1、正交實驗法優選熟地黃中5HMF的提取工藝【摘要】目的：以5羥甲基糠醛(5HMF)含量和熟地黃干膏收得率為指標，探討熟地黃中5HMF的提取工藝.方式：采納正交實驗法考察加水量、提取時刻、提取次數及醇沉濃度4個因素對5HMF含量和干膏收得率的阻礙，并運用高效液相法測定5HMF的含量.結果：通過對正交實驗結果的極差分析，得出提取次數和提取時刻兩個因素對干膏收得率和含量阻礙最大，參考兩種要緊阻礙因素，最終確信8倍量水、提取3次、每次h,700mL/L乙醇沉淀的提取工藝，并對該工藝進行三次重復性小試實驗.5HMF收得率可達58%以上.結論：通過對上述提取條件的重復性考察，該方式重復性好，5HMF收得率穩

2、固，為進一步中試實驗提供了參考依據.【關鍵詞】熟地黃；5羥基糠醛；中藥制藥工藝【AbstractAIM:Tooptimizethewaterextractingtechnologyconditionof5HMFfromRehmanniaglutinosalibosch.METHODS:TheextractionprocedureofRehmanniaglutinosaliboschwasstudiedbyorthogonaldesignwithdryextractyieldand5hydroxymethyl2furfura(5HMF)asthedetectiveindices.Effectso

3、ffourfactors(theamoutofwater,extractingtime,themumberoftimesandalcoholconcentration)and3levelsforeachfactoronextractionratewereanalyzed.RESULTS:The5HMFextractionratereachedover58%undertheoptimumextractionconditionwhichwastheadding8foldsofwater,anddecoctingfor3times,honceandtheprecipitationwith700mL/

4、Lalcohol.CONCLUSION:Theoptimumwaterdecoctingconditionisrepeatable,andensurestable5HMFextractionrate.ItcouldbeusedinthefuturemiddlescaledpreparationofRehmanniaglutinosalibosch.Keywordsradixrehmanniaepraeparata;5hydroxymethyl2furfura(5HMF);pharmaceuticaltechnology0引言熟地黃為玄參科連年生草本植物地黃(RehmanniagLutinosa

5、Libosch)的根，經加工炮制而成，在臨床上應用較為普遍.熟地黃含有梓醇、糖類、忒類和5羥甲基糠醛(5hydroxymethyl2furfura,5HMF)等多種化學成份.有研究報導生地黃炮制成熟地黃后5HMF的含量增加20倍左右1,在對5HMF藥理作用的研究中發覺其具有抗氧化、改善血液流變學等多種對人體有利的作用2-3.但是關于對熟地黃中5HMF的提取工藝卻少見文獻報導，為了更好的發揮熟地黃的藥用價值，咱們運用正交設計法，考察阻礙其提取的因素，挑選5HMF的最正確提取工藝條件.1材料和方式材料美國產Beckman125型高效液相色譜儀（32KaratTMSoftware色譜工作站），色譜柱

6、為DiamonsiLC18（5UL200Xmm）.BT125D型電子天平（北京Sartorius公司）；DL720型超聲波清洗器（上海科導超聲儀器）；乙月青為色譜純，其余試劑均為分析純，5HMF對照品（批號：111626200503,中國藥品生物制品檢定所），水（重蒸水），熟地黃藥材.（陜西省藥材總公司）.方式提取工藝設計藥材吸水率考察周密稱取熟地黃3份，每份20g.別離加10倍量水浸泡，每30min觀看1次藥材的滲透情形，直至藥材掰開無硬心為止，并記錄浸泡時刻，用量筒測量剩余水量，計算吸水率（表1）.正交實驗設計選用L9（34）正交進行實驗，以熟地黃浸膏得率,5HMF含量作為考察指標，因素水

7、平安排見表2.稱取熟地黃粗粉9份，每份20g,按正交實驗設計方案條件提取過濾，歸并濾液，定容到50mL,備用.表1熟地黃吸水率的考察表表2因素水平表的含量測定溶液制備周密稱取5HMF對照品適量，置于5mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻制成含mg/L的溶液，作為對照品溶液.周密稱取藥材提取液mL,蒸干溶劑，殘渣用甲醇定容于5mL容量瓶中，用Um微孔濾膜濾過，作為供試液.色譜條件的選擇色譜柱：DiamonsiLC18(5uL200Xmm)；流動相為乙月青：水(15：85),流速1mL/min,柱溫25測定波長280nm.進樣量20UL.在上述條件下，樣品HPLC色譜圖中5羥基糠醛與其他峰分

