1、下載可編輯異煙肼含量測定分析方法驗證方案驗證原因 ：驗證類型 ：新項目驗證預驗證再驗證回顧性驗證其它轉移驗證方法描述 ：本分析方法為中國藥典2010 版二部方法 。 為確保其檢測結果準確 ，對該分析方法的專屬性 、精密度 （系統精密度 、方法精密度 、中間精密度 ）、線性和范圍 、準確度 、耐用性進行評價 。驗證依據 ：中國藥典 2010 年版分析方法 （295 頁）驗證時間 ：2010 年 07 月 09 日2010 年 07 月 10 日驗證項目組成員及職責 ：部門成員職責QC儀器設備的確認QC分析方法編寫QC分析測試QC數據評估質量部審核批準.專業 .整理 .下載可編輯.專業 .整理 .

2、下載可編輯驗證內容 :-序列號確認測試項目可接受標準1 儀器設備的確認01. 1高效液相色譜儀的確認符合儀器設備的確認要求01. 2天平的確認符合儀器設備的確認要求02具體測試內容異煙肼峰面積 RSD2.0%,02.1系統精密度保留時間 RSD2.0%。異配置 1 份異煙肼工作標準溶液 ，連續進針 6 次，記錄煙肼理論塔板數大于異煙肼峰面積 、保留時間 。4000 ，拖尾因子在 0.91.4 之間 。02.2方法精密度樣品含量的 RSD2.0%。平行配制同一批樣品的6 份樣品溶液 ，每份溶液進樣2 針，計算樣品含量及其相對標準偏差 。02.3線性和范圍R0.999以異煙肼工作標準品溶液的濃度為

3、100% ，配制20% 、60% 、 100% 、140% 、 180% 濃度的工作標準品溶液，每個濃度的標準品溶液進樣1 次，計算出回歸方程和相關系數R。02.4準確度該定量方法的回收率應為以異煙肼工作標準品溶液的濃度為100% ，取同一批98.0%102.0% 。樣品，配制濃度為80%、100% 和 120% 的樣品溶液各 3 份，每份進樣 2 針。計算其回收率 。.專業 .整理 .下載可編輯02.5耐用性理論塔板數大于 4000 ，配制異煙酸和異煙肼混合溶液，按下列條件改變方拖尾因子在 0.91.4 之間 ,法，穩定后按順序進樣 ，計算異煙肼的理論塔板數 ，分離度 R1.5，相對保留混合

4、溶液中異煙酸和異煙肼的相對保留時間 RRT。時間 RRT偏差絕對值不大改變流速為0.9ml/min和1.1ml/min 。于 20。a.b. 改變柱溫為 23 和 27。c.改變流動相緩沖液與甲醇配比為83:17 和 87:13 。d. 同一填料不同色譜柱 。3 程序及文件03.1液相色譜儀校正規程符合要求03.2液相色譜儀操作規程符合要求03.3分析天平校正規程符合要求03.4分析天平操作規程符合要求.專業 .整理 .下載可編輯驗證前準備 ：a) 人員培訓 ：培訓人姓名培訓時間培訓內容b) 儀器設備 、標準品和試劑 ：儀器設備儀器名稱型號編號校驗有效期高效液相色譜儀MODEL200標準品和試

5、劑名稱級別廠家批號.專業 .整理 .下載可編輯c) 樣品名稱廠家批號.專業 .整理 .下載可編輯驗證過程 ：色譜條件色譜條件色譜柱：agilentODS-2長度：250cm，內徑：4.6mm，填料 C18 ，填料粒度 ：5 m檢測波長 ： 262nm ，帶寬 30柱溫：25進樣量：20l流速：1.0ml/min流動相 A： 0.02mol/l 磷酸氫二鈉溶液 （用磷酸調 pH 至 6.0），流動相 B：甲醇A:B=85:15停止時間 ： 12min1. 系統精密度1.1.溶液配制系統精密度溶液 ：取異煙肼 10mg ，置 100ml 容量瓶中 ，精密稱量 ，用水溶解并稀釋至刻度。1.2 驗證過

6、程及結果系統精密度溶液連續進樣6 次，記錄其異煙肼峰面積 、保留時間 。可接受標準 ：異煙肼峰面積 RSD2.0%,保留時間 RSD2.0%。序號保留時間 (min)峰面積12.專業 .整理 .下載可編輯3456RSD%結論：2. 重現性試驗 （方法精密度 ）2.1.溶液配制對照溶液 ：取異煙肼工作標準品10mg ，精密稱量 ，置 100ml 容量瓶中 ，用水溶解并稀釋至刻度 。方法精密度溶液 ：取異煙肼樣品 10mg 置 100ml 容量瓶中 ，精密稱定 ，用水溶解并稀釋至刻度 。用此方法配置同一批號的樣品溶液6 份。2.2.驗證程序及結果工作標準品溶液進2 針，樣品溶液各進 2 針。記錄異

