1、4.1 POCT 概述4.1.1 POCT的概念、基本原理及主要技術(shù)POCT是指在病人旁邊分析病人標(biāo)本的分析技術(shù)，或者說只要測(cè)試不在主 實(shí)驗(yàn)室做，并且它是一個(gè)可移動(dòng)的系統(tǒng)，就可以稱為POCT “POCT的組成包括：地點(diǎn)、時(shí)間（poi nt）、保健、照料（care ）、檢驗(yàn)、試驗(yàn)（testi ng ）,poi nt-of-care test ing英文字面的意思是在受治療者現(xiàn)場(chǎng)的保健檢驗(yàn)。POCT的基本原理是：把傳統(tǒng)方法中的相關(guān)液體試劑浸潤于濾紙和各種微 孔膜的吸水材料中，成為整合的干燥試劑塊，然后將其固定于硬質(zhì)型基質(zhì)上，成 為各種形式的診斷試劑條；或把傳統(tǒng)分析儀器微型化，操作方法簡單化，使之成

2、 為便攜式和手掌式的設(shè)備；或?qū)⑸鲜鰞烧哒蠟榻y(tǒng)一的系統(tǒng)。JPOC主要技術(shù)包括：（1） 簡單顯色（干化學(xué)法測(cè)定）技術(shù)將多種反應(yīng)試劑干燥、固定在紙片上，2 加上檢驗(yàn)標(biāo)本（全血、血清、血漿、尿液等）后產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用肉眼觀察定性 或儀器檢測(cè)（半定量）。（2） 多層涂膜（干化學(xué)法測(cè)定）技術(shù)多層涂膜技術(shù)是從感光膠片制作技術(shù)移 植而來的。將多種反應(yīng)試劑依次涂布在片基上，制成干片，用儀器檢測(cè)，可以準(zhǔn) 確定量。（3）免疫金標(biāo)記技術(shù) 膠體金顆粒具有高電子密度的特性，金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的標(biāo)記處大量聚集時(shí)， 肉眼可 見紅色或粉紅色斑點(diǎn)，這一反應(yīng)可以通過銀顆粒的沉積被放大。

3、該類技術(shù)主要有 斑點(diǎn)免疫滲濾法（DIGFA和免疫層析法（ICA）。（4）免疫熒光技術(shù) 通過檢測(cè)板條上激光激發(fā)的熒光，定量檢測(cè)以pg/ml為單位 的檢測(cè)板條上單個(gè)或多個(gè)標(biāo)志物。 檢測(cè)系統(tǒng)通常由熒光讀數(shù)儀和檢測(cè)板組成。 檢 測(cè)板多用層析法，分析物在移動(dòng)的過程中形成免疫復(fù)合物， 通過檢測(cè)區(qū)域、質(zhì)控 區(qū)域的熒光信號(hào)值的不同與分析物的不同濃度成一定的比例， 獲得定標(biāo)曲線，可 檢測(cè)未知樣本中分析物的濃度。（5）生物傳感器技術(shù) 利用離子選擇電極，底物特異性電極，電導(dǎo)傳感器等特 定的生物檢測(cè)器進(jìn)行分析檢測(cè)。該類技術(shù)是酶化學(xué)、免疫化學(xué)、電化學(xué)與計(jì)算機(jī) 技術(shù)結(jié)合的產(chǎn)物。（6）生物芯片技術(shù) 生物芯片是最新發(fā)展起來的

4、新技術(shù)。其特點(diǎn)是在小面積的芯片上同時(shí)測(cè)定多個(gè)項(xiàng)目。生物芯片可分基因芯片、蛋白質(zhì)芯片和細(xì)胞芯片。它 們具有高靈敏度、分析時(shí)間短、能同時(shí)檢測(cè)的項(xiàng)目多等特點(diǎn)。（7） 紅外和遠(yuǎn)紅外分光光度技術(shù)此類技術(shù)常用于經(jīng)皮檢測(cè)儀器，用于檢測(cè)血 液中血紅蛋白、膽紅素、葡萄糖等成分。這類床邊檢驗(yàn)儀器可連續(xù)監(jiān)測(cè)病人血液 中的目的成分，無需抽血，可避免抽血可能引起的交叉感染和血液標(biāo)本的污染， 降低每次檢驗(yàn)的成本和縮短報(bào)告時(shí)間。（8）其他技術(shù)4.1.2 POCT的特點(diǎn)及與傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢查的不同POCT勺主要特點(diǎn)就是，可以迅速地獲得可靠的檢驗(yàn)結(jié)果，從而提高病人 的臨床醫(yī)療效果。簡單的說，實(shí)驗(yàn)儀器小型化，操作方法簡單化，結(jié)果報(bào)告

