1、丹參酮IIA對大鼠肺缺血再灌注損傷細胞凋亡及相關蛋白表達的影響         10-02-04 11:06:00     作者：朱春霞，白育庭    編輯：studa20【摘要】  目的 研究丹參酮IIA對大鼠肺缺血再灌注損傷過程中細胞凋亡以及相關蛋白表達的干預作用。方法 健康SD大鼠60只隨機分成四組，除對照組外，均建立肺缺血再灌注模型，其中兩組分別加丹參酮IIA和生理鹽水干預，檢測肺組織濕/干重比、細胞凋亡率、Bcl2及

2、Caspase3的表達等指標。結果 肺缺血再灌注組與對照組相比，肺組織濕/干重比明顯增高，流式細胞儀檢測出現大量的凋亡細胞，證明該模型制備是成功的;肺缺血再灌注組顯示有統計學意義的凋亡，Bcl2降低和Caspase3增高與對照組比較有統計學意義;丹參酮組與未干預組和生理鹽水組比較，Bcl2增高和Caspase3降低均有統計學意義。結論 丹參酮能夠改善由肺缺血再灌注引起的細胞凋亡，其機制可能與丹參酮能干預肺組織Bcl2和Caspase3蛋白的表達有關。 【關鍵詞】  肺;缺血再灌注;凋亡;Bcl2;Caspase3;丹參酮ABSTRACT：Objective To investigat

3、e the effects of Tanshinone on apoptosis and the related proteins during lung ischemia reperfusion injury(LIRI) of rats.Methods Sixty rats were randomly divided into four groups.Apoptotic cells in lung tissue was inspected by flow cytometry and Hematoxylin and Eosin staining,and the expression of Bc

4、l2 and caspase3 was detected by RTPCR and western blot.Results Compared with normal control group,apoptotic cells and the expression of Bcl2 and Caspase3 in LIRI model group were markedly increased(P<0.01).Compared with model group,tanshinone could significantly inhibite cell apoptosis and the ex

5、pression of apoptosisrelated proteins in lung tissues(P<0.05).Conclusion Tanshinone can protect lung from ischemia reperfusion injury by modulating the expression of apoptosisrelated proteins Bcl2 and Caspase3.KEY WORDS:Lung;Ischemia referfysion injury;Apoptosis;Bcl2;Caspase3;Tanshinone肺缺血再灌注損傷(l

6、ung ischemia reperfusion injury，LIRI)過程中細胞凋亡過度是導致肺損傷的重要原因之一，凋亡作為LIRI的早期事件，參與了LIRI的病理生理過程1,2。丹參酮IIA因其具有毒副作用小、“多靶效應”等特點而廣泛應用于臨床，尤其在防治缺血再灌注(ischemia reperfusion，IR)損傷方面，具有明顯的保護作用3。本實驗首先建立大鼠肺IR模型，然后觀察丹參酮IIA對LIRI后肺組織Bcl2、Caspase3表達和細胞凋亡的影響，探討丹參酮IIA對LIRI中細胞凋亡的保護作用及其可能機制。1 材料與方法1.1 實驗動物分組成年雄性健康SD大鼠(湖北省實驗動物

7、中心提供)60只，體質量300±25g。隨機分為正常對照組(A組，n=6)，除不作缺血處理外，余同其它組;肺缺血再灌注組(B組，n=18);缺血再灌注加生理鹽水組(C組，n=18)，腹腔注射生理鹽水，缺血1h，再灌3h;肺缺血再灌注加丹參酮組(D組，n=18)，腹腔注射丹參酮，劑量為15mg/kg,缺血1h，再灌3h。B、C、D每組又分為三個亞組，再灌時間分別為1h、2h、3h，每個亞組6只大鼠。1.2 大鼠肺缺血再灌注模型的建立實驗模型的制備采用Eppinger方法，參考Sekido等模型4。取健康SD大鼠，20%水合氯醛(300350)mg/kg腹腔注射麻醉后，仰臥位固定。行頸部

8、正中切口，分離出氣管、右側頸靜脈和頸動脈，氣管切開、插管，接動物呼吸機行機械通氣(吸入室內空氣，呼吸頻率40次，潮氣量10ml/kg，吸呼比為12)，右側頸靜脈插管、固定，接微量注射泵;然后經左側第5肋間開胸，游離左肺門，靜脈注射肝素100U。靜息5min后，于呼氣末用無創血管夾阻斷左主支氣管、左肺動脈和左肺靜脈。1h后開放，進行再灌注1h、2h、3h。1.3 標本制備及檢測指標在缺血和再灌注的不同時間點取左肺組織，立即凍存于液氮中備用。自液氮中取出組織樣品，檢測肺組織濕/干重比、細胞凋亡率、Bcl2及Caspase3的表達等指標。肺組織細胞凋亡率用流式細胞儀檢測;Bcl2的表達采用Weste

9、rn Blot方法檢測(武漢晶美Western Blot試劑盒);Caspase3的表達采用PCR方法檢測。1.4 統計學分析實驗數據以均數±標準差記錄，采用SPSS13.0統計軟件包行單因素方差分析，以P<0.05為差異有統計學意義。2 結 果2.1 各組肺組織W/D與A組比較，B組W/D在1h亞組即有升高，2h達到高峰，第3h組下降;與B組比較，C組沒有統計學意義的差異;與B、C組比較，D組W/D的表達下降，差異具有統計學意義(P<0.01);與A組比較，D組沒有統計學意義的差異。(表1)表1 各組大鼠肺組織W/D比較與A組比較,*P<0.01;與D組比較,P<0.012.2 肺組織細胞凋亡率流式細胞儀檢測結果B、C組2h肺組織細胞凋亡率分別為30.5%±2.3%、35.0%±7.7%，3h肺組織細胞凋亡率分別為22.1%±1.2%、20.3%±1.3%，其余