1、分析方法的確證試驗分析方法的確證試驗（ Q2A ）簡介：需要確證的分析方法類型： 附件A: 術語 a簡介簡介m內容內容o分析方法確證的參數分析方法確證的參數o術語和定義術語和定義m分析方法確證的目的分析方法確證的目的 證明該方法適合預期目的證明該方法適合預期目的需要確證的分析方法類型需要確證的分析方法類型m鑒別試驗鑒別試驗m雜質定量試驗雜質定量試驗m雜質限度試驗雜質限度試驗m原料或制劑中活性成分以及制劑中選原料或制劑中活性成分以及制劑中選定組分的定量測試定組分的定量測試典型的確證參數典型的確證參數(Characteristics)m準確性準確性(Accuracy)m精密度精密度(Precisi

2、on)o重復性重復性(Repeatablity)o中間精密度中間精密度(Intermediate Precision)m專屬性專屬性(Specificity)m檢測限度檢測限度(Detection limit)m定量限度定量限度(Quantitation limit)m線性線性(Linearity)m范圍范圍(Range)m耐用性耐用性(Robustness)表： 分析方法的類型 定性鑒別 雜質檢查 含量分析；溶出 度(含量測定)； 項目 定量 限度檢測 含量效價 準確度 - + - + 精密度 重復性 - + - + 中間精密度 - + - + 專屬性 + + + + 檢測限度 - - +

3、- 定量限度 - + - - 線性 - + - + 范圍 - + - + 注意：- 表示通常不需確證的項目； + 表示通常需確證的項目； 假如測定了重現性（見術語表），中間精密度可不測定； 缺乏專屬性的分析方法，應由其他分析方法來作補充； 有些情況下需要。a下列情況需重新確證下列情況需重新確證m原料藥合成方法的改變原料藥合成方法的改變m制劑組分的改變制劑組分的改變m分析方法的改變分析方法的改變a術語表術語表 1 1分析方法（分析方法（Ana1ytica1 procedureAna1ytica1 procedure） 分析方法指的是進行分析的方式，應詳細描述進行每個分析試驗所必需的步驟。它包括（

4、但不局限于）：樣品、參比物、試劑的制備，儀器的使用，校準曲線的繪制，計算公式的運用等。2 2專屬性（專屬性（SpecificitySpecificity） 專屬性是指在一些可能存在的組分如雜質、降解產物、基質等的存在下，對被分析物質的準確可靠的測定。 一種分析方法缺乏專屬性時，應由其他分析方法作補充。 專屬性有以下含義： 定性鑒別：確保被分析物質符合其特性。 純度檢查：確保采用的分析方法可檢測出雜質，如有關物質、重金屬、溶劑殘留量等。 含量測定（含量或效價）：可提供樣品中被分析物的含量或效價的準確結果。3.3.準確性準確性( (AccuracyAccuracy) ) 準確性指的是真實值或認可的

5、參考值與測量值之間相近程度。 準確性有時也稱真實度。4.4.精密度精密度( (PrecisionPrecision) ) 精密度指的是規定條件下對同一勻質樣品多次取樣進行一系列檢測結果的一致程度（離散程度）。精密度可以從三方面考慮：重復性、中間精密度、重現性。 精密度檢查應使用同一勻質的、可信的樣品。如果得不到，可用人工制得的樣品或樣品溶液進行研究。 分析方法的精密度通常以測量法的變異性、標準偏差或變異系數來表達。4.14.1重復性重復性( (RepeatabilityRepeatability) ) 重復性是指在同樣的操作條件下較短時間間隔的精密度：也稱為日內差(Intra-assay pr

6、ecision)。4.24.2中間精密度中間精密度( (Intermediate PrecisionIntermediate Precision) ) 中間精密度指的是試驗室內部條件改變（如：不同天、不同分析測試者、不同儀器等）情況下的精密度。 4.34.3重現性（重現性（ReproducibilityReproducibility） 指不同試驗室之間的精密度，常用于合作試驗研究 (collaborative studies)中的方法學的標準化研究。5 5檢測限度（檢測限度（Detection limitDetection limit）檢測限度指的是樣品中的被分析物質能夠被檢測到的最低量，通常