5、即時(shí) 化。表19-1臨床實(shí)驗(yàn)室與POCT勺主要不同點(diǎn)比較項(xiàng)目臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)試POCT周轉(zhuǎn)時(shí)間慢快標(biāo)本鑒定復(fù)雜簡單標(biāo)本處理通常需要不需要血標(biāo)本血清、血漿多為全血校正頻繁不頻繁試劑需要配制隨時(shí)可用消耗品相對(duì)少相對(duì)多檢測(cè)儀復(fù)雜簡單對(duì)操作者的要求專業(yè)人員普通人亦可以靈敏度相對(duì)高相對(duì)低母?jìng)€(gè)試驗(yàn)花費(fèi)低高試驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量高一般4.1.3 POCT儀的分類按照用途來分，可以分為血液分析儀、快速血糖檢測(cè)儀、電解質(zhì)分析儀、血?dú)夥治鰞x、藥物應(yīng)用監(jiān)測(cè)儀、抗凝測(cè)定儀、心肌損傷標(biāo)志物檢測(cè)儀、甲狀腺激 素檢測(cè)儀、酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)儀、放射免疫分析儀等種類繁多的儀器。根據(jù)其大小和重量，可以將監(jiān)測(cè)離體血液標(biāo)本的分析儀，分為桌面(be nc

6、htop )型、便攜型、手提式及手提式一次性使用型。最近，一種被稱為 CD的POCTE經(jīng)問世，其在類似CD的圓盤中含有多種生物傳感器，具有診斷檢 驗(yàn)功能，通過標(biāo)準(zhǔn)或定制的閱讀器獲取監(jiān)測(cè)結(jié)果，有人又稱之為CD實(shí)驗(yàn)室。根據(jù)所用的一次性裝置來分，可有單一或多墊試劑條、卡片式裝置、生物 傳感器裝置、微制造裝置以及其他多孔材料等多種裝置。4.1.4 POCT的臨床應(yīng)用隨著各種POC技術(shù)及檢測(cè)儀器的使用，使得 POCT既可在醫(yī)院，也可在 醫(yī)院外進(jìn)行。一些特殊項(xiàng)目甚至在家里或在某些特殊的場(chǎng)合(如室外、現(xiàn)場(chǎng))均 可檢測(cè)，極方便了病人和一些特殊人群的需要。(1) 糖尿病診治方面的應(yīng)用各種快速血糖儀、多種無創(chuàng)傷性

7、血糖檢測(cè)儀的使用使報(bào)告時(shí)間(TAT)大大縮短，是臨床、患者家庭最常用的檢測(cè)儀器；全定量免疫熒光檢測(cè)儀檢測(cè)糖尿病 患者的糖化血紅蛋白與尿微量白蛋白等指標(biāo)，有助于早期發(fā)現(xiàn)糖尿病腎病，有利于患者病情的估計(jì)與長期監(jiān)測(cè)；傳感器相關(guān)檢測(cè)儀可檢測(cè)患者血?dú)饧半娊赓|(zhì)等指 標(biāo)；干化學(xué)分析儀可檢測(cè)患者血液中各種生化指標(biāo)。(2) 心血管疾病方面的應(yīng)用急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction，AMI)發(fā)病急，嚴(yán)重影響到患者的生命安全。POCT勺運(yùn)用可使AMI患者得到及時(shí)的診斷和治療。金標(biāo) 定量檢測(cè)儀、全定量免疫熒光檢測(cè)儀、快速CRP僉測(cè)儀等可檢測(cè)特異性血清早期 標(biāo)志物如肌鈣蛋白I( cTnI

