1、 高效液相色譜法測定蒙藥“色布如棍欽德吉德”含量赤峰市藥品檢驗所 024000 倪燕君摘要 建立了蒙藥“色布如棍欽德吉德” 含量的反相高效液相色譜法。采用ODS-C18柱，流動相為甲醇-水（ 70：30），流速為1.0ml/min，檢測波長為343 nm。線性范圍為0.10156µg1.0156µg, r=0.9998, 平均回收率為102.2%， RSD為0.7%。關(guān)鍵詞 蒙藥 高效液相色譜法 胡椒堿 蓽茇藥材 白胡椒藥材蒙藥“色布如棍欽德吉德”屬散寒、溫胃、下氣藥，臨床主治胃寒、脘腹冷痛、嘔吐等，主要成分為蓽茇、白胡椒等二十一味中藥。運用高效液相色譜法對本品中的蓽茇、白

2、胡椒建立含量測定方法。通過實驗摸索，確定了比較理想的色譜條件，并經(jīng)過方法學(xué)考察及陰性對照實驗，表明該方法操作簡單，重現(xiàn)性好，專屬性強，方中其它組分對胡椒堿的測定無干擾，1. 儀器與試藥島津LC-10ATvp泵，SPD-10Avp 型檢測器, shimadzu class-vp色譜工作站，TU-2450型可見-紫外分光光度計。 胡椒堿對照品（批號：0775-200203）：中國藥品生物制品檢定所；蒙藥“色布如棍欽德吉德”（批號：2006051、2006069、2006089）：內(nèi)蒙古阿拉善盟蒙醫(yī)醫(yī)院；陰性對照樣自配；甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。 2. 方法與結(jié)果2.1 色譜條件

3、 色譜柱：DiamonsilR(鉆石) -C18色譜柱（250mm×4.6mm,5µm）；流動相甲醇-水（70：30）；流速為1.0ml/min，檢測波長為343 nm。 2.2溶液配制對照品溶液 精密稱取胡椒堿對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含胡椒堿1mg的溶液作為對照品溶液。供試品溶液 取本品約1.61g，精密稱定，置100ml容量瓶中，加無水乙醇約80ml，超聲處理（功率250W,20KHz）30分鐘，放冷，加無水乙醇至刻度，搖勻，離心，精密吸取上清液10ml, 置25ml容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，溶液經(jīng)0.45µm濾膜濾過,即得。 陰性對照溶液

4、按照處方取除白胡椒、蓽茇以外的其它藥材適量，精密稱定，以下按供試品溶液配置方法同法配制。2.3專屬性取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照溶液進樣，測得結(jié)果為：陰性對照色譜圖中在與胡椒堿對照品以及供試品色譜圖相對應(yīng)的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其它組分對胡椒堿的測定無干擾（見圖1）。 a.陰性對照 b. 胡椒堿對照品 c. 色布如棍欽德吉德圖1. 典型HPLC圖 2.4 線性試驗取胡椒堿對照品約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加無水乙醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml溶液分別置25ml量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，溶液經(jīng)0.45

5、81;m濾膜濾過，進樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對進樣量進行回歸分析，結(jié)果胡椒堿在0.10156µg1.0156µg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為Y=6690331X-34109 r=0.99982.5 穩(wěn)定性和精密度取同一份供試品溶液（2006051），分別于0h、2h、4h、8h、16h進樣，測得含量的RSD為0.1%，表明供試品溶液在16小時內(nèi)穩(wěn)定。取同一份供試品溶液（2006069）連續(xù)進樣6次，測得含量的RSD為0.4%。取同一批號（批號2006089）供試品5份，按“2.2”項下制成供試品溶液，進樣，測得含量的RSD為0.6%。 2.7 回收率 取3個不

6、同量的供試品（批號2006051）各3份，各約0.66g、0.81g、0.98g，精密稱定，按1：1的比例，各精密加入胡椒堿對照品溶液適量，分別按“2.2”項下方法制成供試品溶液，進樣，測得平均回收率為102.2%，RSD為0.7%。 3樣品測定分別取對照品溶液和供試品溶液進樣測定，按外標法以峰面積計算得胡椒堿含量，結(jié)果見表1 。 表1 樣品中胡椒堿含量測定結(jié)果批號 含量（mg/g） 2006051 5.4 2006069 5.4 2006089 5.4 4 討論流動相的選擇：參照文獻1，用甲醇-水為流動相進行流動相條件摸索，通過不同比例的比較，當流動相的比例為（70：30）時，樣品中的胡椒堿與其它成分達到較好的分離度，并具有較合適的保留時間。檢測波長的選擇：取胡椒堿對照品溶液，于紫外-可見分光光度儀上，自200nm700nm做光譜掃描，結(jié)果胡椒堿在波長340nm處有最大吸收，結(jié)合文獻1選用343nm作為檢測波長。提取溶劑的選擇：胡椒堿易溶于無水乙醇，故選擇無水乙醇作為提取溶劑。提取效率的考察：以無水乙醇作為提取溶劑進行超聲提取，實驗中考察了超聲10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘等不同提