1、實驗七 微生物的分離純化與平板菌落計數（一）培養基的配制和滅菌培養基的配制和滅菌一、目的要求一、目的要求 n 1.了解培養基配制原理，掌握其制備過程。 n 2了解高壓蒸汽滅菌器的原理，掌握使用方法。 二、基本原理二、基本原理1,培養基n培養基是人工配制的適合微生物生長繁殖和積累代謝產物所需要的營養基質。n其中含有碳源碳源、氮源氮源、能源能源,無機鹽無機鹽、生長因子生長因子以及水分水分。n微生物在培養基上生長繁殖還必須在最適酸堿度范圍內才能表現它們最大生命力，因此不同種類的微生物應將培養基調到一定pH值范圍。n培養基種類很多，不同的微生物所需培養基不同。按其組成可分合成培養基和天然培養基和半合成

2、培養基。按其物理狀態可分固體培養基，液體培養基和半固體培養基。按其特殊用途可分加富培養基，選擇培養基、鑒別培養基等。 2,滅菌n 培養基配制后還必須進行滅菌。滅菌和消毒是二個不同含義的名詞。n消毒是指消滅病原菌或有害微生物，而滅菌則是殺死或消滅一定環境中的所有微生物。 n消毒與滅菌的方法很多，但總的可分為物理法與化學法兩大類。物理法包括加熱滅菌（干熱滅菌與濕熱滅菌），過濾滅菌、紫外線滅菌等。化學方法主要是利用有機或無機的化學藥品對實驗室用具和其它物體表面進行滅菌與消毒。三、器材三、器材 n 藥品：按培養基配方（見附錄）把需藥品一一排好。1mol/L NaOH,1mol/L HCl。n 其它：p

3、H試紙；試管；三角瓶；量杯；量筒；漏斗；電爐；天平；棉花；紗布；牛皮紙；細繩子等及消毒滅菌用高壓蒸汽滅菌鍋。四、操作步驟四、操作步驟n1.稱量：按配方準確稱量并放入量杯中，（有些藥品需按配方說明先后加入）。n n2.溶化：在量杯中加入所需水量（一般用自來水，特殊需用蒸餾水），攪勻，加熱溶解。n3.補水:按配方定容至所需體積。n n4.調pH值：用pH試紙測pH，并用1mol/L NaOH或1mol/L HCl調節至所需pH范圍.n5.過濾：一般不過濾，特殊情況下需過濾，可用濾紙，紗布或脫脂棉等。 n 6.分裝：根據不同的需要，可將制好的培養基分裝入試管內或三角瓶內，管（瓶）口塞上棉塞。棉塞的總

4、長度的3/5應在口內，2/5口外。注意不要使培養基沾染在管（瓶）口上以免浸濕棉塞，引起污染。 n（1）液體：分裝高度以試管高度的1/4左右n（2）固體：分裝試管，其量為管高的1/5，滅菌后制成斜面。分裝三角瓶的容量以不超過三角瓶容積之一半為宜。 n（3）半固體：分裝試管一般以試管高度的1/3為宜，滅菌后，垂直待凝成半固體深層瓊脂。 7.滅菌 n培養基分裝好后，塞上棉塞，外面再包一牛皮紙，便可滅菌。滅菌的時間和溫度按各培養基規定進行，以保證滅菌效果和不損壞培養基的必要成分。n培養基經滅菌后，可放在37恒溫箱培養24小時，無菌者方可使用，在實驗室里用得最多的加熱滅菌法是高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌。目的都是使細菌體內蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的.n一般培養基和滅菌水等用高壓蒸汽滅菌，而玻璃器皿常用干熱滅菌。 五、結果與討論五、結果與討論 1.在一般情況下為什么試管或三角瓶培養基要用棉花塞而不用軟木塞或橡皮塞？ n 2.高壓蒸汽滅菌過程中為什么一定要排放鍋內的冷空氣？各組需要配置的培養基和需要滅菌的玻璃器皿n1,干熱滅菌n培養皿10付(1罐),1ml吸管6支至烘箱中進行干熱滅菌(1600C 2h);n2,制備培養基n(1)1-4組制備普通營養瓊脂培養基,每組300ml分裝于10支