1、金銀花中綠原酸的超聲提取工藝優(yōu)化(一)    作者：曹淵 李創(chuàng)舉 夏之寧 徐彥芹 張運民【摘要】 目的優(yōu)選金銀花中綠原酸的最佳提取方法和提取工藝。方法以金銀花中綠原酸的含量為指標(biāo)，考察了水蒸氣蒸餾法、超聲波提取法和醇提法提取金銀花中綠原酸優(yōu)劣，確定超聲法為最佳提取方法。通過正交實驗，以溶劑濃度、預(yù)浸時間、超聲時間和pH值4個因素對超聲法的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。結(jié)果得到最佳的提取工藝條件為：乙醇濃度為60%，pH值1，預(yù)浸12 h，超聲提取2次，45 min/次；此條件下綠原酸提取率可達(dá)5.62%。影響程度為：pH值>預(yù)浸時間>超聲時間>溶劑

2、濃度。結(jié)論工藝簡單，提取條件溫和，提取率高，可為提取綠原酸的大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化所應(yīng)用。 【關(guān)鍵詞】 金銀花； 綠原酸； 超聲； 提??； 正交實驗Abstract：ObjectiveTo optimize the best methods and extraction process of extraction of chlorogenic acid from Honeysuckle.MethodsThe chlorogenic acid content and extraction rate in Honeysuckle as the standards, different extraction

3、methods, such as steam distillation, returning ethanol, ultrasound, were inspected, and the ultrasound method was determined as the best method. The effects of solvent concentration, presoaking time, ultrasound time, pH value on the ultrasound extraction process were also optimized. ResultsThe best

4、extraction conditions were as follows: concentration of ethanol at 60%, pH value 5.0, presoaking time for 12h, extraction 2 times and 45mins each time. Extraction yield of chlorogenic acid from Honeysuckle by ultrasound was 5.62%; the effect degree: pH value> presoaking time> ultrasound time&g

5、t; solvent concentration. ConclusionThis method is simple, the extracting condition is gentle, the rate of extraction is high, and this process is apt to industrial production of extraction of chlorogenic acid from Honeysuckle.Key words：Honeysuckle; Chlorogenic acid; Ultrasonic; Extract; Orthogonal

6、test金銀花為忍冬科植物忍冬的干燥花蕾,具有清熱解毒、抗菌消炎、保肝利膽的功能，是常用的中藥材之一1。它所含的化學(xué)成分有綠原酸、異綠原酸、黃酮化合物、芳樟醇和雙花醇等2,其中綠原酸被認(rèn)為是抗菌解毒、消炎利膽的主要有效成分，在醫(yī)藥、衛(wèi)生等領(lǐng)域具有很大的應(yīng)用價值，所以從植物中提取分離綠原酸以及綠原酸的純化具有重要的意義。金銀花提取工藝有水提法3、微波法4、酶解法5、乙醇回流法6等。本實驗考察了水提法、超聲提取法和醇提法提取金銀花中綠原酸的優(yōu)劣，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了超聲提取的正交實驗，以確定最佳提取條件，為進(jìn)一步應(yīng)用于工業(yè)大生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。1 材料與儀器As 3120A型超聲清洗儀（天津奧特賽恩斯儀器

7、有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化機械公司)，T6新世紀(jì)紫外可見分光光度儀(北京普析通用)，F(xiàn)A1004N型電子天平（上海菁海儀器有限公司）,PHS-3C型精密pH計(上海雷磁儀器廠)，HZ-D()循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；金銀花（重慶秀山縣野生），綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品（成都慢思生物科技有限公司），無水乙醇，95%乙醇，異戊醇，醋酸乙酯，均為市售分析純，實驗用水為自制蒸餾水。2 方法2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立2.2 水蒸氣蒸餾法分別稱取3份金銀花6.000 g，用剪刀剪碎后置于250 ml圓底燒瓶，加蒸餾水100 ml，回流1 h，過濾，濾渣加蒸餾水100 ml，回流1 h過濾，合并

8、濾液。濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至約40 ml。濃縮液用異戊醇萃取3次，40 ml/次，合并萃取液。萃取液定容至250 ml，從中吸取1.5 ml再定容至100 ml容量瓶中，在332 nm處測其吸光度，計算綠原酸的平均提取率。2.3 乙醇回流法分別稱取3份金銀花6.000 g，用剪刀剪碎，加入到250 ml圓底燒瓶中，加入100 ml 95%的乙醇，加熱回流1 h，過濾，濾渣加入與之對應(yīng)濃度乙醇100 ml，回流1 h，過濾，合并濾液。濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至約40 ml，用異戊醇萃取3次，40 ml/次,合并萃取液。萃取液定容至250 ml的容量瓶中，從中吸取1.00 ml溶液再定容至100 ml