8、)、肌紅蛋白(Mb、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB) D- 二聚體、腦鈉肽(BNP)、CRP利用干片式血凝分析儀進(jìn)行凝血酶原時(shí)間(PT)測(cè) 定、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT測(cè)定；干化學(xué)分析儀可檢測(cè)血液中門冬氨酸 氨基轉(zhuǎn)移酶(AST、乳酸脫氫酶(LDH、肌酸激酶(CK等生化指標(biāo)的檢測(cè)； 傳感器相關(guān)分析儀可檢測(cè)患者血?dú)饧半娊赓|(zhì)等指標(biāo)。(3) 感染性疾病中的應(yīng)用診斷用蛋白芯片技術(shù)、免疫金標(biāo)記技術(shù)相關(guān) POCT勺使用，可使不具備細(xì) 菌培養(yǎng)條件的基層醫(yī)院、民營診所、社區(qū)保健所進(jìn)行微生物的快速檢測(cè)， 也可用 于醫(yī)院中手術(shù)前傳染病四項(xiàng)檢測(cè)(HBsAg HCV HIV、TP)、鏡檢查前的病毒性 肝炎篩選等。

9、(4) 發(fā)熱性疾病方面的應(yīng)用快速CRP檢測(cè)儀的使用，將CRP與血常規(guī)的結(jié)果聯(lián)合應(yīng)用，對(duì)鑒別發(fā)熱患 者感染病原體的性質(zhì)(細(xì)菌或病毒)比單一檢測(cè)更具特異性。(5) ICU病房的應(yīng)用在ICU病房，目前臨床上已使用的有：用于體外監(jiān)測(cè)的電化學(xué)感應(yīng)器，可 周期性地控制患者的血?dú)狻㈦娊赓|(zhì)、紅細(xì)胞壓積和血糖等；用于體監(jiān)測(cè)的生物傳 感器，將其安裝在探針或?qū)Ч鼙谏?，置于?dòng)脈或靜脈管腔，通過監(jiān)視器可定期獲 取待測(cè)指標(biāo)的數(shù)據(jù)。(6) 兒科診療中的應(yīng)用適合兒童的診斷行為需要輕便、易用、無創(chuàng)傷或創(chuàng)傷性小、樣品需求量少、 無需預(yù)處理、快速得出結(jié)論等要素，以縮短就診周期，還需要關(guān)注父母的滿意度。 POCT能較好地達(dá)到上述要求

10、。POC另一特點(diǎn)是診斷病情時(shí)父母可一直陪伴在孩 子身邊，隨時(shí)了解檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的含義，更好地與醫(yī)護(hù)人員交流，有利于患兒疾病的 診治。循證醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用從循證醫(yī)學(xué)的角度來評(píng)價(jià)，POCT爾補(bǔ)了傳統(tǒng)臨床實(shí)驗(yàn)室流程煩瑣的不足。 循證醫(yī)學(xué)(Evidenee based medicine ，EBM是遵循現(xiàn)代最佳醫(yī)學(xué)研究的證據(jù)， 并將證據(jù)應(yīng)用于臨床對(duì)患者進(jìn)行科學(xué)診治決策的一門學(xué)問。 POCT所用實(shí)驗(yàn)儀器 體積小、攜帶方便、容易使用，操作人員可以在實(shí)驗(yàn)室外的任何場(chǎng)所進(jìn)行， 快速、 方便地獲取患者某些與疾病相關(guān)的數(shù)據(jù)， 這正是循證醫(yī)學(xué)所要達(dá)到的主要目的一 有據(jù)可循。(8)醫(yī)院外的應(yīng)用各種免疫金標(biāo)技術(shù)相關(guān)的POCT儀傳感

