1、Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;notforcommercialuse植物組織中丙二醛含量的測定襖一、實驗目的蔗1.了解測定植物組織中丙二醛含量的意義。聿2.掌握植物體內(nèi)丙二醛含量測定的原理及方法。贛二、實驗原理薄丙二醛是由于植物器官衰老或在逆境下遭受傷害，其組織或器官膜脂質發(fā)生過氧化反應而產(chǎn)生的一種有機物。它的含量與植物衰老及逆境對植物的傷害程度有密切關系。測定植物體內(nèi)丙二醛的含量，通常利用硫代巴比妥酸在酸性條件下加熱與組織中的丙二醛產(chǎn)生顯色反應，生成紅棕色的三甲川，三甲川最大吸收峰在532nm處，最小吸收峰600nm處，消光系數(shù)為155(mM)-1

2、cm-1逆境一膜脂的過氧化作用一丙二醛破代巴峻酸 TBA丙二醛3,55三甲基惡哇24二|同(三甲川)粉紐魚蓬測定植物組織中丙二醛含量會受到多種物質的干擾。其中最主要的是可溶性糖，糖與硫代巴比妥酸顯色反應產(chǎn)物的最大吸收波長為450nm,在532nm處也有吸收。植物遭受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫時可溶性糖增加，因此測定植物組織中丙二醛與硫代巴比妥酸反應產(chǎn)物含量時一定要排除可溶性糖的干擾。此外在 排除。532nm處的非特異背景吸收的影響也要加以腿低濃度的Fe3+存在能顯著增加硫代巴比妥酸與丙二醛顯色反應物在532nm、450nm處的吸收值，所以在硫代巴比妥酸與丙二醛的顯色反應中需要有一定的Fe3+存

3、在，通常植物組織中每克干重含F(xiàn)e3+的量為100300闖。根據(jù)植物樣品量和提取液的體積，通常加入Fe3+的終濃度為0.5nmol/L。在532nm、600nm和450nm波長處測定吸光度值，即可計算丙二醛含量。莆三、試驗用品蒞1.實驗材料蔽綠色植物葉片薄2.實驗器皿嵋天平、研缽、容量瓶（50mL）、移液槍、量筒（5mL）、試管、10ml離心管、離心機、水浴鍋、分光光度計B3.實驗試劑蔗石英砂妍20%三氯乙酸（TCA）溶液：小心稱取TCA10g,定容50mL。糖0.1%三氯乙酸（TCA）溶液：取250山20%的TCA稀釋至50mL。蔽0.5%硫代巴比妥酸（TBA）:0.25g硫代巴比妥酸溶解50

4、mL20%的TCA。筮四、試驗步驟蟆1.稱取0.2g左右葉片放入研缽中，加入少許石英砂和2mL0.1%TCA研成勻漿，轉移到試管，再用3mL0.1%TCA兩次沖洗研缽，合并提取液。每個樣做三個重復。妨2.向提取液中加入5mL0.5%TBA溶液，搖勻。節(jié)3.將試管放入沸水欲中，顯色15min,到時間后立即取出放入冰浴中冷卻至室溫。蒂4.待試管冷卻后轉入10ml離心管中3000r/min,離心15min,取上清液，測量其體積。并以0.5%TBA溶液作為參比值，測OD600,OD532,OD450。腿五、結果與分析芨丙二醛含量：MDA(gol/gFw)=6.425X(OD532nm-皿0辿-0.55

5、9XOD450nmXVtVsXW肅K、注意事項方1.0.1%0.5%三氯乙酸對丙二醛-硫代巴比妥酸反應較合適，高于此濃度非特異性吸收偏高。芾2.丙二醛-硫代巴比妥酸顯色反應加熱時，時間控制沸水浴1015min,過長過短OD532值下降。蟆3.待測液渾濁可適當適當增加離心力及時間，最好使用低溫離心機離心。螃4.可溶性糖與TBA顯色反應的產(chǎn)物在532nm也有吸收（最大吸收在450nm）,當植物處于干旱、高溫、低溫等逆境時可溶性糖含量會增高，必要時要排除可溶性糖的干擾。黃5.低濃度的鐵離子能增強MDA與TBA的顯色反應，當植物組織中鐵離子濃度過低時應補充Fe3+（最終濃度為0.5nmolL-1）。蝕

6、七.思考題滕1.通過丙二醛含量測定能解決什么理論問題和時間問題？著2.正常植物和逆境下植物相比，丙二醛含量有什么變化，分析原因。蒂3.不同植物同一逆境下，丙二醛含量變化不同，為什么？螈4.說明膜脂過氧化作用的對植物的影響。菱5.TBA為什么要溶解在三氯乙酸中？芄6.為什么要測定反應液在600nm下的吸光度？膀7.丙二醛反應液為什么加熱時間過長會影響測定結果？8.如果可溶性糖含量影響丙二醛含量的測定，你有什么辦法消除其影響？僅供個人用于學習、研究；不得用于商業(yè)用途Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;notforcommercialuse.Nurfurdenpers?nlichenfurStudien,Forschung,zukommerziellenZweckenverwendetwerden.Pourl'etudeletrechercheuniquementddesfinspersonnelles;pasddesfinscommerciales.tojibk