9、容量瓶中，在332 nm處測其吸光度，計算綠原酸的平均提取率。2.4 超聲法分別稱取3份金銀花6.000 g，用剪刀剪碎后置于250 ml圓底燒瓶中，加95%乙醇100 ml，預(yù)浸12 h，超聲30 min，過濾，對濾渣重復(fù)上述操作，合并濾液。濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至約40 ml，濃縮液用異戊醇萃取3次，40 ml/次，合并萃取液。萃取液定容至250 ml，從中吸取1 ml定容至100 ml容量瓶中，在332 nm處測其吸光度，計算綠原酸的平均提取率。2.5 超聲法提取正交實驗根據(jù)綠原酸的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，初步判定提取過程中影響因素有：超聲時間、溶液pH值、溶劑濃度及預(yù)浸時間。以綠原酸得率為指標(biāo)，采用

10、正交實驗對條件進(jìn)行優(yōu)化。選用正交表L9(34)。因素水平設(shè)計見表1。表1 超聲法正交實驗因素和水平（略）分別稱取6.000 g金銀花9份，用剪刀剪碎置于9個250 ml具塞容量瓶中，按正交實驗設(shè)計調(diào)整超聲時間、溶液pH值、溶劑濃度及預(yù)浸時間，后處理同“2.4”項。3 結(jié)果3.1 方法比較結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線及表2中求得的提取率可知，以上3種方法提取綠原酸得率由高到低為：超聲法>乙醇回流法>水蒸氣蒸餾法。從表2可以看出，超聲法提取金銀花中綠原酸的得率是乙醇回流法的1.88倍，是水蒸氣蒸餾法的3倍，超聲法明顯優(yōu)于其他兩種方法。這是因為超聲的熱效應(yīng)和空化作用相結(jié)合而使金銀花細(xì)胞壁破裂，導(dǎo)致金銀花

11、的提取率大大提高。3.2 超聲波法提取條件優(yōu)化正交實驗見表3。極差分析表明，4種因素影響金銀花中綠原酸的提取率的程度為：pH值(C)>預(yù)浸時間(D)>超聲時間（A）>乙醇濃度(B)。正交表中推定最佳提取條件為：A3B2C1D1，即預(yù)浸時間12 h，超聲提取2次，45 min/次，所用乙醇濃度為60%，pH值為1。表2 金銀花中綠原酸的3種方法比較（略）表3 超聲法正交實驗分析結(jié)果（略）4 結(jié)論通過比較水蒸氣蒸餾法、乙醇回流法和超聲法3種提取金銀花中綠原酸的方法可知，水蒸氣蒸餾法和乙醇回流法操作雖然簡單，但提取時間長，提取率低，而超聲法提取工藝簡單，提取時間短，條件溫和，綠原酸

12、得率高，而且綠色環(huán)保。水蒸氣蒸餾法和乙醇回流法是將溶劑浸入到細(xì)胞內(nèi)部，將綠原酸溶出的過程；超聲波法是在適當(dāng)?shù)臈l件下，利用超聲波的空化作用引起的湍動效應(yīng)、微波效應(yīng)、界面效應(yīng)和聚能效應(yīng)等，產(chǎn)生的強大剪切力能使植物細(xì)胞壁破裂，使細(xì)胞更容易釋放內(nèi)容物；而微波效應(yīng)促進(jìn)溶劑進(jìn)入提取物細(xì)胞，加速成分進(jìn)入溶劑，故超聲法提取效果較好7。通過實驗得到超聲波提取金銀花中綠原酸最佳工藝為：金銀花預(yù)先浸泡12 h，然后超聲提取2次，45 min/次，所用乙醇濃度為60%，pH值為1。各因素影響金銀花中綠原酸的提取率主次關(guān)系為pH值>預(yù)浸時間>超聲時間>乙醇濃度【參考文獻(xiàn)】1 國家藥典委員會. 中國藥典，一部S.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005：152.2 沙世炎,徐禮桑,嚴(yán)敏如,等.中草藥有效成分分析法，上冊M.北京:人民衛(wèi)生出版社,1982：156.3 梅 林,梅 蘭,李隨麗.正交試驗法優(yōu)化金銀花中綠原酸的水提工藝J.中國藥業(yè),2007,16(6): 42.4 余建平,林 燕