8、離良好.線性關系的考察周密量取對照品溶液適量，置50mL容量瓶中,加甲醇至刻度，別離吸取對照溶液4,8,12,16和20UL注入液相色譜儀中，測定其峰面積，以峰面積為縱坐標(A),對照品的濃度為橫坐標(C),繪制標準曲線,得回歸方程：Y=132034X+284737,R二，5HMF在mg/L范圍內呈良好的線性關系.周密度實驗周密吸取10UL對照品溶液，按上述色譜條件，持續進樣6次，測得5HMF平均峰面積，計算相對標準差RSD=%.穩固性實驗在相同條件下，周密吸取供試品溶液，在12h內，每隔2h測定1次峰面積，計算1口為，說明本品在12h內穩固.加樣回收率實驗抽取4號樣品加入5HMF對照品適量，

9、混勻，按供試品溶液制備，并按上述色譜條件測試.按供試品溶液制備方式提取測定，測得峰面積并計算含量，平均回收率,RSD=%.重復性小試實驗驗為進一步考察上述提取工藝的穩固性，按的實驗條件進行3次重復性小試實驗.2結果通過正交實驗極差分析結果顯示各因素對出膏率的阻礙依次為提取次數>提取時刻>醇沉濃度>加水量（表3）.對含量的阻礙依次為提取時刻>提取次數>醇沉濃度>加水量，通過極差分析說明，提取次數、提取時刻對5HMF的含量和熟地黃浸膏得率的阻礙比較著性，溶媒用量、提取時刻阻礙較小.綜合分析兩種指標，初步確信熟地黃提

10、取的最正確工藝應用8倍量的水，每次提取h,提取2次，然后用950mL/L乙醇沉淀至700mL/L.按上述優化條件進行重復3次實驗（表4）,5羥基糠醛收得率可達58%以上.表3正交實驗極差分析表表4熟地黃優選提取工藝的重復性小試實驗3討論熟地黃藥材為炮制品，水提后存在出膏過量等問題，該工藝中引入醇沉凈化方式進行處置，在保證含量的前提下，操縱出膏率，可為制劑提供方便.咱們用正交設計法對5HMF的提取工藝進行優選，通過直觀、極差分析法選出最正確工藝，為驗證此優選方案的可行性，咱們又按最正確工藝進行了3次重復性小實驗，結果穩固，5HMF收得率可達58%以上，初步完成了對熟地黃藥材的實驗室及小試實驗提取

11、工藝的挑選.關于熟地黃中5HMF含量的測定有薄層掃描、高效液相等多種方式4-5.結合實驗室現有條件，咱們選取高效液相法進行測定.張清波等6和秦向陽等7曾報導HPLC測定熟地黃中5HMF的含量，但咱們在其給定的流動相和檢測波長下，以DiamonsiLC18分析柱為色譜柱進行實驗，發覺5HMF的色譜峰顯現拖尾和分叉現象，且流動相極性太大，出峰時刻較短，溶劑峰干擾嚴峻.為此,咱們對實驗條件進行改良.采納DiamonsiLC18(5uL200X)色譜?。灰砸以虑啵核?15:85)為流動相，流速1mL/min,柱溫25.測定波長280nm,取得了較好的分離成效.采納高效液相色譜法測定5HMF的含量，可不經分離，直接測定，其方式簡便、準確、靈敏，重現性及回收率均符合要求.在本實驗給定的條件下，基線平穩“可有效排除溶劑峰的干擾，且峰型較好.【參考文獻】1劉漂亮，白玫，白榮枝，等.熟地黃中5羥甲基糠醛的提取分離及含量測定J.中草藥，1995,26(1):13-14.2耿放，王喜軍.5羥基糠醛(5HMF)在中藥復方中的研究現狀及相關藥效探討J.世界科學技術中醫藥現代化,2005,7(6):52-54.3馮建明，趙仁.三種地黃炮制品現代研究進展J.云南中醫學院學報，2000,23(12):40-42.4楚文，張昌斌，曹永紅，等.限制5羥甲基糠醛生成條件和探討J.人民軍醫藥學?？?，1998,1