7、煙肼峰面積 ，計算樣品含量 。可接受標準 ：異煙肼含量的 RSD2.0%。樣品批號 ：稱樣量峰面積含量RSD（mg ）12平均值.專業 .整理 .下載可編輯結論：3. 線性和范圍3.1.溶液配制供試品溶液 ：取異煙肼 50mg ，置 100ml 容量瓶中 ，精密稱量 ，用水溶解并稀釋至刻度，混勻，即得。線性點溶液 ：精密移取 a 供試品溶液 5ml 、2ml 、1ml 、分別置 10ml 容量瓶中 ，用水稀釋至刻度 ，得到濃度約為 50ug/ml （ d 供試品溶液 ）、 100ug/ml （c 供試品溶.專業 .整理 .下載可編輯液）、 250ug/ml （b 供試品溶液 ）、 500ug/

8、ml（a 供試品溶液 ）的線性點溶液 ，再精密移取 1mlb 供試品溶液 1ml 置 100ml 容量瓶中 ，用水稀釋至刻度 ，得到濃度約為 2.5ug/ml （e 供試品溶液 ）。3.2.驗證程序及結果按色譜條件分別對線性點溶液進行分析，每個溶液進樣 1 次。以濃度為 X 軸，主峰峰面積平均值為 Y 軸，畫出線性圖 ，求出回歸方程 ，計算線性相關系數R。可接受標準 ：R0.999項目（X1）（X2）（X3）X4）（X5）線性點溶液濃度 (ug/ml)異煙肼峰面積線性范圍 （ug/ml ）線性回歸方程相關系數 R結論：.專業 .整理 .下載可編輯4. 準確度4.1.溶液配制對照溶液 ：取異煙肼

9、 10mg ，置 100ml 容量瓶中 ，精密稱量 ，用水溶解并稀釋至刻度，混勻，即得。準確度溶液 ：以對照溶液濃度為100% ，配置 80% 、100% 和 120% 濃度的準確度溶液。即分別取同一批異煙肼樣品8mg 、 10mg 、12mg 至 100ml 容量瓶中 ，精密稱量，用水溶解并稀釋至刻度 。每個濃度的準確度溶液配制3 份 。4.2.驗證程序及結果按照色譜條件分別對對照溶液和準確度溶液進行分析，每個溶液各進 2 針，按外標法計算準確度溶液中異煙肼含量，計算其回收率 。可接受標準 ：該定量方法的回收率應為98.0% 102.0% 。回收率RSD2.0%。樣品批號稱樣量峰面積實測量相

10、應含量回收率（ mg ）12平均值（mg ）80 100 120 .專業 .整理 .下載可編輯結論：5. 耐用性5.1.溶液配制混合溶液 ：精密稱取 10mg 異煙酸和 10mg 異煙肼樣品置 100ml 容量瓶中 ，用水溶解并稀釋至刻度 ，混勻，即得。5.2.驗證過程及結果按下列條件改變方法，原條件溶液和改變色譜條件的順序進樣，計算異煙肼的理論塔板數 ,拖尾因子 。計算相對保留時間 RRT 偏差絕對值 。a. 改變柱溫為 23 和 27b. 改變流速為 0.9ml/min 和 1.1ml/min 。c. 改變 0.02mol/l 磷酸氫二鈉溶液 (磷酸調 pH 至 6.0)與甲醇配比為 87

11、:13 和 83:17 。d. 選用同一填料的兩個不同色譜柱比較可接受標準 ：理論塔板數大于4000 ，拖尾因子在 0.91.4 之間 。分離度 R1.5，相對保留時間 RRT 偏差絕對值不大于20。.專業 .整理 .下載可編輯條件異煙肼理論塔板數異煙肼拖尾因子原條件0.9ml/mina1.1ml/min23 b27 87:13c83:17色譜柱 1d色譜柱 2異煙酸條件RRT偏差絕對值 原條件23a270.9ml/minb1.1ml/min87:13c83:17色譜柱 1d色譜柱 2.專業 .整理 .下載可編輯結論：.專業 .整理 .下載可編輯驗證結論 ：驗證結果見表驗證項目可接受標準驗證結果判定異煙肼的峰面積及保留時間的 RSD均不大于系統精密度2.0 。 異煙肼理論塔板數大于 4000 。方法精密度RSD不大于 2.0線性回歸系數R 應大于線性和范圍0.999回收率在 98.0