1、目錄摘要.1英文搞要.21. 前言.32. 材料與儀器.42.1藥材.42.2儀器.43. 健脾消積口服液研究方法設計.53.1藥材制備及設定評價標準.53.2對健脾消積口服液有影響的各單因素考察.63.3正交設計研究健脾消積口服液的工藝.104. 健脾消積口服液質量標準初步研究.135. 討論.16結論.19參考文獻.20致謝.22健脾消積口服液的研制摘要：目的 分析處方的的合理性與觀察理氣健脾湯臨床治療功能性消化不良患者療效和安全性方法：利用百度查找處方的作用，再取體質量適合的一定數量的小白鼠隨機分分組。結果：健脾消積口服液對利血平所致的“脾虛”癥狀有明顯的改善作用。結論：健脾消積口服液(

2、1ml含生藥量1g)具有健脾助運、消食化積之功效,關鍵詞：消化不良；中醫藥療法；理氣健脾湯doi：103969jissn10038914201009074 文章編號：10038914(2010)一09144502Clinical rvation on Efect of Jianpi Xiaoji Oral Liquid ineating 40 Patients、vitlI Hepatocarcinoma Stage、llIfor Supplementary II'ealment HUANG Zhifen，LI Han-zhong，SHI Zhiyan，et al Department

3、ofTraditional Chineseand Western Medicine，Tumor Hospital，Guangxi Medical University，Nanning(580021)objectiveTo study the clinical effect of Jianpi Xiaoji Oral Liquid(JXOL)in treating patients with latestage hepatocarcinoma for supplementary treatmentM ethods：Seventyfive patients were randomly divide

4、d intothe treated group(40 patients)and the control group(35 patients)Both groups received the same westernmedical treatment，including the supporting therapy and analgesia，to the treated group JXOL was addedTheshortterm effect，quality of life，changes of TCM Syndrome and immunologic criteria were obs

5、ervedResults：The complete remission(CR)rate in the treated group and the control group was 5 and 0 respectivelystablerate was 625 and 371 respectively，quality of lire：iiaproving rate was 475 and 257 ，TCM Syndrome improving rate was 80 and 543 respectivelythere was significant difference in co-nparis

6、on of thetwo groups(P<0。01)Tlymphocyte subset were not different significantly in the two groups before treatment(P>005)After treatment，the criteria(CD3，CD4，CD4CDs ratio)，except CDs，improued significantly inthe treated group(P<005 or P<001)and were better than those in the control group(

7、P<005 or P<001)Conclusion：JXOL could raise guality of life of hepatocarcinoma patients in the late stage，prolong theirsurvival time and elevate their cellular immunityKey words Jianpi Xiaoji Oral Liquid，hepatocarcinorna of stage 11，III，quality of life，T-lym phocyte subsets一 前 言健脾消積口服液（1 ml含生藥量

8、1 g）具有健脾助運、消食化積之功效，主治小兒“脾虛”消化不良；長時期見食不貪、食欲不振、厭惡進食、食量減少為特；同時也可以治療小兒厭大腸癌(colorectal cancer，CRC)：小兒厭大腸癌(是我國常見的消化道腫瘤之一。其發病率居惡性腫瘤的第4位，患者平均5 a生存率為2025E 。化療是晚期大腸癌治療的主要手段但其毒性反應往往影響化療的如期執行，嚴重者導致死亡。我們根據晚期大腸癌患者正虛邪實的特點，采用自擬益氣消積方配合化療治療本病，取得一定療效。二材料與儀器2.1 藥材黨參3 茯苓3 炒麥芽3 白扁豆2 炒山楂2白術2 萊孚子2 雞內金2 甘草1 水仙子1陳皮0.6 砂仁0.6

9、以上處方量以kg計 2.2 儀器MDF一3sZE 超低溫冰箱( 日本SANY00 ); 電子、小白鼠、酒精三健脾消積口服液研究方法設計3.1 藥材制備及設定評價標準健脾消積口服液藥材提取物的制備把所用到的藥材加水浸過液面，浸泡1小時提取，每次煮沸1小時（3次）冷卻合并濾液濃縮至10000水調含至80%酒精（用95%調）放冰箱，調ph8(用40%的NaOH)，放置過夜過濾回收酒精加新鮮蒸餾水到40000加防腐劑(0.01-0.03%)，白砂糖分裝 每支10ml_滅菌（100度流通蒸汽）包裝口服液質量評價健脾消積口服液（1 ml含生藥量1 g）具有健脾助運、消食化積之功效，主治小兒“脾虛”消化不良