11、器技術(shù)相關(guān)的POCT儀、干化學(xué)技 術(shù)相關(guān)POCT儀，由于方便、快速等特點(diǎn)，可在家庭自我保健、社區(qū)醫(yī)療、醫(yī)師 診所、醫(yī)務(wù)室、體檢中心、救護(hù)車上、事故現(xiàn)場(chǎng) (甚至戰(zhàn)場(chǎng))、出入境檢疫、禁 毒、戒毒中心、公安部門和運(yùn)動(dòng)員尿液檢測(cè)等醫(yī)院外的許多部門和場(chǎng)所廣泛應(yīng)用。 4.1.5 POCT存在的問題與發(fā)展前景1. POCT存在的問題(1) 質(zhì)量保證問題。各種POC分析儀的準(zhǔn)確度和精密度各不相同，而且沒有統(tǒng)一的室和室間嚴(yán)格的質(zhì)量控制，無法確保分析系統(tǒng)的質(zhì)量。目前尚未有嚴(yán)格的質(zhì) 量保證體系和管理規(guī)，導(dǎo)致出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量不易保證的現(xiàn)象。非檢驗(yàn)操作人員 如醫(yī)師和護(hù)士等工作人員沒有經(jīng)過適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)，不熟悉設(shè)備的性能和局

12、限性，都是導(dǎo)致POCT生質(zhì)量不穩(wěn)定的重要原因。由于POCTS使用和管理中的不規(guī)導(dǎo)致對(duì)病人仍然存在潛在的危險(xiǎn)，因此 許多國家和地區(qū)均頒布了權(quán)威的 POCT使用原則。在英國，發(fā)布了諾丁漢女王醫(yī)學(xué)中心2005年修訂后的POCTS用原則。在 美國，NCCLS于 1995年發(fā)表了 AST2-P文件，介紹關(guān)于評(píng)價(jià)和實(shí)施床邊體外診斷 檢驗(yàn)的信息。隨后，美國的POCT部門又忙于修訂符合臨床實(shí)驗(yàn)室的管理法規(guī)， 尤其是2003年1月頒布的新“質(zhì)量體系”要求。結(jié)合美國 NCCLSS幾年發(fā)表的 其他多篇與POCT質(zhì)量管理有關(guān)的文件，可以發(fā)現(xiàn)，POCT勺質(zhì)量在美國正日趨得 到保障。文件對(duì)有關(guān)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可、POC取的使用、

13、操作人員的培訓(xùn)、質(zhì)量評(píng)估、 方法學(xué)評(píng)價(jià)、結(jié)果記錄及報(bào)告等均有明確規(guī)定。在我國，POCT勺使用發(fā)展較快，但管理相對(duì)滯后。不過，最近我國也已經(jīng)出臺(tái)了關(guān)于POCT勺管理辦法(試行草案)。其中對(duì)POCT勺組織管理、POC隊(duì)員的培訓(xùn)、對(duì)POC專用儀器的認(rèn) 可、POCT質(zhì)量保證計(jì)劃、POC操作規(guī)方面、人員安全性及廢物處理、床邊檢驗(yàn) 的操作程序、結(jié)果的報(bào)告、以及費(fèi)用方面的問題等都有詳細(xì)的規(guī)定與說明。(2) 循證醫(yī)學(xué)評(píng)估問題。POC取器及檢驗(yàn)結(jié)果本身來說，尚缺乏循證醫(yī)學(xué)的評(píng) 估.(3) 費(fèi)用問題。POCT單個(gè)檢驗(yàn)費(fèi)用，高于常規(guī)性檢驗(yàn)。(4) 報(bào)告書寫不規(guī)，也是目前 POCT存在的一個(gè)問題。2. POCT的發(fā)展

14、前景為了適應(yīng)實(shí)際需要，理想的POC取器應(yīng)該是結(jié)構(gòu)靈巧、體積小、容易使 用、不需要額外人工處理標(biāo)本、不需要非常精確的加樣，結(jié)果準(zhǔn)確、并能自動(dòng)保 存所有記錄的微型移動(dòng)系統(tǒng)。應(yīng)用無創(chuàng)性/少創(chuàng)性技術(shù)的POCT儀器將是POCT勺另一個(gè)發(fā)展方向。生物芯片技術(shù)相關(guān)的POCTS其具有高靈敏度、分析時(shí)間短、同時(shí)能檢測(cè)的項(xiàng)目多等特點(diǎn)，也是POCT發(fā)展的一個(gè)重要趨勢(shì)4.2 POCT常用技術(shù)及相關(guān)儀器（1）電源開關(guān)。（2）狀態(tài)燈。（3）電池。由于POC取器使用地點(diǎn)非常廣泛，所以都自帶電源一一配備電池。（4）（熱敏）打印機(jī)、顯示器。顯示器和打印機(jī)用于輸出結(jié)果。（5）鍵盤。鍵盤屬于輸入設(shè)備。（6）樣本測(cè)量室（閱讀儀及光源

