1、1. 目的建立無菌檢查的標準操作規程，確保檢驗結果的準確性。2. 適用范圍本規程適用于本公司質管部對本廠生產的一次性微波消融針的無菌檢測。3. 職責質量部負責實施。4. 內容檢驗依據產品注冊標準中華人民共和國藥典 2015 年版 無菌檢查法 儀器、設備超凈工作臺、電熱干燥箱、恒溫培養箱、壓力蒸汽滅菌器、集菌儀、電子天 平、PH計、冰箱、恒溫水浴鍋、酒精燈、三角燒瓶，接種環、鑷子，試管架， 大試管若干等。培養基及稀釋液需氣菌、厭氣菌培養基：硫乙醇酸鹽流體培養基；霉菌培養基：大豆酪蛋白肉湯培養基；培養基 的無菌性檢查每批配制的培養基均應進行無菌性檢查 （可與產品無菌檢驗同步進行） 查時，每批培養基

2、隨機取不少于 5 支（瓶）培養 14 天，應無菌生長； 稀釋液氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液， 9g/L 無菌氯化鈉溶液；無菌檢驗室的環境要求 （1）無菌檢驗應在環境潔凈度 10000 級下的局部百級的單向流空氣區域內進行。（2）緩沖區與外界環境、無菌檢驗室與緩沖區之間空氣應保持正壓，陽性對照 室與緩沖區之間空氣應保持負壓。無菌檢驗室與室外大氣之間靜壓差應大于10Pa無菌檢驗室的室溫應保持 1826C,相對濕度：4565%（3）無菌檢驗室的單向流空氣區、 工作臺面及環境應定期按 醫藥工業潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現行國家標準進行懸浮粒子、 浮游菌和沉降菌的監測。（4） 無菌檢驗

3、過程中應同時檢查超凈工作臺單向流空氣中的菌落數： 每次操作 時在層流空氣所及臺面的左中右置 3個TSA瓊脂平板，暴露30min,于3035C 培養48小時，菌落數平均應不超過1CFU平板。無菌檢驗前的準備器具滅菌、消毒可經壓力蒸汽滅菌器內121T蒸汽滅菌30分鐘后使用。人員、物料進入無菌檢驗室開啟紫外線燈或臭氧發生器進行空間滅菌處理，消毒時間不得少于30min。物料進入無菌檢驗室流程進入無菌操作室的所有培養基、 供試品等的外表都應采用適用的方法進行消毒處理，以避免將外包裝污染的微生物帶入無菌檢驗室。人員進入無菌檢驗室流程（1）更鞋脫衣：在一更區脫去一般區工作鞋，穿上無菌檢驗室工作鞋；脫去一 般

4、區工作服。（2）洗手：首先用洗手液在手上揉擦出泡沫，再用流水連續沖洗20 秒，洗凈泡沫。（3）更衣：在二更區按照要求穿衣，要求褲子掖在上衣里，口罩掩住口鼻，帽 子包裹所有頭發。（4）手消毒：用消毒液浸泡雙手 5 秒以上或用浸過消毒液的棉球擦拭雙手。消 毒液可用洗必泰、新潔爾滅、碘伏、 75%酒精等。（5）人員進入：經緩沖間進入無菌檢驗室。無菌檢驗操作要求（1）全過程必須嚴格執行無菌操作，防止微生物污染。（2）使用玻璃器皿應輕取輕放，避免破損，以防培養物擴散。（3）所有操作不得有大幅度或快速動作，以免攪動空氣中的塵埃微粒。（ 4） 使用金屬接種器具時，用前、用后均需灼燒滅菌。（ 5） 在接種培養