7、無需定量。 6 6定量限度（定量限度（Quantitation limitQuantitation limit） 某種分析方法的定量限度是指具有合適準確性和精密度的條件下，能夠定量測定分析組分的最低限量。它是樣品中含量低的化合物定量分析的參數，特別適用于雜質和（或）降解產物的測定。 7 7線性（線性（LinearityLinearity） 分析方法的線性是指所得檢測結果與樣品中被分析物的濃度（含量）成比例關系的性能。8 8范圍（范圍（RangeRange） 分析方法的范圍是指在樣品中被分析物的較高濃度(量)和較低濃度(量)之間的區間、已證實區間內具有合適的準確性、精密度、線性。9 9耐用性（耐

8、用性（RobustnessRobustness） 分析方法的耐用性是指試驗參數適當地發生細小改變時，測量能力保持不受影響，可用于說明正常使用時的可靠性。 分析方法的確證：方法學分析方法的確證：方法學（ Q2B ） 1：簡介：簡介m目的：目的：o對每一種分析方法中參數的確證提供指導和建議對每一種分析方法中參數的確證提供指導和建議o申報中建立數據的表示方式申報中建立數據的表示方式m注意：注意：o整個方法學確證中，必須采用經過完全確認的、整個方法學確證中，必須采用經過完全確認的、純度已知的參比物質來確證。純度已知的參比物質來確證。o參比物質的純度要求與使用目的應一致參比物質的純度要求與使用目的應一致

9、 2：專屬性：專屬性m鑒別鑒別o通過與參比物（結構相同）比較得到正結果或負結果通過與參比物（結構相同）比較得到正結果或負結果o通過與被測物結構相似或相關物質比較得不到正結果通過與被測物結構相似或相關物質比較得不到正結果m含量測定和雜質檢查含量測定和雜質檢查o色譜方法色譜方法 色譜圖色譜圖(標出每一成分標出每一成分) 分離度分離度專屬性的標準專屬性的標準o非專屬性方法非專屬性方法 用其他支持性的分析方法來輔助用其他支持性的分析方法來輔助n可得到雜質可得到雜質 用加入法用加入法n得不到雜質得不到雜質 強力破壞后用不同方法比較測定峰的純度強力破壞后用不同方法比較測定峰的純度(二級管陣列、質譜二級管陣

10、列、質譜) 3：線性：線性 原料藥（標準儲備液）原料藥（標準儲備液） 至少至少5個個 混勻的制劑組方混勻的制劑組方 濃度系列濃度系列 采集信號采集信號 測定測定 統計（線性關系或函數關系）統計（線性關系或函數關系） 4：范圍：范圍m在盡可能大的濃度范圍內均能獲得良好的線性、精密度在盡可能大的濃度范圍內均能獲得良好的線性、精密度和準確性和準確性m最小的規定范圍：最小的規定范圍：o對原料藥或制劑的含量測定對原料藥或制劑的含量測定 80120%o對含量均勻度對含量均勻度 70 130%o對溶出度對溶出度 規定值的規定值的20%o對雜質檢查對雜質檢查 為報告的雜質水平至所訂限度的為報告的雜質水平至所訂

11、限度的120%o對已知有異常功效或有毒雜質對已知有異常功效或有毒雜質 與其與其“水平水平”相當相當o同法測含量和雜質同法測含量和雜質(且用且用100%標準品標準品) 從雜質量到從雜質量到120% 5：準確性：準確性m含量測定含量測定原料藥原料藥o用該方法去測已知純度的用該方法去測已知純度的物質物質o將該法與另一成熟方法比將該法與另一成熟方法比較較o在精密度、線性和專屬性在精密度、線性和專屬性建立后得出建立后得出制劑制劑o用該方法去測按處方量制用該方法去測按處方量制成的混合物（加入已知量成的混合物（加入已知量被測物）被測物）o在制劑中加入已知量主藥在制劑中加入已知量主藥或與另一成熟方法比較或與另