15、等）。樣本測(cè)量室的光源，可以是一般的檢測(cè) 光源，也可能是激發(fā)光的光源。閱讀儀可以幫助控制、簡化部分分析反應(yīng)，還可 以整合數(shù)據(jù)的處理、存儲(chǔ)功能。比如，校正曲線計(jì)算法所使用的校正曲線，質(zhì)量 控制限度和結(jié)果數(shù)據(jù)存儲(chǔ)等。帶有微處理器的閱讀儀甚至可以對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行校正， 然后解釋結(jié)果。（7）條形碼/密碼牌閱讀器。由于一次性分析裝置通常是獨(dú)立包裝， 每個(gè)外包裝 上都帶有獨(dú)特的條碼，其中包含有試劑的各種信息；有的儀器還帶有密碼牌，用 于校準(zhǔn)及質(zhì)量控制。所以，POC取一般都配備條形碼/密碼牌閱讀器。（8）置的數(shù)據(jù)處理及儲(chǔ)存中心。作為閱讀器的補(bǔ)充而出現(xiàn)的置的數(shù)據(jù)處理及儲(chǔ) 存中心，增加了儲(chǔ)存質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)或患者數(shù)據(jù)及其他數(shù)

16、據(jù)處理功能。（9）一次性分析裝置（帶有樣本感應(yīng)器或限流閥以及樣本注入口等）。一次性裝置又可以分成單一或多墊試劑條（包括單層、多層試紙墊）、酶層析裝置、免 疫橫流（層析）分析裝置、卡片式裝置、微制造裝置、生物傳感器裝置等。J4.2.2 多層涂膜技術(shù)相關(guān)POC分析系統(tǒng)基本結(jié)構(gòu)與功能（1）多層涂膜技術(shù)制成的干片結(jié)構(gòu)，如圖19-1干片中的涂層按其功能分4層：分布層（有時(shí)又分成擴(kuò)散層和遮蔽或凈 化劑層）、試劑層、指示劑層、支持層。分布層是一層高密度孔聚合物。分布層的作用不僅可以阻留細(xì)胞、結(jié)晶和其他 小顆粒，還可以讓大分子（如蛋白質(zhì)）滯留。分布層中朝下的一面加入反光物質(zhì) 如Ti02和BaS04來掩蓋病人標(biāo)

17、本中的有色物質(zhì)，使反射光度計(jì)不受其影響。同 時(shí)這些反光化合物也給干片底層的指示劑層提供反射背景。試劑層試劑層的主要功能是提供能實(shí)現(xiàn)化學(xué)反應(yīng)所需的環(huán)境，提供化學(xué) 反應(yīng)所需干試劑，把標(biāo)本中的待測(cè)成分轉(zhuǎn)變成可定量物質(zhì)，同時(shí)去除干擾。指示劑層 其目的是生成一種可以定量且與待測(cè)物含量直接成比例的產(chǎn) 物。指示劑層中的色原含量用反射光度計(jì)讀取。支持層 起物理固定作用，同時(shí)允許測(cè)量光通過，并對(duì)通過光不產(chǎn)生任何干擾作 用。（3）影響因素及質(zhì)量控制干片及配套試劑的處理過程和儲(chǔ)存、儀器光路的變化等均會(huì)引起結(jié)果的偏差。儀器通常要求6個(gè)月一次定標(biāo)，每日一次質(zhì)控。儀器使用的質(zhì)控品為 VITROS原裝配套質(zhì)控品及專用稀釋液