10、。為證實本品的藥理作用，本文對該藥進行了藥效學實驗研究。 一 方法與結果 二 對胃功能的影響 三 對小白鼠胃排空的影響 取體質量2022 g小白鼠60只，雌雄兼用，實驗前禁食12 h，自由飲水。隨機分為5組，每組12只，前3組分別灌服健脾消積口服液40、20及10 g/kg，陽性對照組灌服15%香砂養胃丸6 g/kg，空白對照組灌服等容量的蒸餾水0.4 ml/10 g。給藥50 min后，各組分別灌服0.1甲基橙溶液0.1 ml/10 g，20 min脫臼處死小白鼠，剖腹摘取胃置于小燒杯里，加入10 ml蒸餾水，用小剪刀沿胃大彎剪開胃，將胃內容物充分洗于蒸餾水中，用5碳酸氫鈉溶液調節pH值至6

11、.06.5，倒入刻度離心管，以2000 r/min離心10 min，取上清液用722 s分光光度計，用蒸餾水調零，測量溶液的光密度為胃中甲基橙光密度。再取0.1甲基橙0.2 ml加入10 ml蒸餾水搖勻后測量其光密度作為基數甲基橙光密度，并按下列公式計算甲基橙胃殘留率。3.2 對健脾消積口服液有影響的各單因素考察 (3) 正交表安排試驗，見表1。按表1設計的工藝條件，以處方比例稱取藥材總量200 g投料，煎煮提取。合并煎液，濃縮至1000表1 因素水平表22 考察指標的確定水提液中總固體物的多少多糖、黃酮類成分，且為主要的藥理活性成分，故以總固體物、總多

12、糖、總黃酮含量作為考察指標。2、21 總固體物的測定：將煎煮所得1000 ml水提的蒸發皿中，水浴蒸干后置烘箱中105烘干至恒重，取出冷卻后稱重，計算總固體物含量。22、2 總多糖的測定u J：準確稱取葡葡糖約20 mg，于250 ml容量瓶中定容，分別吸取04、06、08、10、12、14、16、18 ml，各加水補至2 ml，加入6 苯酚1 ml，搖勻，加入5 ml濃硫酸，搖勻，室溫放置20rain，于490 nin處測吸收度，以20 ml水按同樣顯色操作為空白，橫坐標為

13、多糖 數，縱坐標為吸收度值，作回歸方程，得標準曲線。精密吸取樣品液表2 正交試驗結果· 90o · 中藥材第25卷第l2期2002年l2月維普資訊 表3 方差分析表2 ml，以中性氧化鋁2 g吸附，移入離心管中用80洗液，殘渣用沸水提取3次，每次5 ml，合并水提液置250 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密吸取O4 ml，顯色后測490 nln處吸收度，根據標準曲線確定多糖含量。223 總黃酮的測定 J：準確稱取蘆丁對照品5Omg，置

14、于250 ml容量瓶中，用60 乙醇定容，精密吸取對照品液1O、2O、3O、4O、50、60、70 ml，分別置于25 ml容量瓶中，分別加入5 亞硝酸鈉1O ml，混勻，放置6 min，然后加入1O硝酸鋁1O ml混勻，再放置6 min，加入1 molL氫氧化鈉溶液1OO ml，用60 乙醇稀釋至刻度，混勻，放置15 min。用顯色劑作空白，于504 nln處測吸收度。以吸收度為縱坐標對照品濃度為橫坐標繪標準曲線。精密吸取樣品液4 ml，加60 ml無水

15、乙醇成1O ml，振搖混勻，2500 rmin離心9 min，取上清液。精密吸取3 ml于25 ml量瓶中，按對照品方法顯色，于504 nln處測吸收度，以不顯色的樣品液為空白，依標準曲線求樣品中黃酮含量。3 結果由表2直觀分析可見：各指標受三個因素的影分析的結果具有一致性，其因素主次順序和最優方優方案則為C3A B3。實驗數據方差分析結果見表33】性意義(P>005)，而C因素的差異僅對總黃酮指標總多糖和總黃酮為處方藥材中的有效部位，藥理作力。總固體物中既含有效成分又有無效成分，其作工藝條件為C3A2Bl，

