘要：目的探討大豆苷元對神經母細胞瘤 細胞凋亡和增殖的影響。方法采用細胞生長抑制實驗（法）、流式細胞儀檢測等方法觀察 細胞的形態變化、細胞凋亡率及細胞周期變化。結果 的大豆苷元明顯抑制細胞的增殖，且有劑量依賴性；與對照組相比，大豆苷元處理 后，各組 細胞均出現亞二倍體峰（ ），細胞凋亡率與大豆苷元呈劑量依賴性。結論大豆苷元可誘導神經母細胞瘤 細胞凋亡，對 細胞增殖有明顯的抑制作用。 關鍵詞：  神經母細胞瘤 大豆苷元 增殖    神經母細胞瘤（， ）是兒童較常見的

2、惡性腫瘤，發病率占兒童惡性腫瘤的第 位，與兒童期常見的其他惡性腫瘤相比，化療效果差，嚴重威脅兒童的生命安全。因此，尋找新的治療藥物成為人們十分關切的問題。近年來，多種研究發現大豆異黃酮對多種癌癥具有抑制和治療作用 ，但對大豆異黃酮抗癌作用的研究主要集中在乳腺癌和前列腺癌等激素依賴性腫瘤，關于其對兒童神經母細胞瘤生長作用的影響研究報道很少。因此，我們于體外觀察了大豆苷元對 細胞株 生長的影響，以期為進一步研究其作用機制及臨床應用提供實驗室依據。  材料與方法  材料 細胞株為貴陽醫學院分子生物學重點實驗室贈送。大豆苷元（）為陜西賽德高科生物股份有限公司饋贈，純度為。 為 公司

3、生產，小牛血清為杭州四季青公司生產，二甲基啞砜（）和噻唑藍（）為 公司生產。 流式細胞儀為美國 公司生產； 型酶標儀和 型 培養箱均為美國 公司生產。   方法  細胞培養與接種 細胞株培養在含小牛血清的 培養基中， 培養箱內（），恒溫。當細胞長滿時，用胰蛋白酶消化，收集細胞， ，離心 ， 洗 次，以 × 的濃度接種于 孔板內，每孔體積為 。  受試藥物的處理將大豆苷元溶解在 中，配成 的儲存液， 保存。使用時用完全培養基將其稀釋成 的工作液，用直徑為 的微孔濾膜過濾除菌置于保存，并進一步用完全培養基分別稀釋成所需的不同濃度，待細胞接種 后分別

4、加入不同濃度的受試藥，每孔 ，使其終濃度分別為， ， ， ， 。每個濃度為 個孔，同時用含 的完全培養基和空白一起作對照。 用（ ）配成 的溶液，磁力攪拌器攪拌 ，直徑為 的微孔濾膜過濾除菌后保存， 周內有效。  細胞生長抑制效應的測定采用 比色法 。細胞接種 后加受試藥，之后每隔 用 比色法測定光密度值，即對應的活細胞數。具體操作如下：加受試藥后每隔一定時間加 溶液 ，繼續培養 ，終止培養后小心吸去孔內培養上清液，每孔加入 ，振蕩器振蕩 ，使結晶物充分溶解。選擇 波長在酶聯免疫檢測儀上測各孔的光吸收值，記錄大豆苷元作用于 細胞的濃度效應數據和時間效應數據，用下列公式計算藥物對細胞生

5、長的抑制率，并繪制效應曲線。    抑制率（）對照孔測定的平均OD 值加藥組測定的平均OD 值照孔測定的平均OD 值×%表1  大豆苷元對SH-SY5Y細胞增殖抑制率的影響（略）與對照組比較，P0.05；n=3  流式細胞儀檢測細胞凋亡及細胞周期分析各組細胞培養 后，收集各組細胞懸液 ，濃度約為 個， 離心 ，棄掉培養液，用 離心沖洗兩次，以的冷乙醇固定，保存 ，  離心 后， 洗滌沖洗去乙醇 次；加入 （終濃度為 ），搖勻，溫育 ；加入（終濃度為）染料 ，暗染。流式細胞儀檢測，每份標本測定（ ） × 個細胞，采用

6、 軟件對各組樣本進行 含量及細胞周期分析。  統計學方法實驗均重復 次以上。所有的測定指標均采用±s表示，用 統計軟件包進行分析，凋亡實驗用方差分析，細胞增殖實驗用t檢驗。以P 表示差異有顯著性。  結果  大豆苷元對 細胞的生長抑制作用細胞增殖抑制實驗結果顯示，與正常對照組相比，大豆苷元各濃度組處理 的細胞抑制率與正常對照組比較均有顯著性升高（P）（表，圖）。大豆苷元處理 細胞， 的 分別是， 。以上結果表明大豆苷元對 細胞的體外增殖具有較強的抑制作用，其抑制作用在一定的范圍內有劑量和時間依賴性，并呈現出一定的飽和性。圖1  大豆苷元對SH-SY5Y細胞體外增殖的抑制作用（略）  大豆苷元對 細胞周期和凋亡的影響藥物處理 后，大豆苷元各濃度組均能誘導 細胞凋亡， 峰前出現亞二倍體峰（ ），即凋亡細胞所特有的凋亡峰（圖）。大豆苷元誘導 細胞凋亡呈現一定的劑量依賴性，細胞凋亡率顯著高于正常對照組（P ）。隨著大豆苷元濃度的升高， 和 期的細胞明顯減少， 合成期（期）細胞數均明顯增多，表明大豆苷元使 細胞發生期阻滯，抑制細胞增殖。圖2   大豆苷元對SH-SY5Y細胞周期和凋亡的影響（略