18、。為保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，還應(yīng)注意儀器的 維護(hù)，主要是光路的清潔和校正以及干片儲(chǔ)藏盒的干燥劑和保濕劑的及時(shí)更換 免疫金標(biāo)記技術(shù)相關(guān)POCT儀的基本結(jié)構(gòu)與功能斑點(diǎn)金免疫滲濾法已被廣泛應(yīng)用于臨床各種定性指標(biāo)的測(cè)定，此類方法所測(cè)項(xiàng)目大多為定性或半定量的結(jié)果，不需要特殊的儀器。金標(biāo)定量檢測(cè)儀器，屬于復(fù)合型免疫層析技術(shù)，以金膠?；蛑槟z粒等 有色粒子作標(biāo)記物，層析條通過多種材料復(fù)合而成。金標(biāo)定量檢測(cè)儀器硬件部分 一般由電腦、輸入輸出接口、模數(shù)轉(zhuǎn)換器、掃描控制電路、光電轉(zhuǎn)換電路、背景 補(bǔ)償電路、顯示器等組成。為了保存測(cè)試結(jié)果，配有微型打印機(jī)。由于抗原抗體 的結(jié)合及膠體金材料都很貴，不可能象化學(xué)試劑那樣，做成

19、大面積顯色，同時(shí)背 景有水、血、膠體金等，且在滲透過程中不均勻等原因，因此必須設(shè)計(jì)特殊的光 學(xué)系統(tǒng)（如反射型光纖傳感器），才能解決金標(biāo)定量測(cè)試的問題。反射型光纖傳 感器由入射光纖和接收光纖組成。測(cè)試時(shí)，檢測(cè)卡固定，電腦控制機(jī)械掃描系統(tǒng)， 使光纖傳感器從背景（硝酸纖維素膜區(qū)）向測(cè)試線掃描。免疫層析法檢測(cè)試劑條結(jié) 構(gòu)見圖19-4.1，免疫層析試驗(yàn)原理見圖19-4.2。光源發(fā)出的光經(jīng)發(fā)送光纖射向 被測(cè)體的表面，反射光由接收光纖收集，并傳送到光探測(cè)器轉(zhuǎn)換成電信號(hào)輸出。 另外該儀器還設(shè)計(jì)了一系列軟件，以提高檢測(cè)結(jié)果的可靠性和精確性。如根據(jù)水 的滲透規(guī)律，編制特殊的軟件，補(bǔ)償滲透不均勻引起的干擾信號(hào)； 根

20、據(jù)不同的測(cè) 試條、不同的批號(hào)，編制軟件嚴(yán)格控制測(cè)試時(shí)間；根據(jù)朗伯-比爾定律及相關(guān)的數(shù)學(xué)知識(shí)，將光密度值與濃度的關(guān)系用數(shù)學(xué)模型來表示， 并輸入電腦，每次測(cè)定時(shí)，電腦即可自動(dòng)將光密度值轉(zhuǎn)換成濃度值并顯示。聽纖癢素膿1+*1 1C質(zhì)控區(qū)層析方同圖19-4.1免疫層析法檢測(cè)試劑條結(jié)構(gòu)ECTK圖1 '9-*. 免疫屋析試臉匝理樂慈圖對(duì)檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量保證，還包括一些日常工作。由于該儀器應(yīng)用的是光學(xué) 原理，測(cè)量環(huán)境的光照變化、測(cè)量筆尖密封性的變化及其他物理?xiàng)l件（溫度、水 等液體）變化均會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生干擾。正確的定標(biāo)是確保儀器重復(fù)精確讀數(shù)的必要 步驟。對(duì)不同測(cè)量條件和筆尖各種變化可能引起各種誤差的調(diào)整，

21、可以通過定標(biāo)（散射光調(diào)整和空白調(diào)零程序）來完成。試劑盒含陽性定值圍的質(zhì)控物，用于試 劑穩(wěn)定性及試驗(yàn)的質(zhì)量控制。免疫熒光測(cè)定技術(shù)相關(guān)POCT儀器檢測(cè)原理和結(jié)構(gòu)檢測(cè)系統(tǒng)由一個(gè)熒光讀數(shù)儀和檢測(cè)板組成。檢測(cè)板采用層析技術(shù)，分析物在移動(dòng)的過程中形成免疫復(fù)合物。 通過檢測(cè)區(qū)域、質(zhì)控區(qū)域的熒光信號(hào)值的不同 與分析物的不同濃度成一定的比例，獲得定標(biāo)曲線，從曲線上可計(jì)算出未知樣本 中分析物的濃度。如檢測(cè)HbAlc使用的是免疫競(jìng)爭(zhēng)法。當(dāng)檢測(cè)緩沖液與加入了溶 血緩沖液后的全血混勻時(shí)，熒光標(biāo)記的抗HbAlc抗體與血樣中的HbAlc結(jié)合，然 后當(dāng)該樣本混合液加入到檢測(cè)板的加樣孔后， 樣本中的HbAlc和固定在檢測(cè)板上