16、即加13倍水，煎煮三次，每次05 h。4 討論正交試驗結果顯示：煎煮時間越長，有效成分含高。這表明煎煮過程中制劑所含有效成分有一定損失。故煎煮時間不宜過長，而宜短時間、多次煎煮。其原因可能是有效成分受溫度的影響或是各化學成分之間的相互作用，有待進一步研究。表二：正式實驗結果 因素實驗號總固體總多醣總黃銅ABCD1111177.77676.722.25121222262.16952.452.93761333308.38766.493.26512123238.484 72.25 2.92982231318.77192.90 3.77972312180.28064.531.876

17、93133267.67880.22 3.03123213146.7753.661.4493321296.182 79.86 2.50863.3 正交設計健脾消積口服液研究的工藝消食口服液中的黃芪、白術、甘草進行定性鑒別：1. 含量測定2. 總多糖的測定3. 標準品溶液的制備：精密稱取105 oC干燥至恒重的葡萄糖20.6 mg，加水溶解并定容在250 ml容量瓶中，搖勻即得 312 供試品溶液的制備：精密吸取樣品液20 ml于10 ml離心管中，以中性氧化鋁2 g吸附，用80 乙醇洗滌4次，每次8 ml，離心10 

18、rain，棄去洗液，殘渣用沸水提取5次，每次5 ml，合并水提液置250 ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻即得。 313 標準曲線的制備：精密吸取標準品溶液00，02，04，06，08，10，12，14 ml，置20 ml試管中，分別加水補至20 ml，再分別加人6 苯酚14 ml，搖勻，等充分混合后，再迅速滴加濃硫酸55 ml，搖勻，室溫放置30 rnin，于紫外分光光度計在490 1-1111處測吸收度，以標準品溶液加人體積為橫坐中藥材第27卷第1 1期2004年1 1月。

19、線的回歸方程為：A =05405V 一00167(r=09994)。4. 重現性試驗：分別吸取標準品溶液10 ml5份于試管中，同前操作，結果RSD=278 。5. 樣品含量測定：取同一批樣品，同法制備供試品溶液5份，吸取04 m1分別置于20 ml試管中，按標準曲線的制備項下“分別加水補至20 ml”起操作，測其吸收度，再根據回歸方程求得總多糖的百分含量，結果見表1 樣品中總多糖含量測定結果6.  加樣回收率試驗：精密吸取已知葡萄糖含量的樣品液20 ml，分別加人不同量的葡萄糖，以下按供試品溶

20、液的制備和樣品含量測定項下操作(n= 5)，結果平均回收率為9517 ，RSD=226 。7.  總黃酮的測定8. 標準品溶液的制備：精密稱取105 干燥至恒重的蘆丁對照品3986 mg于200 ml容量瓶中，加60 乙醇適量水浴上微熱溶解，再加60 乙醇至刻度，搖勻即得。9. 供試品溶液的制備：精密吸取樣品液20ml于10 ml容量瓶中，加無水乙醇至刻度，邊加邊振搖，等沉淀完全后，移至10 ml離心管中，離心10rain，取上清液即得。10. 標準曲線的制備：精密吸取標準品溶液00，

21、10，20，30，40，50，60，70 ml于25 ml容量瓶中，分別加人5 亞硝酸鈉10 ml，混勻，放置6rain，然后加人10 硝酸鋁10 ml，混勻，再放置6rain，加入1 molL氫氧化鈉溶液100 ml，用60 乙醇稀釋至刻度，混勻，放置15 rain，于510 Flnl處測吸收度，以標準品溶液加人體積為橫坐標，吸收度為縱坐標繪制標準曲線，并求得標準曲線的回收方程為：維普資訊 A=0100357V一000757l(r=09999)。11. 重現性試驗：分別吸取

22、對照品溶液30 ml5份置25 n l量瓶中，同前操作，結果RSD =0623 。12. 樣品含量測定：取同一批樣品，同法制備供試品液5份，精密吸取40 ml于25 ml容量瓶中，按標準品方法顯色，于510 nrn處測吸收度，再根據回歸方程求得總黃酮的百分含量，結果見表2。表2 樣品中總黃酮含量測定結果13. 加樣回收率試驗：精密吸取已知黃酮含量的樣品液20 ml，分別加入不同量的蘆丁對照品，以考證下按供試品溶液的制備和樣品含量測定項下操作(n=5)，結果平均回收率為98046 ，RS