5、物時，動作應輕、準，防止培養物濺出，產生汽溶膠，造成污 染。（6）操作過程中所有的帶菌物品，用后均應作消毒、滅菌處理。在檢驗完成后 經傳遞窗傳至一般區，立即用壓力蒸汽滅菌鍋121C滅菌30分鐘。對照菌液制備無菌檢驗所用的菌株傳代次數不得超過 5 代。取金黃色葡萄球的普通瓊脂斜面培養物，接種金黃色葡萄球至TSA瓊脂培養基內，在3035 C培養1824h后備用，同時制備氯化鈉溶液加入在6支小試管 內，每支試管內加的氯化鈉溶液，在壓力鍋內經121C滅菌30min備用。將已 配好的金黃色葡萄球菌培養菌液取加入第一支小試管內，稀釋成濃度 1:10 的菌 液；取第一支試管內 l 菌液加入第二支小試管內，稀

6、釋成濃度 1:100 的菌液， 同法稀釋成濃度1:10-6 （每ml含菌量w 100CFU即可。采用平皿計數法測定活菌數。. 試驗方法供試液準備優先采用將供試品或其有代表性的各部分直接投放入培養基內培養的方法， 如供試品不適宜直接投放， 可按下列方法制備供試液， 應使浸提介質充分洗提供 試品的浸提表面，供試液制備應按無菌操作法進行，在制備后 2 小時內使用。根據供試品具體特性選擇下列方法：a）管類器具：按管內表面積每10cm2 流過管內腔 1ml 浸提介質，流量約為10ml/min ，收集到無菌的容器內。b）容器類器具：按容器內表面積每 10cm2 加入浸提介質 1ml 的比例，振搖數次。c）

7、實體類器具：實體類器具按表面及每 10cm2加入浸提介質1ml,振搖數次。收集上述沖洗液或浸提介質于無菌容器中。接種薄膜過濾法：優先采用封閉式薄膜過濾器（集菌器） ，也可使用開放式薄膜 過濾器。濾膜孔經不大于 ym。a、如采用封閉式薄膜過濾器，取一副三聯式集菌器，將供試液通過集菌儀過濾，使通過每只培養管的量基本均勻。然后通過集菌儀一只加 50ml TSB 培養基，另 兩只分別加入 50ml 硫乙醇酸鹽培養基（其中一只做陽性對照，內加金黃色葡萄 球菌液1ml）。另取一副二聯集菌器，用同批的沖洗液或浸提介質50ml通過集菌儀過濾（每只約50ml），同法一只加硫乙醇酸鹽培養基 50ml，另一只加TS

8、B培養 基 120ml 分別作陰性對照。b、 如用一般薄膜過濾器，將供試液過濾后取出濾膜，將其剪成3等份，分別置 于含50ml硫乙醇酸鹽流體培養基及 TSB培養基的容器中，其中兩份作檢驗，一 份作陽性對照。直接接種法： 適用于一次性使用注射針、 一次性使用靜脈輸液針 （包括輸液 器、輸血器、注射器配套使用注射針） 。a、敷料供試品：取規定數量，每個包裝以無菌操作拆開，于不同部位剪取約120mg 或1cmx 3cm的供試品，接種于各管足以浸沒供試品的適量培養基中。b、無菌針頭：直接投入含15ml以上硫乙醇酸鹽流體培養基及 TSB培養基的容器 中。c、一次性使用的材料：拆散或切成小碎斷，接種于各管足以浸沒供試品的適量 培養基中。培養、觀察（1）上述含培養基的容器分別置規定溫度的恒溫培養箱中，其中硫乙醇酸鹽 流體培養基，置3035C培養；TSB培養基，置2025C培養。除陽性對照管 培養4872小時外，其余管培養14天。培養期間應逐日觀察并記錄是否有菌生 長。（2） 如在加入供試品后、或在培養過程中，培養基出現渾濁，培養14 天后， 不能從外觀上判斷有無微生物生產， 可取該培養液適量轉種至同種新鮮培養基中 或劃線接種于斜面培養基上， 細菌培養 2 天，真菌培養 3 天，觀察是否再出現渾 濁或斜面有無菌生長。結果判斷（1）培養結束后，陽性對照管應有菌