1、頁眉.液相色譜柱的清洗一、液相色譜柱按基體成分的分類1、硅膠基體：不鍵合任何化學基團的為硅膠柱，鍵合的化學基團有C18、C8、C4、氨基、氰基、苯基等。2、聚合物基體：常見的聚合物基體為聚苯乙烯、聚丙烯酸酯、聚乙烯醇。聚合物上再鍵合化學基團。根據填料基體的成分不同可以分為：二、色譜柱常見問題的成因1、硅羥基的死吸附 ：硅膠粒子表面存在硅羥基，這些硅羥基會吸附樣品和流動相中的很多物質，當吸附達到飽和時就會出現柱效下降、峰形劣化的現象。有些吸附是可逆的，可以通過清洗解決。2、重金屬離子：重金屬以金屬氧化物的形式殘存在硅膠粒子的表面 , 這些金屬氧化物很容易與其它化合物形成螯合物 , 使其被氧化 ,

2、 造成峰形劣化。3、緩沖液中鹽的析出：當流動相中含有緩沖鹽溶液，而且分析結束后 , 如果沒有先用水進行沖洗 , 而是直接用純有機相沖洗 , 瞬間柱子中的微環境是高有機相、低水相。這時流動相中的緩沖鹽溶液極易析出鹽份 , 將柱子堵塞 , 使柱壓升高 , 柱效下降。4、色譜柱變干：如果對色譜柱保存不當 , 使 色譜柱中的保存液全部揮發 , 柱子內部變干 , 造成色譜柱的損傷 , 會影響分離效果。三、對色譜柱進行適當清洗的意義以上提到的部分故障可以通過適時、適當的清洗得到解決，恢復色譜柱的功能，延長色譜柱的使用壽命。下面對比較常見的幾種型號的色譜柱的清洗方法進行討論，具體的沖洗方法要根據實際情況作適

3、當的選擇和調整。當然，不同的用戶和色譜產品廠商對自己的色譜柱會有不盡相同的處理方法。四、新柱使用前的沖洗新柱在使用前應先認真閱讀說明書及性能測試報告, 了解柱子的性能指標。分析用的流動相往往與柱子的保存試劑不同 , 故在分析樣品之前 , 應使用合適的試劑將柱子中的保存試劑清洗出來。要注意清洗用的流動相與保存溶劑的相溶性。1、反相柱如島津C18、C8等柱保存在 70%甲醇中 , 可用 10 20 倍柱體積的甲醇或乙腈來平衡色譜柱。流速應緩慢提高 , 如開始 0.3mL/min,10 15min 后可慢慢加快。1 / 3頁眉.2、正相柱或稱極性色譜柱一般保存在正庚烷或正己烷中。如果分析時的流動相含

4、有極性溶劑 , 應使用乙醇或異丙醇沖洗 , 流速 0.1 0.3mL/min , 將保存液沖洗干凈后 , 再用流動相平衡。3、鈣柱等糖柱只能用純水作流動相進行沖洗，有機溶劑會造成色譜柱損壞，尤其要注意。沖洗后可以記錄色譜柱的一些性能指標 , 如柱效、柱壓等 , 供今后參考。分析樣品前 , 要用流動相對色譜柱進行平衡 , 待基線平穩后再進樣分析。一般用流動相平衡的時間為 30min, 若系統中有鹽或水 , 平衡時間應延長。五、反相柱日常清洗色譜柱清洗是日常的重要維護工作。分析工作結束 后, 要用適當的溶劑清洗系統中殘留的樣品。在反相系統中 , 若流動相中無酸、堿、鹽類物質 , 可用甲醇沖洗 30

5、60min ；若含酸、堿、鹽類物質 , 應先用 10 %甲醇 , 或用與分析用流動相相同比例的不含酸、堿、鹽的溶液 , 沖洗 3060min , 再用甲醇沖洗。直接用純甲醇沖洗 , 會導致緩沖鹽沉淀于柱子或檢測池中。關于純水的問題：純水極性很強 ,ODS等填料的硅烷鍵是非極性的 , 在純水中各鍵合基團會因疏水作用而改變空間構型 , 使柱效很快降低。很多公司推出可以使用 100%純水進行沖洗的柱子 , 原理是鍵合基團互相之間有排斥力 , 這類柱子一般鍵合相比較豐富，游離硅羥基比較少，從而阻止了鍵合基團性能的改變。能否用純水沖洗要參考該色譜柱的說明書。關于離子對試劑：常用的離子對試劑有烷基磺酸鈉等

6、 , 這時通常采用pH35 的緩沖鹽體系。對于酸性樣品一般使用常用四丁基銨鹽，這時采用堿性體系。容易出問題的是前一種情況。分析結束后 , 柱子應先用有機溶劑 - 水體系沖洗 , 再用水沖洗 , 最后用有機溶劑沖洗。這是因為烷基磺酸鈉都是表面活性劑, 可以洗掉脂肪油 ( 如烷烴及其衍生物) 。在水的環境下烷基磺酸鈉會將鍵合的烷烴基洗脫下來 , 造成固定相的流失。所以應該先用有機溶劑 - 水體系沖洗柱子 , 表面活性劑會溶解在有機相中逐漸被沖洗出來 , 從而減少表面活性劑對鍵合相的洗脫。六、反相柱的修洗復清1、如果柱子污染嚴重可以使用以下方法清洗：2、以水、甲醇、乙腈、氯仿依次清洗，再以相反的順序清洗。3、氯仿的作用是洗去殘留的非極性雜質。4、在用甲醇沖洗時可以將四氫呋喃作為樣品注射，有助于去除強疏水性雜質。2 / 3頁眉.5、四氫呋喃和甲醇的混合溶液可以去除類脂類污染物，也可同時注射二甲亞砜。6、乙腈、丙酮、三氟乙酸（0.1%）的混合溶液有助于去除蛋白類污染物。七、正相柱的清洗1、硅膠柱可以用以下方法清洗：2、正己烷（正庚烷）、二氯甲烷、甲醇依次清洗，再按照相反順序沖洗。3、甲醇的作用是洗去殘留的強極性雜質。4、正己烷可以使