23、D =216 四健脾消食口服液質量標準初步研究1 材料與方法11 材料消食口服液由武漢市某保健品有限公司提供產品批號20000111，規格250 ml瓶。產品原料主要為雞內金、麥芽、神曲、黨參、黃芪、谷芽、陳皮、自術、厚樸、山楂、黃苓、黃蓮、炒枳殼、甘草、木通等中藥材。12 試驗動物 昆明種小鼠，體重18 22 g，由湖北省醫學實驗動物中心提供，批準號為鄂動醫管字第19一OO7號。Wistar大鼠，體重8O 100 g，由湖北省醫學實驗動物中心提供，批準號為鄂動醫管字第19一OO8號。

24、13 樣品處理 受試物直接供急性毒性試驗、精子畸形試驗、微核試驗、3O天喂養試驗等灌胃使用。14 檢測儀器 血細胞分析儀、sABA一18全自動生化分析儀。15 方法 151 急性毒性實驗 用體重18 22 g的小白鼠2O只，雌雄各半。按15 mlkg體重(O15 ml10 g體重)經口灌胃小鼠，灌胃前停食16小時，連續觀察1周，并記錄動物中毒癥狀及死亡情況。 152 骨髓嗜染紅細胞微核實驗選用昆明種小鼠體重2428 g，雌雄各35只。動物按體重隨機分成7組

25、A 組為陰性對照組，G 組為環磷酰胺陽性對照組，B、c、D、E、F組為試驗組。動物經口灌胃兩次，間隔24小時，于第2次灌胃6小時后處死動物，取胸骨骨髓涂片，Giemsa染色閱片。每只動物油鏡下觀察1 000個嗜多染紅細胞，并記錄微核形成率。 153 精子畸形試驗選用昆明種雄性小鼠，體重25 30g共3O只。動物按體重隨機分成5組，A 組為陰性對照組E組為環磷酰胺陽性對照組B、C、D組為受試物試驗組。動物經口連續灌胃5天后，再繼續喂養3O天，處死動物，取兩側副睪涂片，伊紅染色。每只動物高倍鏡下觀察1 000個精子記錄畸形精子數

26、。 154 Ames試驗 采用經鑒定符合生物學要求的鼠傷寒作者單位：430079 武漢湖北省衛生廳衛生監督局(尹章漢)；湖北省疾病預防控制中心(許四元、樊柏林、蔚茂)沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株進行試驗；采用多氯聯苯(PCB)誘導的大鼠肝勻漿作為體外活化系統(+S9)。受試物分為3個劑量組，每皿加入量為05 ml。同時設置空白及陽性對照組。采用平板摻入法記錄二次重復的平行樣品結果。 155 30天喂養試驗選用動物Wistar大鼠，體重8O100 g，雌雄各半，共8O只。隨機分為4組，即受試物低

27、、中、高劑量組和空白陰性對照組；受試物采用經口灌胃，高劑量組分1日多次灌胃，對照組同時給予等量蒸餾水，連續灌胃3O天，然后觀察一般臨床癥狀，記錄并計算體重和食物利用率，測定血液常規及血液生化指標，同時進行大體解剖檢查，并對心、肝、脾、肺、腎等主要器官進行病理學檢查，記錄并計算臟器稱重和臟器系數。 156 統計方法采用 及ttest。2 結果21 急性毒性實驗經1周觀察，兩種性別的老鼠無死亡，均未出現任何中毒癥狀LD。>15 mikg體重。按急性毒性分級該受試物屬無毒級類物質。22 微核實驗結果見表1。表1 消食口服液微

28、核試驗結果 ±刪 旒， 觀 效 微 率由表1可見各實驗組與陰性對照組結果比較，差異無顯著性；表明該受試物骨髓微核試驗結果為陰性。23 精子畸形試驗結果見表2。表2 消食口服液小鼠精子畸形率結果 -+-s維普資訊 湖北預防醫學雜志2003年第14卷第6期由表2可見各實驗組與陰性對照組結果比較，差異無 顯著性，表明該受試物精子畸形試驗結果為陰性。五討論5.1正交試驗結果顯示：煎煮時間越長，有效成分含量越低；煎煮次數越多，水提液中有效成分含量越量越低；煎煮次數越多，水提液中有效成分