22、的糖化血紅蛋白則會(huì)與檢測(cè)抗體（熒光標(biāo)記抗體）競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合，反應(yīng)平衡后， 樣本中的HbAlc越多，固定在檢測(cè)板上的糖化血紅蛋白與熒光標(biāo)記抗體結(jié)合的機(jī)HbAlc的量成反比。會(huì)就越少，最后讀出檢測(cè)板所示熒光強(qiáng)度。熒光信號(hào)強(qiáng)弱與儀器部有兩個(gè)光學(xué)系統(tǒng)。熒光檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)HbAlc濃度；另一個(gè)光學(xué)系統(tǒng)檢測(cè)總 血紅蛋白濃度。儀器將這兩個(gè)參數(shù)轉(zhuǎn)換為比值（）顯示在屏幕上，就是HbAlc的相對(duì)濃度（占總Hb的比率）。測(cè)定HbAlc的檢測(cè)板含有一個(gè)固化了 HbAlc的 檢測(cè)線和一個(gè)固化了抗生物素蛋白的質(zhì)控線 （見圖19-5）。1|F .1VK1II f I：W'4心窒iiEiii詼時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定的基本原

23、理是以鑭系元素銪（Eu）獒合物作熒光標(biāo)記物，利用這類熒光物質(zhì)有長熒光壽命的特點(diǎn)， 延長熒光測(cè)量時(shí)間，待短壽明的 自然本底熒光完全衰退后再進(jìn)行測(cè)定，所得信號(hào)完全為長壽命的鑭系獒合物的熒 光，從而有效地消除了非特異性本底熒光的干擾。 另外在反應(yīng)體系中加入增強(qiáng)液， 使熒光信號(hào)增強(qiáng)，有利于熒光測(cè)量。葡萄糖酶電極傳感器相關(guān)的POCT儀器檢測(cè)原理及注意事項(xiàng)電化學(xué)酶?jìng)鞲衅鞣ㄎ⒘垦焖傺菧y(cè)試儀，采用生物傳感器原理將生物敏 感元件酶同物理或化學(xué)換能器相結(jié)合， 對(duì)所測(cè)定對(duì)象作出精確定量反應(yīng)，并借助 現(xiàn)代電子技術(shù)將所測(cè)得信號(hào)以直觀數(shù)字形式輸出的一類新型分析裝置，即采用酶法葡萄糖分析技術(shù)、并結(jié)合絲網(wǎng)印刷和微電子技術(shù)

24、制作的電極， 以及智能化儀器 的讀出裝置，組合成微型化的血糖分析儀。根據(jù)所用酶的不同，此類儀器可以分 為采用葡萄糖脫氫酶和采用葡萄糖氧化酶技術(shù)的兩大類。酶電極的組成（葡萄糖氧化酶電極為例）包括印刷電極、電極底片、葡萄糖氧化酶及固定保護(hù)層。電極 的測(cè)試原理為：在印刷電極的兩端施加一定的恒定電壓， 當(dāng)被測(cè)血樣滴在電極的 測(cè)試區(qū)后，電極上的固定的葡萄糖氧化酶與血中的葡萄糖發(fā)生酶反應(yīng)，經(jīng)過一定的滯后期（約20秒后），酶電極的響應(yīng)電流與被測(cè)血樣中的葡萄糖濃度呈線性 關(guān)系。血糖儀就是根據(jù)這一關(guān)系來計(jì)算并顯示血標(biāo)本中的葡萄糖濃度值的。羅氏優(yōu)越血糖儀所用的ADVANTAGE可吸血試紙條利用了葡萄糖脫氫酶 法的