12、一成熟方法比較o在精密度、線性和專屬性在精密度、線性和專屬性建立后得出建立后得出m雜質（定量）雜質（定量）o在樣品（原料在樣品（原料/制劑）中加入已知量的雜質制劑）中加入已知量的雜質o無法得到雜質無法得到雜質/降解物的，與采用其他方法測得的結果比降解物的，與采用其他方法測得的結果比較，可以使用原料的響應值較，可以使用原料的響應值m申報數據申報數據o在規定的線性范圍，對在規定的線性范圍，對3個濃度測個濃度測9個數據來評價個數據來評價o回收率或平均值與真值的差異及它們的置信區間來評價回收率或平均值與真值的差異及它們的置信區間來評價 6：精密度：精密度 含量測定和雜質的定量測定均應作精密度考察含量測

13、定和雜質的定量測定均應作精密度考察m重復性重復性o在規定范圍內測在規定范圍內測9次（次（3種濃度種濃度/每種重復每種重復3次）或次）或o在試驗濃度在試驗濃度100%時測時測6次次m中間精密度中間精密度 確定隨機事件確定隨機事件(日期、分析者、儀器等日期、分析者、儀器等)對精密度的影響對精密度的影響m重現性重現性 試驗室之間試驗室之間m申報數據申報數據 均應報標準差、相對標準差和置信區間均應報標準差、相對標準差和置信區間 7：檢測限度：檢測限度m根據直觀評價（用于儀器或非儀器）根據直觀評價（用于儀器或非儀器）m根據信噪比（用于有基線噪音的方法）根據信噪比（用于有基線噪音的方法） 已知低濃度被測物

14、的信號已知低濃度被測物的信號 3 2 空白樣品的信號空白樣品的信號 1 1m根據響應值的標準偏差和斜率根據響應值的標準偏差和斜率 檢測限度（檢測限度（DL）= 3.3/s ：響應值的標準偏差（通過空白樣品測背景響應值或：響應值的標準偏差（通過空白樣品測背景響應值或Y軸截距）軸截距） s ： 校正曲線的斜率（通過被測物的校正曲線求得）校正曲線的斜率（通過被測物的校正曲線求得）=或m申報數據申報數據o檢測限度檢測限度 o檢測限度的測定方法檢測限度的測定方法oDL是由直觀評價或信噪比得來（報相關的色譜圖）是由直觀評價或信噪比得來（報相關的色譜圖）oDL是由計算或外推法得來的估計值，則應專門對一些已是

15、由計算或外推法得來的估計值，則應專門對一些已知接近或就在限度上的樣品進行分析知接近或就在限度上的樣品進行分析ACs=1 =0.1 DL=0.33 s=1/2 =0.3 DL=1.98 8：定量限度：定量限度m直觀評價直觀評價 在準確度和精密度符合要求的前提下，能測得的最小量在準確度和精密度符合要求的前提下，能測得的最小量m根據信噪比（用于有基線噪音的方法）根據信噪比（用于有基線噪音的方法） 已知低濃度被測物的信號已知低濃度被測物的信號 10 空白樣品的信號空白樣品的信號 1 m根據響應值和斜率的標準偏差根據響應值和斜率的標準偏差 定量限度（定量限度（QL）= 10/s= ：響應值的標準差（通過一組空白樣品的分析或：響應值的標準差（通過一組空白樣品的分析或根據校正曲線）根據校正曲線） s ： 校正曲線的斜率校正曲線的斜率m申報數據申報數據o定量的限度定量的限度 o定量限度的測定方法定量限度的測定方法o分析一些已知接近限度或限度上的樣品來證實分析一些已知接近限度或限度上的樣品來證實 9：耐用性：耐用性 證實在某些參數由微小的變異后，分析方法仍可靠證實在某些參數由微小的變異后，分析方法仍可靠 典型例子：典