29、含量越高。這表明煎煮過程中制劑所含有效成分有一定損高。這表明煎煮過程中制劑所含有效成分有一定損失。故煎煮時間不宜過長，而宜短時間、多次煎煮。其原因可能是有效成分受溫度的影響或是各化學成分之間的相互作用，有待進一步研究。 基質種類選擇當聚乙二醉(PEG)的分子量大于1000時，呈固態，PEG4000與PEG6000的熔點分別為4853和5560，其本身無生理作用，化學穩定性好，易溶于水，可用以從中釋放水溶性或油性藥物，對藥物有助溶作用，同時還能吸附部分液體，是目前較為理想的一類水溶性基質。PEG6000是常用的水溶性固態基質，因其熔點低，極易與藥物熔融成固體分散體，故適于藥物的溶解、熔融、滴制和

30、成形。PEG6000還可使整個工藝簡化，產品質量和藥效得以優化。在考察基質種類時，大量的文獻都是研究PEG4000、PEG6000或兩者的混合物對滴丸的影響。但對于葛根芩連滴丸，上述研究方向都會出現一個問題，就是會有一個較明顯的小孔存在，而且在滴丸表面會有大量的裂紋狀紋路。這會使得無法搽干凈小孔里面的硅油，而且裂紋狀紋路會使滴丸在一天以后裂碎成數塊碎片。嚴重地影響了滴丸的質量，以及阻礙了葛根芩連滴丸的發展。以PEG4000和PEG6000的混合物為基質，可向其中加入吐溫80、司班80等乳化劑，加入后，滴丸小孔消失，裂紋狀紋路也消失，但滴丸呈現不規則形狀，稍壓即扁，易于互相粘連；也可向其中加入少

31、量水，隨著水含量的增加，滴丸小孔逐漸變小變淺，碎裂期也逐漸延后，但當水量過多時，滴丸硬度下降，形狀開始變得不規則，表面開始粘連，對加水量難以把握及控制；而當向其中加入少量的PEG400時，裂紋狀紋路消失，小孔變淺，是目前所得滴丸效果最好的一個，但PEG400是液體，加入后硬度會有所下降，因此，就以PEG400與PEG6000的混合物為基質，適當增加PEG6000的含量。5.2 不同滴丸間的比較為了考察自制滴丸與市售滴丸之間的差別，特從市場上購回一丹參滴丸進行考察，所得結果如表所示。由表可見，兩滴丸的硬度差別不大，丹參滴丸由于早已批量生產，技術及儀器或其他方面較成熟，圓整度較好；但也因其為大批量

32、生產，相對于科研的少量制備，對每粒滴丸重量的控制不及后者，故丹參滴丸的丸重變異系數較大；丹參滴丸的平均丸重較小，所以其溶散時限較小。從總體觀察，自制葛根芩連滴丸與市售丹參滴丸的差別不大，可達到生產要求。表11 兩批滴丸外觀質量檢查批次圓整度平均丸重（mg）丸重變異系數溶散時限（min）硬度葛根芩連滴丸9.3331.56.72.5丹參滴丸9.6272.65.12.65.3 TLC鑒定中提取方法的確定2005版藥典葛根芩連片中有關葛根及黃連項下提取方法并不適合滴丸中相關成分的提取，PEG400的水溶性及脂溶性均較好，極易溶于水和甲醇中，所得的供試品很粘稠，展開距離變短，各成分難以分開。因此，得另行

33、選擇提取方法。藥典中對葛根使用乙酸乙酯超聲提取，但在現實操作中，此方法得到的供試品葛根素含量很低，斑點亮度不明顯，改用甲醇提雜質較多。參考其他文獻后確定了項的提取方法。根據鹽酸小檗堿不溶于水的性質，可向水中加入適量的鹽酸，并分離沉淀物，用含氨水的甲醇再次溶解。如此就可把PEG400溶于水中過濾棄去，很大程度上地減少了雜質的干擾，有利于薄層鑒定。而對于黃芩苷的提取，藥典上使用乙酸乙酯超聲提取，且PEG400等基本不溶于乙酸乙酯，因此提取液中雜質含量低，所得到的供試品展開效果較好。5.4 存在問題與解決方法 就目前最優工藝所制備的滴丸，因使用了液態基質PEG400，且結合南方潮濕的天氣，使滴丸暴露在空氣中時極易吸潮，不利于滴丸的生產、