25、原理和鈀電極的技術(shù)，并設(shè)置了密碼牌，自動(dòng)校準(zhǔn)血糖儀和試紙。試紙條結(jié) 構(gòu)包括聚酯薄膜頂膜、底膜，標(biāo)本采集區(qū)，試劑區(qū)、鈀電極等。測(cè)試時(shí)，先插入 試紙，滴血在血糖儀以外的試紙端上，滴血后自動(dòng)起反應(yīng)計(jì)時(shí)，不必抹去血滴， 再次插入試紙，反應(yīng)產(chǎn)生的電流轉(zhuǎn)換為血糖濃度數(shù)字而顯示在屏幕上。由于采用葡萄糖脫氫酶法，反應(yīng)過程中不需氧直接參與反應(yīng)，消除了血氧分壓產(chǎn)生的偏差。試捌區(qū)城（會(huì)葡萄糠脫貓）固1?-®羅氏*OV*NTA（；E 優(yōu)趙可鶴血試毀盤辭圖采用采用葡萄氧化酶生物傳感器技術(shù)的也有不少，ON曰OUCH雖生穩(wěn)豪血糖儀是比較具有代表性的一種。其試紙工作原理為：使用一種被稱為計(jì)時(shí)安培電流法的電化學(xué)技術(shù)來

26、測(cè)定病人血樣中的葡萄糖濃度。當(dāng)血樣到達(dá)試紙的頂端時(shí)，毛細(xì)管作用把血樣吸入到試紙的反應(yīng)區(qū)。 在反應(yīng)區(qū)，酶（葡萄糖氧化酶）和血液中的葡萄糖進(jìn)行反應(yīng)，從而使電子從葡萄糖流向化學(xué)中間體。 施加在試紙上的電壓促使電子從化學(xué)中間體流向電極。 血糖儀通過電極來測(cè)量電子的流量（電流），并將其轉(zhuǎn)換成一個(gè)電信號(hào)，最后將該電信號(hào)換算成相應(yīng)的血糖濃度。注意事項(xiàng)：血糖儀使用不當(dāng)是最常見的問題。血糖儀使用的是樣品是末梢全血，中心實(shí)驗(yàn)室使用的是血漿或血清， 故應(yīng)注意結(jié)果的換算及調(diào)整。干擾物質(zhì)的存在也會(huì)對(duì)結(jié)果造成影響。為保證結(jié)果的準(zhǔn)確，應(yīng)進(jìn)行及時(shí)校準(zhǔn)和常規(guī)質(zhì)控。由于受到多種因素的影響，到目前為止，快速血糖儀測(cè)量血糖只適合日常

27、監(jiān)測(cè)，而不能作為準(zhǔn)確診斷糖尿病的工具。426熒光傳感器相關(guān)的POCT儀器工作原理和基本結(jié)構(gòu)儀器的基本結(jié)構(gòu)包括電源開關(guān)、電池、顯示屏、置打印機(jī)、鍵盤、測(cè)量室（室多為一些LEDs和光源等）、條形碼閱讀器、數(shù)據(jù)傳輸系統(tǒng)、數(shù)據(jù)存儲(chǔ)系統(tǒng)、一次性測(cè)試片（測(cè)試片上多帶有樣本感應(yīng)器或限流閥以及樣本注入口等），為保證結(jié)果準(zhǔn)確，儀器還配備定標(biāo)氣體及大氣壓測(cè)量裝置等。OPTI CCA血?dú)夥治鰞x的檢測(cè)技術(shù)包括光學(xué)熒光法和光學(xué)吸收反射法， 運(yùn)用了固態(tài)一次性的熒光傳感器 測(cè)試卡熒光傳感器測(cè)試卡結(jié)構(gòu)示意圖p02傳感器電極工作原理示意圖以p02的檢測(cè)為例。OPTI CCA測(cè)試片里面的p02傳感器電極具有兩個(gè)功 能。第一，測(cè)量氧氣的壓力，第二，可用來對(duì)總血紅蛋白（tHb）和氧的飽和度（S02進(jìn)行分析。因此一個(gè)樣品可在同一個(gè)傳感器上測(cè)量三個(gè)參數(shù)。p02光極測(cè)量原理是基于熒光突衰，熒光與 p02的量化關(guān)系可以用Stern-Volmer方程來 表示為：IO/l=1+kP，其中10為激發(fā)光的強(qiáng)度，