1、.生產(chǎn)潔凈室（區(qū)）沉降菌測試操作規(guī)程一、X圍：本標準規(guī)定了生產(chǎn)潔凈室（區(qū)）中沉降菌測試條件測試方法；適用于本公司生產(chǎn)潔凈室（區(qū)）的沉降菌的測定和環(huán)境的驗證。二、引用標準：GB/T-16293-1996 藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)X（1998年修訂）附錄。三、質(zhì)量指標：潔凈度級別微生物最大允許數(shù)沉降菌/皿300,00015四、測試方法：1、方法概述本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈室。2、所用的儀器和設(shè)備使用時應(yīng)嚴格按照儀器說明

2、書操作。2.2恒溫培養(yǎng)箱必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計進行檢定。 2.3 培養(yǎng)皿普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或其他藥典認可的培養(yǎng)基，基配制方法見附錄（標準的附錄）。3、測試步驟3.1采樣方法將已制備的培養(yǎng)皿按4.1.2的要求放置,打開培養(yǎng)皿,使培養(yǎng)表面暴露0.5h,再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置.3.2 培養(yǎng)3.2.1 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3.2.2 在30-35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48h。3.2.3 每批培養(yǎng)應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照養(yǎng)。33 菌落計數(shù)331用肉眼直接計數(shù)，標記或在菌落計數(shù)器上點然后用5-10倍放大鏡檢查，有否遺漏。332若培養(yǎng)皿

3、上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨是仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。4、注意事項 41測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。42采取一切措施防止人為對樣本的污染。43 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。44 由于細菌種類繁多，判別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落并髯注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要進用顯微鏡鑒別。45 采樣前應(yīng)仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。五、測試規(guī)則1、測試狀態(tài) 11沉降菌測試前，被測試潔凈室（區(qū)）的溫間斷度須達到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。12

4、沉降菌測試前，被測潔凈室（區(qū)）已經(jīng)過消毒。13 測試狀態(tài)和靜態(tài)兩種，測試瘃態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測度狀態(tài)。2、測試人員21 測度人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈級別的工作服。22 靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于二人。3、測試時間31 對單向流，如100級凈化房間及層注工作臺，測試應(yīng)在凈化系統(tǒng)運行不少于10min后開始。32 對顯而易見單向流，如10000級以上的凈化空間。測試應(yīng)在凈化空調(diào)正常運行不少于30min后開始。4、沉降菌計數(shù)41411采樣點數(shù)目及其布置 沉隆重法的最少采樣點數(shù)可按表1確定表1最少采樣點數(shù)目面積m3潔凈度級別(3000000)10102020-4040100

5、2222注:表中的面積,對于單向流潔室,是指送風(fēng)面積;對于非單向流潔凈室是指房間的面積。在滿足最少測點數(shù)的同時,還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù),見表2.表2最少培養(yǎng)皿數(shù)潔凈度級別所需90mm培養(yǎng)皿數(shù)(以沉降0.5h計)3000 00014.1.2 采樣點的布置 采樣點的位置可以同懸浮粒子測試點.a) 工作區(qū)采樣點的位置離地0.8m-1.5m左右(略高于工作面)b) 可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動X圍處增加采樣采樣點位置的詳細規(guī)則見附錄二5、記錄測試報告中應(yīng)記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態(tài)。測試報告的編寫見附錄三6、結(jié)果計算 61用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。 62平均菌落數(shù)的計算，見式（1） M1

6、+M2+Mn平均菌落數(shù)M=- (1)n 式中： M-平均菌落數(shù)； M11號培養(yǎng)皿菌落數(shù)； M22號培養(yǎng)皿菌落數(shù) MN- n號培養(yǎng)皿總數(shù)7、結(jié)果評定 用平均菌落數(shù)判斷潔凈室（區(qū)）空氣中的微生物。 71潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所遷還定期的評定標準。 72若某潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)超過評定標準，則必須對此區(qū)域先進行消毒，然后重新采樣兩次，測試結(jié)果均須合格。附錄三 沉降菌測度報告編號 測試單位測試依據(jù) 測試狀態(tài) 環(huán)境溫度 相對濕度 % 靜壓差 Pa培養(yǎng)基批號 培養(yǎng)溫度 檢測日期 報告日期 平皿菌落群區(qū)域1234平均數(shù)級別備注評定標準 結(jié)論檢驗者 復(fù)核者附錄一 培養(yǎng)基的準備及滅菌 1、培養(yǎng)基的準備 培養(yǎng)基可以外購或自行配制。自行配制方法見YY/T 0188.6-1995第6章無菌檢查部分中關(guān)于此類培養(yǎng)基的配方和操作步驟。 其它符合藥典靈敏度要求的培養(yǎng)基可以自行配制。 2、培養(yǎng)基平皿的制備 21 將90mm的培養(yǎng)皿置于121濕熱滅菌20min或180干熱滅菌2h.。 2.2 將培養(yǎng)基加熱溶化,冷至45時,在無菌操作要求下,將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿,每皿約15ml 2.3 待瓊脂凝固后,將培養(yǎng)基平皿倒置于30-35恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h,若培養(yǎng)基平思上確無菌落生